成年小鼠成纤维细胞体外培养

成年小鼠皮肤成纤维细胞可从尾部取材用组织块培养法进行原代培养,添加血清的M 199(E arle′s)和低糖的DM EM均能较好的满足原代细胞的生长.两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异.用0.25%胰蛋白酶消化小鼠尾尖原代培养物,上皮细胞与成纤维细胞有明显的敏感度差别.经控温控时消化传代,可将上皮细胞与成纤维细胞分离纯化.     

小鼠未成熟卵母细胞体外培养

目的：探讨小鼠未成熟裸卵体外培养,获得较高的成熟率和受精率的适宜培养时间和培养条件。方法：在培养液中添加不同剂量的人绝经期促性腺激素（hMG)和卵泡刺激素（FSH）,分别培养从未行激素刺激排卵处理的昆明系小白卵巢中获得的未成熟裸卵,培养24h和48h后,进行体外受精和胚胎培养,结果：添加不同激素和培养不同时间对未成熟裸卵的体外成熟无显著性影响（P＞0．05）,但黄体生成素（LH）的存在对培养48h后成熟卵子的体外受精率有显著性影响（P＜0．05）,并随LH含量的增多,影响也越大。结论：未成熟裸卵能在体外培养成熟并受精,但培养液中LH含量对培养较长时间的成熟裸卵的体外精率有极显著的不利影响。     

阻滞和非阻滞品系小鼠早胚体外培养的比较

收集阻滞品系昆明（Kunming,KM）小鼠和非阻滞品系B6C3F1小鼠受精卵,以及KM小鼠和B6C3F1小鼠交叉交配所得受精卵,进行体外培养,研究阻滞品系小鼠早胚体外发育阻滞原因。结果表明,卵母细胞内在因素对子一代早胚体外发育的能力影响较大,即体外培养是否发生2-细胞阻滞与卵母细胞有关。     

小鼠精原干细胞的体外培养与鉴定

建立一种简单、有效体外分离和培养精原干细胞（Spermatogonia stem cell,SSCs）的方法。采用酶消化6—8d新生小鼠睾丸制备睾丸细胞悬液后进行培养,碱性磷酸酶（AKP）染色和间接免疫荧光对培养的细胞进行鉴定;结果显示：SSCs培养3～5天可观察到细胞克隆的产生,AKP染色强阳性;间接免疫荧光显示GCNF阴性,oct-4、c—kit均呈阳性反应。由此可知以DMEM＋15％胎牛血清＋白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）＋L-谷氨酰胺等为培养基,成功建立了精原干细胞的体外培养体系。     

小鼠骨髓造血基质细胞体外培养及其功能的研究

采用细胞培养从正常LACA雄性小鼠骨髓中分离得到1株造血基质细胞（HSC），该细胞胞体较大，呈多角形，不吞噬酵母多糖，HSC粘壁层有其培养上清液均具有明显刺激CFU－GM体外增殖分化的功能，将HSC输注到经射线照射的雌性小鼠体内，PCR技术检测结果显示，HSC具有重建受体小鼠造血微环境的作用。     

人和小鼠神经干细胞的体外培养的分化研究

首次克隆了小鼠神经元标志性微管蛋白βⅢ基因，从核苷酸序列推导出小鼠与人两者之间在其羧基端有相同的EAQGPK六肽，进一步证实用抗人微管蛋白βⅢ单抗可检测小鼠神经干细胞分化成的神经元细胞，免疫组化鉴定显示小鼠神经干细胞在体积分数为1％胎牛血清（FBS）诱导下，可分化成神经元，星形胶质细胞，少突胶质细胞，同时培养了13周龄胎儿脑来源的人类神经干细胞，用特异性的抗人nestin抗体鉴定，全部为阳性细胞，但它们经诱导分化产生较不同寻常的细胞分化细胞和分化程度，在生长因子减半和1％FBS诱导条件下可分化为神经元和星形胶质细胞，而无少突胶质细胞分化，NF单抗检测证实为早期分化的神经元。     

小剂量60Coγ线照射诱导体外培养小鼠骨髓细胞凋亡研究

目的：研究小剂量^60Coγ线照射对体外培养小鼠骨髓细胞的影响。方法：以1ng/ml rh GM-CSF和5ng/ml rh IL-3作为造血生长因子，维持骨髓细胞存活，然后用小剂量^60Coγ线照射，动态观察骨髓细胞凋亡情况，同时设立未照射小鼠骨髓细胞作对照。结果：实验观察到照射后6h，透射电镜显示细胞皱缩，细胞膜空泡化，核固缩，呈典型的细胞凋亡特征；DNA裂解百分率照后6h各时点逐渐升高，第20h达高峰，之后逐渐下降，照后6－26h，实验组与对照组DNA裂解率有显著性差异（P＜0．01）；DNA琼脂糖疑胶电泳呈特征性梯状图谱，片段大小为180bp或其倍数。结论：小剂量^60Coγ射线可诱导体外培养骨髓细胞凋亡。     

胚胎分割、分割胚的体外培养及移植

用玻璃微针对小鼠胚胎进行分割,分割的裸半胚经体外培养和移植到受体后,获得由半胚发育的仔鼠。小鼠早期胚胎(2细胞,8细胞阶段)在链霉蛋白酶中软化透明带后,用直径为0.5μm的玻微针徒手对胚胎进行切割。切割的半胚体外培养24～48h,观察半胚的活力、发育率、发育阶段及胚泡的大小与未切割的正常胚胎进行比较。共切割胚胎342枚,切割后成活的半胚为411枚,半胚成活率为60.08％(411/682)。2细胞和8细胞阶段切割的半胚,成活率分别为     

ICR小鼠胚胎NSCs体外培养和诱导分化

利用表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）的联合促进作用使原代胚胎皮层神经干细胞（Neural Stem Cells,NSCs）稳定增殖,以此来分离培养ICR小鼠胚胎NSCs,并在体外高效诱导成神经元。通过诱导分化的对照实验获得神经元分化比例最高的方法。免疫细胞化学不仅证实了培养的NSCs可表达Nest...     

昆明小鼠胚胎成纤维细胞的分离与体外培养

研究了昆明小鼠胚胎成纤维细胞的分离、培养和生长特征,建立了快速、稳定的优质饲养层细胞培养体系.从不同日龄的胎鼠均分离到胚胎成纤维细胞,但最佳分离时间为13.5~14.5d;三种分离原代胚胎成纤维细胞的方法中胰酶消化法效果最好,能在较短的周期内获得大量原代及传代细胞;MEF细胞形态以小梭形为主,呈漩涡状、火焰状生长;增殖速度较快,每1~2d可传一代,按1∶3比例常规传代;5代以内适宜制作饲养层用,5代以后细胞开始变形呈现典型的衰老特征.     

小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养

目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的分离与培养。方法取BALB/c小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对MEF的生长形态进行观察,并对传代细胞培养液、胚胎胎龄、胰蛋白酶浓度进行筛选。结果 MEF在体外为贴壁生长型细胞,第三、四、五代细胞纯度较高且增殖最为旺盛;添加血清的M199和DMEM均能较好的满足原代细胞的生长,两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异;11.5～16.5d胎龄的小鼠胎儿MEF分离效果最好;0.1%胰蛋白酶消化MEF时间以8～11min为宜。结论通过对MEF分离培养影响因素的筛选,为MEF的进一步研究奠定了基础。     

小鼠早期胚胎内细胞团分化潜能的研究

用免疫手术去除小鼠早期胚胎的外层细胞或滋养层细胞后，其内细胞闭经２４ｈ体外培养后能够重新形成滋养层，从晚期桑椹胚，早期胚泡和晚期胚泡分离的ＩＣＭ的洋养层分化率分别为７０．３％、６９．３％和１１．１％。晚期胚泡ＩＣＭ的洋养层分化率明显低于早低于早期胚泡和桑甚胚的滋养层分化率，实验结果表明小鼠早期胚泡的ＩＣＭ仍角具有较强的分化为洋养层的能力，但晚期胚泡的ＩＣＭ分化为滋养层的能力明显减弱。从而推断晚期胚     

镁离子对鼠角质细胞生长和分化的影响

利用无血清培养基培养角质细胞，研究Mg^2 对鼠角质细胞生长和分化的影响。实验结果表明，培养基中Mg^2 浓度为5．0mmol／L时，细胞贴壁率、克隆形成率明显增加，细胞分化比例和老化比例均达到最低。当Mg^2 浓度达到10．0mmol／L时，细胞增殖水平没有显著提高，角质细胞分化比例和老化比例却有一定程度的提高。培养基中加入一定浓度的Mg^2 能够刺激角质细胞的增殖，抑制角质细胞的分化，并且延缓细胞的老化。     

枣离体授粉及胚珠培养初探

对晋矮1号×壶瓶枣的离体杂交以及杂交子房和胚珠的离体培养进行了研究.结果表明:附加1.0mg/LIBA的KM8p培养基对枣子房的离体培养较为适宜,ZT对子房的成活具有促进作用,子房的愈伤组织化可减缓子房室内胚珠的败育程度.     

以KnockoutTM SR无血清培养基培养小鼠精原干细胞的研究

设计并应用了KnockoutTM SR无血清培养基,在STO (SIM mouse embryo-derived thioguanine and ouabain resistant)饲养层上培养小鼠精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs).结果表明小鼠SSCs在这一体系中能在短期内存活和形成克隆,并缓慢增殖,但不能更长时间地维持干细胞的不分化状态.     

年龄、成熟方式及培养液对小鼠卵母细胞体外成熟和人工活化的影响

为研究卵母细胞能充分在体外成熟和发育,比较了年龄、成熟方式及培养液对昆明白小鼠卵母细胞体外成熟和人工活化的影响.1.5月龄、3月龄、6月龄、9月龄和12月龄小鼠的GV期卵母细胞其体外成熟率无差异(P0.05).经人工活化后,与体内成熟的卵母细胞相比,体外成熟的卵母细胞发育到原核期胚和2-细胞期胚的比率都明显降低;体外成熟的生长在HTF培养液的卵母细胞发育到2-细胞期胚的比率(44.4%)显著高于生长在M16培养液的比率(22.9%)(P0.01).结果表明昆明白小鼠卵母细胞的体外成熟不受年龄影响,体外成熟的卵母细胞人工活化后支持发育的能力比体内成熟的差,HTF培养液更适合小鼠卵母细胞人工活化后的进一步发育.