牛酪蛋白基因导入大豆的研究

将带有牛酪蛋白基因caseinB的植物表达载体 pAS -2 ,在大豆自花授粉后 ,用注射法导入大豆受精子房中 .以质粒 pAS -2的 3 5S -Casein -Gus片段为模板 ,随机引物法标记探针 ,对 1 0 3株受体植株后代的DNA进行点杂交和Southern杂交 ,发现其中 1株在点杂交和Southern杂交中均呈阳性 .证明外源基因已整合到大豆基因组中 .     

大豆自花授粉后外源DNA导入技术的验证

以花生DNA为供体,大豆为受体,在大豆自花授粉后,采用液滴法和注射法导入花生DNA,在受体大豆植株后代中获得了多种变异类型。为探讨外源DNA 导入技术的可靠性,将具有卡那霉素抗性基因的质粒pCaMVneo 用同法导入大豆。所收获的种子发芽后培养于一定浓度的卡那霉素溶液中,其中部分植株对卡那霉素表现抗性,可继续生长发育。分株提取这些植株的DNA,以质粒DNA 为探针,进行斑点杂交.供试的14个植株中出现了13个阳性斑。实验结果证明质粒DNA 已整合到大豆基因组中并获表达,从而间接地证实了授粉后通过花粉管通道导入外源DNA 的技术是可靠的。     

青菜花粉管通道法导入外源DNA的研究初报

采用花粉管通道法，将青菜株系７５Ｆ５、１４号大白菜、紫阳等三个品种的总ＤＮＡ及质粒ｐＡｃｔ１－Ｄ ＤＮＡ导入青菜６０５品系，收获青菜种子。种子发芽后分别提取约两周苗龄的小苗总ＤＮＡ，并经ＥｃｏＲⅠ酶切，以ｇｕｓ基因片段为探针做子杂交，证实了外源ｇｕｓ基因已整合到青菜６０５品系中；田间观察还获得了一株与供体大白菜花形相似的变异株。     

导入大豆总DNA改良大麦籽粒营养品质

利用花粉管通道法和基因枪法将大豆总DNA直接导入大麦。采用微量凯氏定氮法和氨基酸自动分析仪进行大麦后代籽粒蛋白质含量和氨基酸含量分析。结果显示：(1)经花粉管通道法导入大豆总DNA获得的大麦后代有6个单株籽粒蛋白质含量明显超过对照(12．91％)，它们是18．23％，16．61％，16．42％，16．58％，16．22％和16．38％，占总数比例的7．06％；(2)经基因枪法导入大豆总DNA共获得12个单株籽粒蛋白质含量明显超过对照(13．29％)，它们的蛋白含量分别为16．70％，16．52％，17．9l％，19．59％，17．44％，18．56％，18．46％，17．3l％，16．5l％，18．8l％，18．8l％和19．02％，占总数比例的8．33％；(3)籽粒氨基酸含量分析显示在高蛋白变异后代中，随着籽粒蛋白质含量增加的同时，籽粒总氨基酸和各种必需氨基酸含量也有明显提高．经直线相关分析显示，导入大豆总DNA的后代籽粒赖氨酸等6种必需氨基酸含量与总氨基酸含量呈极显著正相关关系。本试验结果充分说明，直接导入大豆总DNA有可能提高大麦籽粒的蛋白质含量及质量。     

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长ｃＤＮＡ克隆ｐＢａＳ１ｃ１８４Ｘ ＧＬⅢ和ＣＯｒＩ双酶切，回收基中的酪蛋白基因编码片段，与经ＢａｍＨＩ，ＳｍａＩ双酶切的植物表达载体ｐＢＩ１２．１２分两步连接；第一步载体的ＢａｍＨＩ末端与酪蛋白基因的ＢｇｌⅡ粘性末端连接；第二步用Ｔ４ＤＮＡ多聚酶补平酪蛋白基因的ＥｃｏＴＲⅠ末端，再与载体ＳｍａⅠ进行平末端连接而环化。     

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长cDNA克隆pB_aS_1C184经Bgl Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,回收其中的酪蛋白基因编码片段,与经BamH Ⅰ、SmaⅠ双酶切的植物表达载体pBI121.2分两步连接:第一步载体的BamHⅠ末端与酪蛋白基因的BglⅠ粘性末端连接;第二步用T_4DNA多聚酶补平酪蛋白基因的EcoR Ⅰ末端,再与载体SmaⅠ进行平末端连接而环化,转化JM109菌株,从得到的33个转化子中,通过~(32)P标记的酪蛋白cDNA基因为探针,点杂交筛选到一个阳性克隆。经酶切鉴定,确认酪蛋白cDNA基因编码区已正确插入到pBI121.2中。     

基因治疗中目的基因的导入方法

基因治疗正从实验室研究走向临床应用，它给医学界引入了一种全新的概念，基因治疗主要是利用病毒介导的基因转移。文中介绍了目前已应用和将要应用于人类基因治疗的逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体等的构建方法，优缺点和适于治疗的疾病。扼要地介绍了目的基因导入的理化方法。     

大豆花叶病毒及其抗性研究

大豆花叶病毒病（soybean mosaic virus,SMV）是大豆主要病害之一。随着大豆花叶病毒的病害日益严重,通常特定大豆品种只对部分SMV株系产生抗性,对SMV抗性的研究受到育种家们的高度关注。     

细茎大豆（G.gracilis）rbcS基因结构与分子进化分析

从细茎大豆的嫩叶中提取总ＤＮＡ，用ＰＣＲ方法扩增得到包含完整编码区的ｒｂｃＳ基因并将其克隆到ｐＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ载体中。完成全基因１０８９个核苷酸测序后，运用ＰＣＧＥＮＥ进行顺序编辑和同源比较，并应用ＭＥＧＡ１．０２１软件中的Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ方面画出Ｒｕｂｉｓｃｏ小亚基仓的系统进化树。     

导入野生大豆DNA小麦后代的农艺性状研究

用花粉管通道法将野生大豆总DNA导入小麦，获得了转基因小麦，其后代的农艺性状有较大的变化。田间实验分析了变异系小麦植株与对照植株在叶片的光合速率、蒸腾速率、叶面积及株高、穗粒、穗重等性状上的差异。t检验结果显示，变异系小麦在叶面性状及产量性状上的差异是显著的，外源DNA的导入改善了植物的农艺性状，并在后代中表达，为选育高产、优质的新小麦品种提供了依据。     

5种不同遗传背景绿色荧光蛋白(GFP)基因导入系小鼠的培育

通过反复回交——筛选目的基因的手段,将C57BL/6-Tg(UBC-GFP)30Scha/J转基因小鼠的绿色荧光蛋白基因(GFP)分别向BABL/C、CBA/J、DBA/2J、AKR/J、FVB/J等品系小鼠导入,得到了5种不同遗传背景且带有GFP基因的导入系小鼠.冰冻组织切片等方法显示GFP导入系小鼠的皮肤、肝、肾、心、肺等均有不同程度的绿色荧光蛋白表达,不同遗传背景对GFP的组织表达谱、血液生理指标及繁殖性能未见影响.本实验采用基因导入法培育了5种新的带有GFP导入系小鼠,这些不同遗传背景的基因导入系小鼠为移植生物学研究提供了材料.     

大豆遗传转化研究

用苯酚-氯仿-异戌醇-RNase法从草决明、玉米、栽培大豆周89⑦-2-Al、花生、豫豆12等作物幼叶中分离提取DNA，用柱头涂抹法将DNA导入栽培大豆，导入后的当代大豆成荚率为30%～40%，其后代（D1～D4）主要在株高、生育期、叶色、抗病抗倒状性和产量等性状上出现变异，其突变率为2%～4%。以大豆89⑦-2-2Al，玉米90-1和花生为供体的DNA导入受体周So3-1，周86①-1-1等组合的后代变异株，其抗病性提高，生育期缩短5～7d，产量比受体（ck）增加10%，SOD同工酶检测其变异株均多一条供体的谐带或谱带强弱有变化。     

外源nfeC基因导入快生型大豆根瘤菌菌株HN01的行为分析

ｎｆｃＣ基因是从慢生型大豆根瘤菌中克隆到的，与竞争结有关的基因。     

MT—hGH基因注入小鼠受精卵的研究

用显微注射法，将MT－hGH融合基因注入昆明白小鼠受精卵雄原核中，受注的原核卵经体外培养发育的198枚2细胞胚、45枚桑椹胚和161枚胚泡，移植到54只假孕受体，其中16只妊娠产仔只，存活到供试的仔鼠25只，小鼠长到3个月后，切尾制备DNA，经DNA斑点杂交和Southern印迹杂交检测基因整合情况，25只小鼠中3只有融合基因整合，称为转基因小鼠，仔鼠21日龄离乳后饮水中加入锌（Za^ )，以诱导融合基因表达，85日龄时，转基因小鼠体重比对照组重32．0％，还讨论了基因整合方式对胚胎发育的影响。     

转基因鱼基因转移的基本方法及其研究进展

本文综述转基因鱼研究的进展，并介绍基因转移的基本方法和转基因鱼在鱼类育种方面的应用。同时，对转基因鱼研究中尚存在的问题及今后工作的方向作了说明。     

外源基因的导入对Synechococcus sp.PCC7942 SOD活性和同工酶谱的影响

外源DNA导入Synechococcus sp．PCC7942后．通过NBT光化还原和PAGE电泳检测发现转基因藻Synechococcus sp．PCC7942的SOD活性和同工酶谱发生了改变．若外源基因整合在受体细胞染色体DNA上，根据整合位点的不同则能提高或减弱Synechococcus sp．PCC7942的SOD活性，同时增加同工酶谱带．若外源基因不是整合在染色体上而是以质粒的形式存在，则只改变Synechococcus sp．PCC7942 SOD活性而不影响其同工酶谱．     

提高注射法导入外源基因棉铃成铃率的技术研究

对采用注射法导入外源基因的棉铃,在激素种类、不同生态条件、结铃部位、结铃性、整枝方式等方面进行分析,探讨了导入棉铃落铃机理和提高导入棉铃成铃率的技术途径。