蒙脱石K-10吸附固定糖化酶研究

蒙脱石是一种优良的吸附剂,采用吸附法将其作为固定化糖化酶的载体研究固定化糖化酶的性质,结果表明:每克固定化酶的活力3 442 U;固定化酶的最适pH值是4.8,比游离酶的最适pH值增加了0.2;固定化酶反应的最适温度是60 ℃,比游离酶升高了5 ℃;固定化酶的半衰期为12 d;固定化酶的Km=14.3 g/L,为游离酶的1.47倍.     

蒙脱石K-10固定糖化酶研究

蒙脱石是一种优良的吸附剂，采用吸附法将其作为固定化糖化酶的载体研究固定化糖化酶的性质，结果表明:每克固定化酶的活力3442U；固定化酶的最适pH值是4.8，比游离酶增加了0.2个单位；固定化酶反应的最适温度是60℃，比游离酶升高了5℃；固定化酶的半衰期为12d；固定化酶的Km=14.3g/L，为游离酶的1.47倍.     

提取果胶过程中双酶法去除马铃薯薯渣残余淀粉的研究

马铃薯渣中含有大量的淀粉,探索双酶法逐步水解马铃薯薯渣中的残留淀粉的研究,目的是解决马铃薯薯渣提取果胶的中性糖残留问题提高果胶纯度。结果表明,耐高温a-淀粉酶和高转化率糖化酶组合使用可有效的水解马铃薯薯渣中的残留淀粉,其最优工艺条件为：液化时耐高温a-淀粉酶的最适条件为,为pH为6.3,液化温度为95℃,加酶量为90u/g,液化时间为30min;高转化率糖化酶的最适条件为pH为4.3,液化温度为60℃,加酶量为198u/g,糖化时间为2.0h,在最适条件下,最终后续产品果胶的纯度上升至80%以上。     

黑曲霉糖化酶基因在酿酒酵母中的表达

从黑曲霉eDNA文库中筛选出糖化酶基因,并在酿酒酵母中进行表达．阳性克隆在发酵培养基中培养60h后,产生的糖化酶酶活力达到峰值为4．3U／mL．测定结果显示其糖化酶大小为1908bp,编码636个氨基酸残基组成的蛋白质．酶学性质分析显示该酶的最适反应温度为50℃,pH为5．0．经柱分离纯化其发酵上清液后,SDS-PAGE电泳方法,测得它的分子量大约为70kD,且条带清晰．     

重组草酸青霉生淀粉糖化酶的酶学特性鉴定

【目的】了解在毕赤酵母中表达的来源于草酸青霉(Penicillium oxalicum)GXU20的重组生淀粉糖化酶的酶学特性。【方法】用3,5-二硝基水杨酸法测定pH值、温度、金属离子和化学试剂对纯化的重组生淀粉糖化酶的活力的影响,同时测定酶的底物特异性、酶对生淀粉的吸附能力以及酶对不同生淀粉的水解效率等,用高效液相色谱法对该酶水解生木薯淀粉的产物进行分析鉴定,用扫描电子显微镜观察重组酶对不同生淀粉颗粒的水解方式。【结果】重组生淀粉糖化酶rPoGA15A的最适pH值为4.5,最适温度为65℃,在pH值为2.0~10.0时,重组酶具有较好的pH耐受性,温度小于50℃时,酶的稳定性好。除Ag~+、Cu~(2+)和SDS之外,其他大部分金属离子和化学试剂对重组酶的酶活力影响不大。重组生淀粉糖化酶对大米和玉米生淀粉的活性较高,对木薯和马铃薯生淀粉的活性次之,重组生淀粉糖化酶rPoGA15A对不同生淀粉的吸附能力与其对相应不同生淀粉的水解活性大小呈正相关。扫描电子显微镜观察表明重组生淀粉糖化酶对不同生淀粉颗粒的降解作用明显,水解方式各有特点。高效液相色谱分析表明该重组生淀粉糖化酶水解生木薯淀粉的产物仅有葡萄糖。重组生淀粉糖化酶rPoGA15A在40℃下对大米和玉米生淀粉水解72h后水解率分别达到86.5%和71.9%。【结论】重组生淀粉糖化酶具有广泛的pH耐受性,对生淀粉具有高水解活性,在生淀粉的水解和生料同步糖化发酵生产酒精中有一定的应用潜力。     

BT—37蛋白酶的初步研究

BT—37是从土壤中分离出的一株对多种鳞翅目昆虫有较高毒力的苏芸金芽孢杆菌。在PB培养基中振荡培养,蛋白酶活性随着细胞的生长而增强,培养36小时,芽孢晶体开始脱落时达到高峰。所产蛋白酶为中性蛋白酶。酶作用的最适条件:最适温度为50℃,60℃保温1.5小时酶活性降低70％;最适pH7.0;在pH6.0℃—10.6范围内稳定。1.5×10~3M时,Mn~+显著提高酶活。在蛋白酶活性高的培养基中获得了较高毒力的培养物。     

产生淀粉糖化酶菌株的分离以及酶性质的初步研究

从霉变物、土壤、醋曲、醋醅等分离出四株产生淀粉糖化酶且酶活较高的菌株,选取酶活最高的菌株vin-1作为出发菌株,初步鉴定为Aspergillus niger,其生淀粉糖化酶活力达到342U/g(干曲),酶最适作用温度为55℃,酶在pH值3．5～4．5之间有较高的酶活,最适pH值为4．0,Ca~(2+)、Mg~(2+)对酶有一定的激活作用,而Fe~(2+)、K~+、Fe~(3+)、Cu~(2+)、Mn~(2+)都有较强的抑制作用,Mn~(2+)抑制作用最大,达到近50%。     

黄原胶修饰糖化酶的性质研究

为更好地应用修饰糖化酶 ,对经黄原胶修饰的糖化酶基本性质进行了研究 ,结果表明修饰糖化酶的最适作用温度与对照酶基本相同 ,为65℃.但随着温度的升高修饰糖化酶对热的抗性增强 而修饰酶的 pH稳定范围有所变宽 ,对酸具有一定的抗性 修饰酶的米氏常数Km值变小 ,为0.788×10-2,而对照酶的Km值为1.17×10-2,表明修饰酶对底物的亲和力增强 在相同条件下 ,修饰酶催化反应的淀粉糖化DE值较高     

葛根饮料的研制

葛根为药食两用植物资源,是食用、医药、保健品、饲料(畜禽养殖)等行业应用的良好素材.随着人们生活水平的提高,具有营养保健功能的葛根饮料越来越受到消费者的青睐,开拓葛根系列产品,具有重要意义.本文以葛根为材料,研究了:维生素C、柠檬酸、焦亚硫酸钠、异Vc-Na对葛根饮料护色的影响;料水比、pH值、浸提时间等因素对浸提异黄酮类物质的影响;α-淀粉酶/糖化酶的添加量、酶解温度、酶解pH、酶解时间等因素对葛根饮料澄清效果的影响;葛根含量、β-环糊精、柠檬酸、蔗糖等因素对饮料风味的影响;最佳灭菌条件的确定. 实验表明:最佳护色条件为0.02%的异Vc-Na护色2 h;最佳浸提条件为料水比1:3、pH值为8、浸提时间4 h;糖化酶的最适酶解条件为pH值5、温度60℃、酶解时间60min、酶用量500U/mL;淀粉酶的最适酶解条件为pH值5.5、温度55℃、酶解时间60min、酶用量15U/mL;糖化酶比α-淀粉酶澄清效果好;调配的最佳组合是葛根含量32(%g/V)、β-环糊精0.7(%W/V)、柠檬酸0.2(%W/V)、蔗糖8(%W/V);最佳灭菌条件为100℃下保持10min.     

明胶—戊二醛固定化双酶体系的研究

采用明胶包埋、戊二醛交联相结合的方法制备固定化葡萄糖淀粉酶—葡萄糖异构酶双酶体系.该酶制备的最适条件是温度50℃pH值6.5.该酶反应的最适温度为50℃,最适pH为5.4,最适底物浓度为15％,热稳定性在50℃以下.     

生淀粉糖化菌NL—3的发酵条件

以黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒ）５２３原生质体为对象,经激光、紫外线和亚硝基胍复合诱变,选育出高产生淀粉糖化酶突变株黑曲霉ＮＬ３,其生淀粉酶活力为１５６Ｕ／ｍｌ．产酶最适培养条件为：起始ｐＨ４５,３０℃,９６ｈ产酶量达最高．Ｋ＋,Ｍｇ２＋对ＮＬ３产生淀粉糖化酶有促进作用;Ｚｎ２＋对产酶有抑制作用．酶的最适作用条件为：以玉米淀粉为底物的最适温度５０℃,最适ｐＨ４５;以甘薯淀粉、马铃薯淀粉为底物时最适温度６０℃,最适ｐＨ４０～４５．酶在６０℃保温１５ｍｉｎ,玉米淀粉为底物时酶剩余活力为８０％;甘薯淀粉、马铃薯淀粉为底物时酶剩余活力为９８％．     

生淀粉结合域SBD及糖化酶基因在毕赤酵母中的融合表达

【目的】研究生淀粉结合域SBD及糖化酶基因在毕赤酵母中的融合表达,提高酶的表达量和水解生淀粉的能力。【方法】利用In-fusionTM PCR克隆技术将淀粉结合域SBD无缝隙插入到黑曲霉糖化酶基因glu的5′端构建融合表达质粒pPIC9K-psg,实现融合酶基因psg在毕赤酵母GS115中的高效表达,并进行酶学性质研究。【结果】融合酶的最适作用条件及热稳定性均与原始酶无明显差别,但反应温度及pH值的范围更为宽泛,在反应温度60~70℃,pH值为4.0~7.0时均较稳定;融合酶PSG降解生淀粉的能力较原始酶PG提高29.6%,比原始菌株提高86.5%。【结论】淀粉结合域SBD的融合提高了糖化酶水解生淀粉的能力。     

旱黄瓜茎基腐病菌鉴定及其生物学特性

为明确昌黎旱黄瓜茎基腐病的病原菌,采用组织分离法和针刺法对其病原物进行分离培养和致病性测定,通过形态学、ITS序列分析方法鉴定旱黄瓜茎基腐病原菌种类后对病原菌的生物学特性进行了研究。结果表明：旱黄瓜茎基腐病的病原菌为拟轮枝镰孢菌(Fusarium verticillioides);该病菌菌丝最适生长温度为30℃,最适pH为6.0,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为NH₄NO₃,致死温度为69℃,10 min;大型分生孢子生长最适温度为25℃,小型分生孢子生长最适温度为30℃;两种孢子生长的最适pH,碳源,氮源均为5.0,蔗糖,NH₄NO₃。     

一株聚磷真菌的生长特性研究

从河流底泥中筛选出聚磷效果较好的一株聚磷真菌,并测定其生长曲线,研究其生长特性。通过改变碳源、温度、pH、转速、装液量和接种量来寻求其最适生长条件。结果表明该聚磷真菌生长的最适碳源为葡萄糖;最适温度为25℃;最适pH为7;最适转速为160r/min;最适接种量为6%;最适装液量为100ml。     

淀粉聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定耐热糖化酶组分

采用微波诱变筛选出一突变株,该突变株粗酶液的最适作用温度比出发株的高20℃;建立了一种Starch-PAGE检测粗酶液中具有糖化酶活性组分的方法,测定出突变株含有4个糖化酶组分;并建立了SDS-Starch-PAGE检测耐热糖化酶组分的方法,鉴定出突变株含有3个耐热糖化酶组分.     

磷脂酶D产生菌株的筛选及其转磷脂化反应特性

采用磷脂平板筛选法,从土壤中筛选出一株1株能够降解磷脂的菌株SNUPLD-6.经验证SNUPLD-6产的磷脂酶为胞外酶含有高效磷脂酶D(PLD).对该菌形态特及ITS序列进行分析,将其鉴定为地霉属的白地霉(Geotrichum candidum).对该菌的生长条件及该菌产的PLD的转磷脂反应的条件进行优化,实验结果表明:该菌株的最适生长温度为30℃,最适pH为6,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为牛肉膏和蛋白胨各50%.该菌产PLD最适发酵周期为3d.该PLD的转磷脂化反应最适反应温度为32℃,最适pH为5.5,最适的反应缓冲液为0.02M的醋酸-醋酸钠缓冲液,最适的金属离子激活剂为Ca2+、Zn2+.     

甜荞保健酒糖化及酿制工艺研究

以贵州师范大学植物遗传育种研究所收获的甜荞种子为材料,采用单因素试验及正交试验对荞麦保健酒的糖化工艺和酿制工艺进行探索,结果显示:最优糖化工艺条件是糖化酶添加量为6%,糖化温度为60℃,糖化时间为45 min,pH值为4.5;荞麦保健酒酿制的最适接种量为5%,发酵温度25℃,添加SO2的质量浓度为120 mg/L,发酵时间8 d。     

黑曲糖化酶高产诱变株80-72的选育及产酶条件的研究

以黑曲糖化酶生产菌A.S 3.4309为出发菌株,用UV+DES复合处理后,经摇瓶筛选,获得诱变株80—72。该菌株在5吨罐连续发酵生产五批,平均酶活力11327.6 u/ml,最高12750u/ml,产酶速率平均106.8 u/ml hr,终点pH3.1;是目前国内黑曲生产糖化酶活力水平最高的优良菌株之一。     

芦荟超氧化物歧化酶稳定性研究

本文研究了在不同pH、温度条件下从芦荟中提取的超氧化物歧化酶的稳定性,结果表明:芦荟超氧化物歧化酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,其作用的最适pH值为8.2,最适温度为40~55℃。     

中华猕猴桃蛋白酶分离提纯及性质研究

以中华猕猴桃鲜果为材料,经调节pH,硫酸铵盐析,除果胶以及DEAE—纤维素(E22)柱层折纯化,获得电泳单一区带酶制剂。以牛碳氧血红蛋白为底物,酶的最适温度为45—50℃,最适pH为3.7—4.0,K_m值为2.78×10~(-5)M,K_(cat)为2.01×10~2/min,pH影响V_(max)而不影响K_m值,表现为非竞争性抑制作用。该酶的活活化能为6.84kcal/mol,ΔH为6.24—6.20kcal/mol(30—50℃),同时还进行了酶的热稳定性研究。