多头绒泡菌线粒体中肌动蛋白的免疫细胞化学鉴定

自多头绒泡菌(Physarum polycephalum Schw.)原质团中分离线粒体,以兔抗肌动蛋白抗体为一抗,荧光素标记的羊抗兔IgG和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG作二抗进行间接免疫荧光和蛋白质免疫印迹实验.结果显示,线粒体中含有与肌动蛋白抗体呈阳性反应的抗原.以兔抗肌动蛋白抗体作一抗,金颗粒标记的蛋白A作二抗进行的间接免疫电子显微镜实验结果进一步证明了肌动蛋白是多头绒泡菌线粒体的组成成分,并在线粒体中呈散在分布.     

活体烟草BY-2悬浮细胞微丝骨架的标记

微丝骨架是细胞骨架的重要成员,在细胞的多项生理活动中发挥着重要作用.本论文利用荧光标记鬼笔环肽技术和GFP融合蛋白技术,对活体烟草BY-2悬浮细胞中微丝骨架的标记方法进行了探索,结果表明,10nmol/L的Alexa488-Phalloidin为细胞微丝骨架标记的最佳浓度,利用PCR等技术构建pPZP-NtFABD2-GFP植物表达载体后,转化烟草BY-2悬浮细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察发现,NtFABD2-GFP融合蛋白能够清晰地显示活体烟草悬浮细胞内的微丝骨架.这些结果为进一步深入研究微丝骨架在活体植物细胞中的功能奠定了基础.     

萌发百合花粉中原肌球蛋白的免疫鉴定及免疫荧光定位

原肌球蛋白是肌动蛋白的结合蛋白，调节肌动蛋白与肌球蛋白的相互作用，用免疫印迹的方法证明，在萌发百合花粉的提取液中存在的一种原肌球蛋白，分子量为６４ｋｕ，能与抗兔肌原肌球蛋白的多克隆抗体发生免疫交叉反应。免疫荧光标记后激光共聚焦显微镜观察结果表明，该蛋白在百合花粉管中呈不连续的点状分布。     

HRP标记β_2-微球蛋白单克隆抗体的研究

用辣根过氧化物酶(HRP)标记β2-微球蛋白单克隆抗体,以此作为ELISA实验的酶标二抗.用过碘酸钠将辣根过氧化物酶(HRP)的糖的部分轻微氧化为醛基,然后与抗体氨基进行反应,形成辣根过氧化酶(HRP)与抗体的结合物.将β2-微球蛋白与过氧化物酶的结合物进行纯化,得到较纯的酶结合物,以此作为ELISA的酶标二抗.     

DMSO诱导烟草BY-2悬浮细胞的凋亡

烟草BY-2悬浮细胞经不同浓度的DMSO处理后发现,2％DMSO处理可导致细胞核染色质凝集或核结构解体,琼脂糖凝胶电泳显示基因组DNA降解成明显的梯状条带,从而表现出典型的细胞凋亡特征．对微丝骨架的进一步观察发现,2％DMSO处理引起细胞内微丝骨架分布异常,造成微丝骨架不同程度地断裂．这些结果为进一步研究微丝骨架在植物细胞凋亡中的功能奠定了基础．     

黄雀(Carduslis sipnus)耳蜗核的传入投射—HRP法研究

将辣根过氧化物酶(HRP)微电泳入黄雀的两对耳蜗核——巨细胞核和角状核,观察其逆行标记细胞的分布;将HRP 微电泳入上橄榄核和注入耳蜗,观察顺行标记纤维或终支在耳蜗核中的分布。结果表明,巨细胞核和角状核主要接受耳蜗纤维和丘脑螺旋状内侧核等的传入,此外,巨细胞核还接受其上位核团上橄榄核的传入,后者可能是低位脑干中的听觉反馈回路。巨细胞核和角状核接受不同的传入投射,说明这两对耳蜗核可能司不同的功能。     

H2O2诱导烟草悬浮细胞的凋亡

烟草悬浮细胞经不同浓度的过氧化氢处理发现 ,当用 6mmol L的H2 O2 处理时从形态学上可观察到明显的染色质凝聚 ,细胞质皱缩和细胞核解体等现象 ;DNA电泳结果显示发生凋亡的细胞基因组DNA被降解形成明显的DNA梯状条带 ,从而表现出典型的细胞凋亡特征 .其他高浓度的处理也有以上特征 ,但细胞坏死数目也相对增多 ,因此本研究认为 6mmol L的H2 O2 处理 2 4h能够非常有效地诱导烟草悬浮细胞的凋亡 .     

烟草悬浮系培养与细胞器的分离

通过诱导BY-2型烟草叶片愈伤组织,进一步建立烟草细胞悬浮系．酶解去壁从细胞悬浮系中获得原生质体,用含有0．5％Triton X-100的CSK缓冲液破裂细胞膜,释放出细胞器,再通过不连续的蔗糖,Percou梯度进行速率区带离心,分离纯化出细胞核和叶绿体,通过分离、纯化细胞核的对照实验证明不同培养条件对烟草细胞悬浮系的生长和周期具有显著影响。     

兔抗Myosin Ⅹ多克隆抗体的制备及初步应用

为制备兔抗肌球蛋白Ⅹ(myosinⅩ,MyoⅩ)多克隆抗体,合成了含有MyoⅩN端1 000～1 021个氨基酸的多肽,将纯化后的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpethemocyanin,KLH)进行交联;通过背部皮下免疫新西兰大白兔获得免疫血清,并通过ELISA、免疫印迹、免疫荧光等分析对免疫血清进行了初步的验证.结果表明:经过4次免疫后可获得免疫血清,ELISA检测表明抗体终效价达到1∶51 200,抗原吸附实验进一步证明了此多克隆抗体的特异性.利用获得的多克隆抗体检测了多种组织中MyoⅩ的表达,发现兔抗MyoⅩ多克隆抗体可特异性识别多种组织中的MyoⅩ.免疫荧光染色表明该抗体可以显示MyoⅩ在COS-7细胞、NLT细胞和神经元中的分布.     

毛细管柱固定抗原流动注射化学发光免疫法测定IgG

目的建立基于毛细管柱固定抗原流动注射增强化学发光免疫法测定IgG分析的新方法。方法以辣根过氧化物酶(HRP)标记抗IgG与抗IgG竞争毛细管内壁表面固定的IgG抗原,利用HRP催化对鲁米诺-过氧化氢-对碘苯酚体系的增强化学发光,建立测定IgG的流动注射化学发光免疫分析方法。结果在选定的实验条件下,化学发光信号与IgG在稀释比为1∶1×1011~1∶1×1010间成良好的线性关系,相关系数为0.996 0。对稀释比为1:5×1010IgG抗体连续11次测定的相对标准偏差为6.5%。结论将该法应用于合成血清样品中IgG抗体的测定,结果满意。     

外源基因转化烟草悬浮细胞方法的改进

烟草悬浮培养细胞作为一种重要的实验材料已有较多的研究,将外源基因通过克隆进行载体构建,转化入悬浮培养的烟草细胞并进行表达,在带有相应筛选抗性的抗生素固体培养基中进行培养,再将愈伤组织转入液体培养基中进行培养,得到转入外源基因的液体悬浮培养烟草细胞.我们通过对此法作一些改进,使其便于操作、省时,适合在一般实验室条件下进行操作,且烟草悬浮培养细胞传代培养快,取材方便的特性对实验的开展也有很大的促进.     

二次免疫后家猫抗体形成细胞发育分化的免疫组织化学研究

用辣根过氧化物酶（HRP）作为抗原，与福氏佐剂一起对家猫进行二次免疫，追踪淋巴结中抗体形成细胞的发育和分化，并与已建立的细胞发育动力学模型进行分析比较，二次免疫后2－3d，淋纠结的皮、髓两区同时出现阳性反应细胞，免疫后7－9d两区阳性细胞连成一片，数量达到高峰，随后两区阳性细胞数下降，早期阳性细胞以淋巴细胞为主，高峰期则以前浆细胞和浆细胞为主，且各种类型细胞均匀分布，抗体形成细胞的形态学结果与已建立的数量模型和变异系数模型极为相符。     

机械刺激对烟草悬浮培养细胞耐盐和重金属胁迫的影响

机械刺激(mechanical stimulation,MS)是自然界中普遍存在但又易被忽视的一种非生物胁迫因子.用提高摇床转速的方式对烟草悬浮细胞施加机械刺激,发现机械刺激可提高烟草悬浮培养细胞在盐和重金属胁迫下的存活率和再生能力,缓解盐和重金属胁迫下的细胞活力丧失和丙二醛( malonaldehyde,MDA)含量的积累.这些结果表明机械刺激可诱导烟草悬浮细胞耐盐和重金属胁迫耐性的形成.     

中央上核向大脑皮质的纤维投射——HRP逆行标记法研究

本文用辣根过氧化物的酶(HRP)逆行标记法对中央上核(CS)向大脑皮质的纤维投射进行了研究。观察结果表明;CS向大脑皮质投射的范围很广泛,除压上回和视区以外的大部分大脑皮质都接受CS的投射纤维,但从整体上看前半皮质多于后半皮质。在各脑区的注射例中,海马的标记细胞最多,其次是隔区,前乙状回,后乙状回和扣带回。标记细胞为中等大小的卵圆形细胞,位于核的中央部。     

烟草NtCDC48基因的克隆及功能分析

利用裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）系统从烟草BY-2悬浮细胞中分离得到了NtCDC48 cDNA序列， 全长2729bp，包括74bp的5′端非翻译区，2427bp的开放阅读框以及228bp的3′端非翻译区，可读框编码808个氨基酸，推导蛋白含有两个典型的ATPase模块（aa：245—374；518—646）. 在烟草悬浮细胞中过量表达NtCDC48能显著提高烟草BY-2细胞的有丝分裂指数，并导致纺锤体微管列阵的两极结构由相对集中转换为极端弥散状态. NtCDC48GFP融合蛋白在细胞周期M期的亚细胞定位结果表明，NtCDC48随细胞周期进程发生有规律的变化.这些结果表明NtCDC48在植物细胞有丝分裂进程中发挥着重要作用.     

辐照处理对蟹类过敏原（原肌球蛋白）性质的影响

食物过敏是当前食品安全领域较为突出的问题,辐照作为食物过敏原的加工处理方法之一,引起了学者的重视.作者对中华绒鳌蟹和三疣梭子蟹的主要过敏原(原肌球蛋白)进行了辐照处理,并分析了辐照处理对原肌球蛋白性质的影响.十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,部分纯化的蟹类原肌球蛋白经7 kGy辐照处理后出现明显降解,10 kGy辐照处理后完全降解;蟹类过敏者血清的免疫印迹分析结果显示,部分纯化原肌球蛋白经3～7 kGy辐照处理后的过敏原性无明显变化,而10 kGy辐照处理后的过敏原性降低;兔抗锯缘青蟹原肌球蛋白抗体的免疫胶体金层析检测结果证实部分纯化原肌球蛋白经10 kGy辐照处理后的抗原性为阴性.但是,3～10 kGy辐照处理对整蟹原肌球蛋白及其过敏原性无明显影响,模拟胃液消化反应结果也表明3～10 kGy辐照处理对整蟹原肌球蛋白的酶解消化特性无明显影响.     

用细胞周期分析结合免疫印迹方法检测微型浮游植物细胞增长率的研究

采用基于流式细胞仪的细胞周期分析和免疫印迹方法来研究浮游植物的细胞增长率.检测和分析同步化后的有害浮游植物Takayama pulchellum,可知T.pulchellum的S期大约出现在10h左右.免疫印迹检测的结果显示抗微小原甲藻（Prorocentrum minimum）和抗Pfiesteria piscicida的PCNA抗体与T.pulchellum无明显的阳性杂交信号出现,表明这2种PCNA抗体不能作为检测T.pulchellum PCNA表达的抗体.Rubisco抗体免疫印迹反应的信号强烈,但与细胞生长状态的相关关系不够明显,其特异性不高使其不能作为理想的指示细胞原位生长率的指标.     

基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器

提出了一种基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器.采用混合自组装单层膜技术在石英晶振金电极表面制备巯基丙酸(MPA)和巯基乙醇(ME)混合功能基底膜,通过偶联剂盐酸1 - 乙基 - 3 - (3 - 二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)及N - 羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化混合膜上富含的羧基基团用于日本血吸虫抗原(SjAg)的高效共价固定.通过夹心式免疫反应,将辣根过氧化酶(HRP)标记的羊抗兔二抗固定到晶体表面,利用HRP催化H2O2 氧化底物4 - 氯 - 1 - 萘酚在晶振表面形成不溶性沉积物,使免疫检测信号得以显著放大.在优化的实验条件下,该传感器可灵敏检测感染兔血清样中日本血吸虫抗体(SjAb)浓度(稀释比)的线性范围是1∶10 000～1∶100,可望用于日本血吸虫病的早期临床诊断.     

模拟微重力对人脑神经组织细胞骨架和凋亡的影响

探讨模拟微重力效应对神经组织形态结构、骨架系统和凋亡的影响.原代培养人脑癌旁细胞7 d后,一组回转,另一组静置.倒置显微镜和透射电镜观察细胞大体形态及超微结构,扫描电镜观察细胞表面微细形貌;用TRITC标记的二抗和FITC标记的鬼笔环肽分别显示β-tubulin和F-actin的分布.回转时间延长至7、14 d后细胞体明显变大,细胞对基底的贴附能力显著下降.14 d回转组胞浆内细胞器结构变少,线粒体断裂同时相互离散,并有大量空泡.回转组胞质内β-tubulin和F-actin表达明显减少,F-actin绕核呈环,分布紊乱,且1个细胞核解离成几个微核.结果表明,模拟微重力一周能明显影响神经组织细胞的大体形态及超微结构,同时引起骨架蛋白的高度紊乱并伴随细胞凋亡的发生.     

一次免疫后抗体形成细胞发育的免疫细胞化学研究

本文以辣根过氧化物酶(HRP)与福氏完全佐剂混合成的乳液对雄性豚鼠作一次免疫,追踪腘淋巴结中抗体形成细胞的分化途径和变化。一次免疫后抗体形成细胞分化的途径与前文所述的二次免疫是相同的,只是免疫应答开始时间较二次免疫晚。在免疫后8天的皮质区和髓质区,同时出现分散的含抗体的阳性细胞,主要是浅棕色的小淋巴细胞和中淋巴细胞。从10天起,这二个区域的阳性细胞明显增加,细胞染色加深,至24天,阳性细胞大量增多达高峰,以棕色和栋褐色的前浆细胞和浆细胞为主,淋巴结的大部分区域充满着阳性细胞。从30天起,阳性细胞在皮质和髓质区都急副下降,至50天,淋巴结中只存在少数分散的阳性细胞,部分细胞成为不规则形的残留浆细胞。