大鼠CHOP基因克隆及其在颅脑损伤模型中的表达分析

利用巢式PCR(nest PCR)克隆大鼠CHOP基因.该基因ORF区全长507bp,编码168个氨基酸,推测其分子量为19.03kDa,等电点4.59.大鼠CHOP蛋白在第95~160位氨基酸残基位点存在一个"碱性亮氨酸拉链"结构域.蛋白进化分析显示:大鼠CHOP蛋白与啮齿类该蛋白具有较近的亲缘关系.实时荧光定量PCR结果显示:大鼠早期颅脑损伤中,CHOP基因表达呈逐步上升趋势,颅脑损伤24h表达量达到顶峰,为对照组的11.47倍.     

大鼠促红细胞生成素受体基因克隆及其在颅脑损伤模型中的表达分析

利用巢式PCR(nest PCR)的方法克隆大鼠促红细胞生成素受体基因.该基因ORF区全长1 524bp,编码507个氨基酸,推测其相对分子质量为55.48ku,等电点5.07.实时荧光定量PCR结果显示:大鼠早期颅脑损伤中,EPOR基因表达呈逐步上升趋势,颅脑损伤后24h表达量达到顶峰,为对照组的6倍.     

MicroRNA及其靶基因在糖尿病肾病小鼠肾脏的表达

 验证与糖尿病肾病小鼠肾脏相关的microRNAs的表达并运用实时荧光定量PCR分析靶基因与糖尿病肾病的关系。以db/db小鼠为模型组（DN组）,db/m小鼠为正常组（NC组）,定期测量小鼠的体重、血糖、甘油三酯、总胆固醇及24 h尿蛋白排泄率。留取DN小鼠与NC小鼠肾脏组织,检测肾脏组织形态学染色及实时荧光定量PCR（qRT-PCR）。qRT-PCR验证差异表达的microRNAs及其靶基因的mRNA表达水平。血糖、24 h尿蛋白排泄率结果表明糖尿病肾病动物模型构建成功。与NC小鼠相比,DN小鼠肾脏miR-196a、miR-21、miR-200b表达明显升高,且差异有统计学意义（P<0.05）。miR-196a、miR-200b、miR-21的表达水平与血糖、甘油三酯、总胆固醇、24 h尿蛋白排泄率存在正相关关系（P<0.05）。利用miRNAs数据库预测miR-196a的靶基因有ANX1、HOXB7、PTEN、FOXO1、HOXB8、HOXA5等。与NC组比较,DN组ANX1、FOXO1的mRNA表达水平降低,且差异有统计学意义（P<0.05）。同时ANX1、FOXO1与24 h尿蛋白排泄率存在正相关（P<0.05）。MiR-196a可能通过调节ANX1、FOXO1的表达水平来参与糖尿病肾病的发生发展。     

大鼠CRMP1基因siRNA的筛选

目的:筛选有效抑制大鼠CRMP1基因表达的siRNA序列.方法:化学合成3对针对大鼠CRMP1基因的特异性siRNA,用脂质转染胺(lipofectamine)LTX转染大鼠海马神经元,通过流式细胞仪检测转染效率,使用RT-PCR与实时 PCR检测CRMP1基因mRNA的表达,从而筛选抑制效率最高的siRNA.结果:流式细胞仪检测转染效率为52.5%.通过RT-PCR的初步检测和实时 PCR的定量检测结果显示,与对照组相比,所设计的3对siRNA均能不同程度抑制CRMP1基因mRNA的表达,其中CRMP1-249 siRNA抑制效果最佳,抑制率达84.3%.结论:成功筛选出1对能有效抑制大鼠CRMP1基因表达的siRNA序列.     

NGAL基因在原发性肝癌中的表达及其功能分析

NGAL基因是Lipocalin家族成员,与MMP9的功能密切相关,在乳腺癌、食管癌等多种恶性肿瘤中异常表达,为了研究其在原发性肝癌中的表达及功能,通过荧光实时定量PCR法检测了NGAL基因在23对肝癌组织标本中的表达情况.结果显示：在12例肝癌组织中NGAL显著上调表达,占总样本数的52.17%（P〈0.05）,提示了NGAL基因的表达水平可能与肝癌的发生发展过程有关.通过构建绿色荧光蛋白融合表达载体,用脂质体法转化肝癌细胞株SMMC-7721进行瞬时表达.细胞周期实验显示NGAL的表达可促使SMCC-7721细胞从G1期向S期转化,转化NGAL的细胞中S期细胞显著增多（P〈0.05）,提示其可能具有促进肝癌细胞生长的功能;细胞凋亡实验发现NGAL的表达可显著抑制低血清诱导下的细胞凋亡率（P〈0.05）,提示其可能参与抑制肝癌细胞的凋亡.     

小苍兰实时荧光定量PCR中的内参基因筛选

筛选适用于小苍兰实时荧光定量PCR的内参基因,为准确研究小苍兰基因表达,尤其是种球发育相关基因的表达分析提供参考。     

电针对去势SD大鼠骨密度的影响

目的从骨密度探讨针刺防治不同程度骨量丢失的绝经后骨质疏松症大鼠模型的作用机理。方法选用10-12月龄清洁级雌性sD大鼠分组：假手术大鼠为对照组;去势大鼠按骨量丢失程度分层,按随机数字表法分为模型组、电针组、药物组、电针加药物组,每组10只。假手术组不摘除卵巢,其余4组均摘除双侧卵巢。术后8周,分别测定各组大鼠股骨、第4及第5腰椎的骨密度。结果模型组骨密度值明显低于假手术组;电针组与药物组比较骨密度值相当;电针加药物组与模型组比较骨密度明显高于模型组。结论电针在改善去势sD大鼠骨密度方面具有与药物（阿仑磷酸钠）相同的功效,在服用阿仑磷酸钠的同时,辅以电针,电针能够明显促进药物的功效。     

中国卤虫actin基因的实时荧光定量PCR方法的建立和优化

根据GenBank中卤虫actin基因的保守区域序列设计井合成一对引物,采用SYBR Green Ⅰ作为染料建立了实时荧光定量PCR（real—time fluorescence quanfitative PCR）方法．以Ct值为纵坐标,以稀释倍数的对数为横坐标,建立标准曲线,其相关系数达到了0．999．溶解曲线分析显示产物为单一的特异峰,Tm为83.6℃,结果表明：本实验建立的中国卤虫actin基因的实时荧光定量PCR法扩增效率高、特异性强、线性范围广、检测周期短,为actin基因作为内参基因进行卤虫早期胚胎发育基因表达的定量分析奠定了基础．     

实时荧光定量PCR检测疫霉侵染下辣椒ERF基因的差异表达

本研究利用real-time荧光定量PCR技术检测辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici.)胁迫下辣椒抗病基因ERF的mRNA转录水平变化.结果表明:与对照相比,疫霉侵染下辣椒ERF基因的表达量随着胁迫时间延长呈现出先升高后降低的变化特点,该基因在早期被诱导表达,在胁迫6h后表达量达到最大值,之后逐渐下降...     

T-bet和Gata-3基因在脐带血中的表达特点

目的:了解转录因子T-bet和Gata-3基因在脐带血中的表达情况.方法:采用实时定量RT-PCR检测21例脐带血单个核细胞(CBMC)中转录因子T-bet和Gata-3基因的表达水平,21例健康成人外周血单个核细胞(PBMC)作为对照.结果:T-bet基因和Gata-3基因在CBMC和PBMC中均存在一定表达,Gata-3基因在CBMC中的表达水平(0.43±0.35)%与PBMC(0.42±0.27)%相比无明显差异(P=0.925),而T-bet基因在CBMC中的表达水平(0.47±0.48)%则明显低于健康成人组(2.12±1.48)%(P=0.000).结论:CBMC中T-bet基因表达低下,可能与脐带血移植后GVHD发生率低下以及发生程度较轻有关.     

低强度脉冲超声波防止废用性骨质疏松症

 肢体长期制动导致的骨质疏松症在临床中较为常见。本实验应用低强度脉冲超声波（LIPU）治疗大鼠废用性骨质疏松,试图探讨LIPU在防止废用性骨质丢失方面的作用及其作用机理。将40只Sprague-Dawley大鼠随机分为4组,每组10只。髌腱切除组（2组）：切除左侧髌骨和5mm髌韧带,其中一组接受LIPU治疗,一组无治疗;神经切除组（2组）：切除左侧坐骨神经1cm,其中一组接受LIPU治疗,另一组无治疗。超声波治疗组于左侧胫骨近端接受低强度脉冲超声波治疗。所有动物于4周后安乐死,取材。对双侧大鼠胫骨进行骨定量CT（pQCT）检查,测量平均骨密度（aBMD）,以及骨小梁面积、周长,计算骨小梁体积（BV/TV,%）、宽度（Tb. Wi,μm）、数量（Tb. N,mm）和分布（Tb. Sp,μm）。对结果数据进行统计学分析发现,所有动物的aBMD均有减少。在髌腱切除组,经过LIPU治疗的胫骨aBMD没有显著降低（P<0.05）,于神经切除组有减低（0.01相似文献   

骨肽对骨质疏松大鼠的保护作用

研究骨肽对维甲酸所致大鼠骨质疏松的保护作用.采用70 mg/kg维甲酸灌胃给予SD大鼠持续2 w构建骨质疏松模型,分别灌胃给与大鼠40 mg/kg依替膦酸二钠溶液,1.25,2.50和5.00 g/kg骨肽溶液4 w后,取大鼠股骨进行HE染色、骨密度检测、干重与灰重及骨钙磷质量分数测定,取血清和尿液进行生化指标检测.结果显示,模型组大鼠骨密度、骨小梁密度降低,灌胃给予中、高剂量骨肽后显著升高.与模型组比较,3个剂量的骨肽均能显著升高股骨干重与灰重、骨钙磷质量分数;能升高大鼠血清中的骨碱性磷酸酶(BALP)与骨钙素(BGP)的质量分数,降低血清中抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)水平.模型组大鼠尿液中的羟脯氨酸(HOP)质量分数明显升高,灌胃给予低剂量骨肽后显著降低.阳性药在各指标中均表现出明显的治疗效果,不同剂量的骨肽显示出了一定程度的剂量依赖性保护作用,2.50 g/kg骨肽溶液对维甲酸所致大鼠骨质疏松的治疗效果最明显.     

西安地区140例绝经后妇女骨密度调查研究

通过对西安某社区部分绝经后妇女进行骨密度检测,了解其骨骼健康状况,为骨质疏松的早期预防和治疗提供理论依据。应用双能X线骨密度仪(美国,Hplogic)对西安某社区140例绝经后妇女进行骨密度检测。结果绝经后妇女(50—60)岁年龄段腰椎的骨密度下降趋势最明显;(60—70)岁年龄段各部位的骨密度值下降趋势变缓;70岁以后各部位的骨密度值有稍微的上升趋势,腰椎变化趋势大。绝经后妇女的骨质疏松的发生率随着年龄的增长逐步提高。说明结论绝经后妇女各部位骨密度值的变化趋势不相同。随着年龄的增长骨质疏松发生率增高,且绝经后妇女在(50—60)年龄段腰椎骨密度下降明显,应及早给予早期干预。     

Activities of the Deriviatives of Chitin on the Osbeoblast Proliferation and the Effect on Bone Strength in Ovariectomized Rats

This study intends to examine the effects of different concentrations of four kinds of degradations of chitin： glucosamine （GLC）, N-acetyl-D-glucosamine （NAG）, chitooligosaccharide（COS）, CM-chitooligosaccharide （CM-COS）—on the proliferation of MC3T3-E1 cell line cultured in vitro. Results suggest that all of the glucoses mentioned above promoted the proliferation of osteoblast, and various concentrations have different effects： the proliferation was remarkable when the concentration of GLC, NAG, COS, CM-COS was 100 , 100, 500, 500 μg/mL ,respectively. Furthermore we choose the glucosamine as the material and study the effect on the bone strength in ovariectomized rats. The results showed that the middle does of glucosamine can significantly increase the hone strength of femur in ovariectomized rats.     

692例桡骨骨量测定分析

应用单光子骨矿分析仪测量了广州高校６９２名年龄２４～８５岁教职工的桡骨骨量（ＢＭＤ：骨质密度；ＢＭＣ：骨质含量）。结果显示男性各年龄组的骨量明显高于女性；两性在３０～３９岁组骨量最高；男性ＢＭＤ为０．７４２ｇ／ｃｍ２，ＢＭＣ为１．０６７ｇ／ｃｍ；女性则分别为０．６７６ｇ／ｃｍ２和０．７８６ｇ／ｃｍ；女性骨质丢失约从５０岁开始至７０岁后ＢＭＤ约下降２５．７％，男性的骨质丢失比女性晚约１０年，从６０岁开始至７０岁后ＢＭＤ下降约１８．５％。按ＷＨＯ建议诊断标准，５０岁后骨质疏松患病率男、女分别为３２．６％、５１．４％。另外，研究发现男性ＢＭＤ、ＢＭＣ与身高、体重有显著的线性正相关，女性只有身高与ＢＭＣ有较良好的相关性     

韶关地区成年人定量超声骨量分布研究

应用骨定量超声法测定了809名正常体健者的右侧跟骨宽带超声衰减（BUA）和超声声速（SOS）．结果表明：男女性跟骨峰值出现在30～39岁年龄组，二者均随增龄参数值缓慢下降，但女性从50岁开始各参数值加速下降，持续约25年，骨质疏松症发生率与超声骨参数值下降速率一致，跟骨BUA和SOS值随年龄增长而逐年下降，女性从50岁以后下降趋势更明显，女性OP发生率高于男性。     

雌激素受体与男性骨质疏松的研究进展

男性骨质疏松严重威胁着老年男性的生存质量。引起男性骨质疏松病因是多方面的,雌激素缺乏和雌激素受体缺陷是重要因素之一。雌激素受体分为ER-α和ER-β二种亚型,但它们为不同的基因产物。雌激素与ER-α和ER-β结合,通过不同的途径作用于骨组织,影响成骨细胞和破骨细胞,调节骨的代谢。基因突变可能是引起骨质疏松的遗传因素。近年来,用雌激素受体调控剂治疗男性骨质疏松获得了较为满意的效果。通过对雌激素受体的研究为治疗和预防男性骨质疏松打下了良好的基础。     

长期递增负荷运动中雌性大鼠骨超微结构的变化

目的:长期递增负荷运动中雌性大鼠骨超微结构的变化的影响。方法将200只3月龄经过17周递增负荷训练后,利用透射电镜(TEM)和酶联免疫吸附法检测和观察长期递增负荷跑台运动对雌性大鼠股骨的超微结构的影响、测试分析骨形成和骨吸收生化标志物的变化。结果:(1)根据大鼠动情周期抑制率BUN、体重、BMD等指标的检测结果可判断出本实验动物模型建造成功。(2)透射电镜(TEM)实验结果表明,4、9周时的运动训练对大鼠骨超微结构无明显影响,13、15、17周大强度递增负荷运动对大鼠骨超微结构影响显著,定性比较,超微结构损伤较同期对照组差异显著;(3)生化指标变化趋势表明随着运动强度的加大骨处于高转换状态,结合BMD结果判断骨吸收大于骨形成。结论:实验中运动性动情周期抑制检查BUN、BMD变化结果证实,随着运动强度的加大,大鼠动情周期显著紊乱,明显抑制了下丘脑垂体性腺轴的正常生理功能。9周前的运动组大鼠骨超微结构较同期对照组无显著差异,证实了适宜的运动强度对大鼠骨组织有较好的促进作用,9周后大强度递增负荷的运动对大鼠股骨超微结构的负面作用显著;大鼠骨超微结构的异常具有位点特异性。17周大强度递增负荷的运动导致大鼠骨处于高转换状态,骨吸收占据优势。     

维生素K2(20)的两相合成工艺及其营养剂量对增加骨密度的研究

 在以BF₃·OEt₂作催化剂及45~47℃的反应条件下,将大过量的2-甲基-1,4萘二酚循环与香叶基香叶醇(每次保持摩尔比为10:1)在CH₃NO₂-正己烷两相反应体系中进行Friedel-Crafts烷基化反应合成维生素K₂(20)的氢醌,再在催化量的FeCl₃·6H₂O作用下经空气氧化,以满意的收率及较高的化学选择性合成了维生素K₂(20) . 同时,利用去卵巢致大鼠骨质疏松模型,参考维生素K₂人体低端推荐摄入量(50μg/d)进行了动物实验剂量设计并进行了维生素K₂(20)增加骨密度的营养剂量的量效关系研究,结果表明:每天给药 25~100μg/(kg·d),均能防止去势大鼠的骨流失,使股骨中点及远心端骨密度明显增加(P<0.05),并呈现出相应的量效关系.研究为维生素K₂(20)的工业生产提供了可能的工艺,也为提高骨密度以预防骨质疏松的人体营养补充剂量(50~100μg/d)提供了可行性依据.