云南松松塔中抗HIV活性成分的研究初报

介绍本项目组在2008年度获得的国家自然科学基金"云南松松塔中抗HIV活性成分研究"项目的意义和应用前景、国内外对松塔的研究现状及发展动态分析、本项目的研究内容等.     

蚕豆根尖微核试验研究云南松松塔球提取物抑突变性

目的:探讨云南松松塔球提取物的抑突变作用。方法:分别将大理邓川和湾桥产的蚕豆随机分为4组,经实验处理后,采用蚕豆根尖微核技术对蚕豆根尖细胞微核数进行检测,考察松塔球提取物对蚕豆根尖细胞微核率的影响情况。结果:松塔球提取物I对邓川产蚕豆根尖细胞微核的产生有抑制作用,抑制率达50%,且对环磷酰胺诱导的蚕豆根尖微核有明显的抑制作用,抑制率为62.5%。松塔球提取物I对湾桥产蚕豆根尖细胞微核的产生有抑制作用,抑制率达50%,且对环磷酰胺诱导的蚕豆根尖细胞微核有明显的抑制作用,抑制率为50%。结论:松塔球提取物可有效抑制环磷酰胺诱导的蚕豆根尖微核的产生,具有抑突变性,从而说明松塔球提取物对肿瘤的防治可能具有积极的作用。     

云南松松塔中原儿茶酸提取工艺的研究

目的:优化云南松松塔中原儿茶酸的提取工艺。方法:以不同溶剂对云南松松塔中原儿茶酸的提取效率为指标,用高效液相色谱法进行含量测定,采用L9(34)正交设计试验以确定最佳提取工艺。结果:最佳提取工艺:以乙酸乙酯为提取溶剂,加入0.1 mol/L的HCl 3 mL,料液比为1∶40(mg/mL),超声时间90 min,超声温度40℃。结论:优化后的提取工艺简单、稳定、提取率高。     

大型真菌抗氧化与抗HIV-1活性成分筛选的研究

以64株大型真菌为研究对象,对菌丝浸提液和发酵液的粗提物进行了红细胞溶血和脂质过氧化抑制活性的测定.同时利用胞内抗氧化筛选模型、以及胞外HIV-1逆转录酶抑制试剂盒做了进一步的活性研究.结果显示,褐孔菌、红菇、猴头、新科木、早北c滑和黄伞等的粗提物具有较高的抗氧化和抗HIV-1逆转录酶的活性,为进一步分离纯化活性成分的研究提供了依据.     

云南松松塔正丁醇提取物对大鼠离体子 宫平滑肌的影响

目的研究云南松松塔正丁醇提取物对大鼠离体子宫平滑肌的作用。方法通过制备大鼠离体子宫标本,观察云南松松塔正丁醇提取物对大鼠离体子宫平滑肌自发收缩活动,催产素及乙酰胆碱诱发收缩活动的影响。结果云南松松塔正丁醇提取物可使正常大鼠自发收缩和催产素及乙酰胆碱诱发收缩的频率减慢、张力减小、活动力减弱。结论云南松松塔正丁醇提取物对大鼠离体子宫平滑肌的收缩活动具有抑制作用,其机制可能跟阻断催产素受体和M受体有关。     

TIBO类衍生物抗HIV-1活性的QSAR研究

在分子图邻接矩阵的基础上,定义并计算了TIBO类衍生物原子的点价值iδ,利用图论方法建构了新的分子连接性指数mE,基于多元回归技术发展了对TIBO类衍生物药物的活性参数作出精确估算的定量结构-活性相关关系,得到的多元回归方程为:P=-274.563 80E-1 65.530 61E-1-149.681 6Jx-'1 26.084 7计算结果表明,抗H IV-1活性参数的计算值和实验值的一致性令人满意。     

d4T核苷酸类似物抗HIV-1活性的定量构效关系

对20个核苷酸类化合物(d4T的衍生物)进行了定量构效关系研究,建立QSAR方程。模型指出该类化合物的抗HIV-1活性与n_M、lgP、(lgP)²及分子连接性指数⁶χ^v_P具有良好的相关性,其复相关系数R为0.94。由方程可知:⁶χ^v_P在抗HIV-1过程中比电子参数σ发挥更大的作用。     

蛹虫草中抗HIV-1活性成分的研究

以蛹虫草子实体为材料,经水提醇沉后获得沉淀样品P和上清样品L,初步抗HIV-1蛋白酶检测显示活性成份集中在样品L中.进一步利用大孔吸附树脂和高压液相对L进行分离纯化,并对纯化样品的体外抗HIV-1蛋白酶活性和抗HIV-1逆转录酶活性进行了测定.结果显示,L经大孔吸附树脂和高压液相分离纯化后得到三种物质均具有抗HIV-1蛋白酶活性f1,f2和f3,其中f1对HIV-1蛋白酶抑制作用最强,比L提高了约29%;三种物质对HIV-1逆转录酶均有一定的抑制作用.     

云南松松塔对肺纤维化大鼠炎症因子的作用

目的 探讨云南松松塔提取物（Extracts from the pinecone of Pinus yunnanensis,PE）对肺纤维化大鼠血清炎症因子水平的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性组（5 mg/kg醋酸泼尼松龙）及PE高、中、低剂量组（200、100、50 mg/kg）。采用气管内一次性注射0.2 mL博来霉素生理盐水溶液（5 mg/kg）建立大鼠肺纤维化模型,假手术组气管内给予0.2 mL无菌生理盐水。造模后第2 d开始给予相应药物,分别于实验第7、14、28 d,处死1/3的大鼠,测定大鼠肺系数,酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定血清中羟脯氨酸（Hydroxyproline,HYP）、转化生长因子beta 1（Transform growth factor beta 1,TGF-β1）、肿瘤坏死因子alpha（Tumor necrosis factor alpha,TNF-α）的含量,苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin,HE）染色考察肺脏组织病理学变化。结果 与假手术组比较,模型组大鼠在第7、14、28 d肺系数、血清HYP、TGF-β1、TNF-α含量均明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,PE中、高剂量组可以不同程度的减小肺系数（P<0.05,P<0.01）,降低血清中TGF-β1、TNF-α及HYP含量（P<0.05,P<0.01）。HE染色显示PE中、高剂量组大鼠肺泡结构损伤及炎性细胞浸润均较模型组明显减轻。结论 云南松松塔可以改善博来霉素诱导肺纤维化大鼠的炎症反应和胶原沉积情况。     

思茅松松塔化学成分研究

目的:对思茅松松塔的化学成分进行研究。方法:采用95%乙醇提取思茅松松塔的化学成分,用正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、重结晶等方法进行分离纯化,利用波谱数据鉴定化合物的结构。结果:从中分离鉴定了5个化合物,分别为:15-hydroxydehydroabietic acid(1),15-hydroxylabd-8(17)-en-19-oic acid(2),junicedric acid(3),β-谷甾醇(4),胡萝卜苷(5)。结论:除化合物(1)外均首次从该植物中分离得到。     

复方威茯急性毒性实验及抗炎镇痛作用观察

研究复方威茯的急性毒性作用,并观察其抗炎镇痛作用。以最大给药量方法进行急性毒性实验,观察小鼠一般情况等,14 d后处死解剖,观察小鼠主要脏器组织病变情况。以二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加,实验观察复方威茯抗炎作用。以冰醋酸致小鼠扭体、热板致小鼠疼痛探讨复方威茯镇痛作用。结果在急性毒性实验中,未见小鼠有中毒症状或死亡,外观表现未见异常,解剖后未见脏器异常;复方威茯可明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度和醋酸致腹腔毛细血管通透性的增高(P0.05或P0.01),可明显减少醋酸致小鼠扭体反应次数(P0.01),可提高热板致小鼠疼痛的痛阈值(P0.05或P0.01)。说明复方威茯无明显的急性毒性作用,有明显的抗炎镇痛作用。     

药用植物松塔的化学成分研究

目的：对松科（Pinaceae）华山松（Pinu sarmandii Franch．）松塔的化学成分进行研究,以期寻找活性成分。方法：松塔的乙醇冷浸提取浸膏,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取,分别得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇的萃取物。氯仿和正丁醇萃取物用正、反相色谱法,MCI、Pharmadex LH-20凝胶柱色谱法和HPLC法分离,分离得到6个化合物。结果：根据理化性质和利用NMR、ESI—MS等波谱技术鉴定化合物结构,鉴定了其中的4个化合物：异海松烷（Ⅰ）;Dehydroabietic acid（Ⅱ）;β-谷甾醇（Ⅲ）;β-胡萝卜苷（Ⅳ）。结论：其中化合物Ⅰ～Ⅱ为首次从该种植物中分离得到。     

喙尾琵琶甲乙醇提取物急性毒性实验研究

以喙尾琵琶甲乙醇提取物对小白鼠灌胃,观察小白鼠死亡情况及相关指标的变化情况,评价其安全性。实验结果证明小白鼠灌胃喙尾琵琶甲乙醇提取物的最大耐受量为500 g（生药）/kg体重,即喙尾琵琶甲乙醇提取物无明显毒性,在常规剂量下服用是安全可行的。     

松属植物的松塔、松子壳药用开发

目的:为了对云南省的松树资源进行药用开发,就松塔国内外研究进展作一综述.方法:查阅国内外有关文献资料加以综合归纳.结果:日本白松松塔提取物是有效免疫促进剂;还发现松塔提取物的抗癌抗艾滋病作用很强.预示松塔提取物可能成为艾滋病的理想治疗剂.结论:进一步研究开发利用该植物具有广阔前景.     

思茅松松塔化学成分的初步研究

目的:对思茅松松塔的化学成分进行初步研究。方法:采用溶剂法提取思茅松松塔的化学成分,运用正相硅胶、反相RP-18、Sephadex LH-20柱色谱和中压液相色谱等方法进行分离纯化,利用波谱数据鉴定化合物的结构。结果:从中分离鉴定了6个化合物,分别为:松脂醇(1),罗汉松树脂酚(2),(7S,8R)-3′,4,9,9′-四羟基-3-甲氧基-7,8-二氢苯并呋喃-1′-丙醇基新木脂素(3),dihydrodehydrodiconiferyl alcoho(l4),二氢槲皮素-3′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5),3,4-二羟基苯甲酸(6)。结论:6个化合物均首次从该植物中分离得到。     

莲藕抗氧化多糖的抗HIV-1整合酶作用研究

利用乙醇沉淀、凝胶过滤等方法从莲藕中分离纯化得到具有抗氧化活性的多糖复合物LB2,经分析,LB2分子量为18.8 kD,由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和木糖这五种单糖组成,其比例为2:8:7:8:1.LB2显示出较强的抑制HIV-1整合酶体外3'切割活性,可作为一种新型HIV-1整合酶抑制剂.     

民族药紫金莲镇痛抗炎作用及急性毒性实验研究

对民族药紫金莲不同提取物镇痛抗炎作用及急性毒性进行实验研究。方法:以紫金莲醇提物、水提物采用醋酸扭体法、热板法,观察其对小鼠的镇痛作用;用二甲苯致鼠耳肿胀法观察其对小鼠抗炎作用;对2种提取物进行了最大耐受量测定。结果:紫金莲能明显减少醋酸致小鼠扭体次数,提高小鼠对热的痛阈值;小剂量抗炎作用明显;最大耐受量是人用剂量的250倍之多。结论:紫金莲两种提取物对小鼠镇痛抗炎作用显著,临床所用治疗剂量安全无毒。     

益贞颗粒急性毒性实验研究

以益贞颗粒对小鼠灌胃,观察小鼠死亡情况及相关指标的变化情况来评价其安全性.通过半数致死量实验分别以不同浓度的益贞颗粒对小鼠灌胃,观察7d未见小鼠死亡,无法测出半数致死量;进行最大耐受量实验,实验小鼠以益贞颗粒最大混悬浓度和可承受的最大体积1d内灌胃2次,连续观察14d,每天记录小鼠的一般状况、体质量、进食量和饮水量.14d后处死动物,观察并记录脑、心、肝、脾、肺、肾、睾丸/卵巢等主要脏器的病变情况,若肉眼可见病理变化则即刻进行组织病理学检查.结果表明,14d内小鼠活动正常,无1只小鼠死亡.益贞颗粒组实验小鼠的体质量、进食量和饮水量与空白对照比较均无显著性差异(P>0.05);肉眼观察脑、心、肝、脾、肺、肾、睾丸/卵巢等主要脏器未发现有明显异常.实验小鼠灌胃益贞颗粒的量相当于成人临床日用量的93倍,说明益贞颗粒无明显毒性,临床常用量是安全可靠的.     

金刚藤醇提取物抗痛风作用的实验研究

通过测定二甲苯致小鼠耳的肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性的增加、微晶型尿酸钠(MSU)致鼠足的肿胀及足炎症渗出液中前列腺素E2(PGE2)含量的降低等方法,对金刚藤醇提取物的抗痛风作用进行了研究.实验结果表明,金刚藤醇提物对二甲苯诱导的耳廓肿胀、醋酸所致的腹腔毛细血管通透性增高、MSU所致的足跖肿胀、MSU所致的肿胀足渗出液中PGE2生成均有显著的抑制作用,提示金刚藤醇提物有明显的抗急性痛风性关节炎的作用.     

大理白族地区草鱼胆的急性毒性实验研究

目的:用小鼠进行急性毒性实验,观察大理白族地区草鱼胆的毒性作用,计算LD_(50),为实验研究和临床诊断提供依据;方法:给实验小鼠灌胃,观察小鼠不同时间的各种表现;采用改良Karder法计算草鱼胆半数致死量;结果:低剂量组动物灌胃后未见明显变化,其余各组均出现临床症状;草鱼胆的半数致死量(LD_(50))为6.03ml·kg~(-1)。结论:大理地区草鱼胆汁有毒,一定量的草鱼胆汁可使小鼠发生中毒致死。