地高辛掺入法检测HCV RNA含量在肝病诊断中的应用

目的：研究血清HCVRNA含量与HCV感染者肝病程度的关系。方法：应用地高辛掺入法检测血清HCVRNA含量。在PCR过程中将DIG－dUTP掺入到PCR产物中去，再用PCRELISA法检测PCR产物，结合标准参考样本而达定量目的。结果：丙肝后肝硬化组血清HCVRNA含量显著高于丙型肝炎组。结论：地高辛掺入法检测血清HCVRNA含量可以为HCV感染者的病情判断提供科学依据。     

齐墩果酸和熊果酸衍生物抗炎活性的定量构效关系研究

选取实验测定的15种齐墩果酸和熊果酸衍生物抑制NO释放的IC50作为活性参数,与用半经验的PM3方法计算得到的电子结构指数进行相关和逐步回归分析,得到了定量构效关系方程.结果表明,ELUMO、SA、EHy、QC、QD、QC2、QC12等与齐墩果酸和熊果酸衍生物的抗炎活性有较强的相关性.     

转基因大豆和玉米加工产品的双重精确定量PCR检测方法

在很多国家,转基因生物(GMOs)及其衍生产品必须标有精确的转基因含量.最近研究中,实时定量PCR技术广泛应用于转基因成分的检测.然而,转基因生物的实时定量PCR方法的精确度仍然是一个难以解决的问题,尤其是对于高温处理过的样品.为了更好地准确定量高温处理样品中转基因的含量,对普通的实时定量PCR体系做了一些改进,包括重新设计内源基因和外源基因的引物,使得扩增较短并且大小接近的目标DNA片段,同时引物的GC含量和溶解温度也都相近.此外,采用热处理加工模型(HTPM)的方法,制备了含有转基因大豆GTS 40-3-2的样品,并验证了改进后的实时定量PCR系统.实验结果表明:使用改进后的实时定量PCR体系测定热处理过的样品,发现其中的转基因含量的定量偏差明显降低.同时使用改进的双重实时定量PCR进一步验证转基因大豆的加工食品,结果也显示,转基因含量的定量结果更准确.这些结果表明:改进的双重实时定量PCR将适用于热加工产品的定量检测.     

应用实时荧光定量PCR方法检测实验用猫巴尔通体的感染

目的 建立高效特异的巴尔通体实时荧光定量PCR检测方法,并应用于实验用猫的微生物检测工作中。方法 针对NCBI公布的巴尔通体序列设计特异引物和TaqMan探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立巴尔通体实时荧光定量PCR方法;对该方法的线性、敏感性、特异性及稳定性进行测定;并使用该方法对142个猫样品进行检测。结果 成功建立巴尔通体实时荧光定量PCR方法;该方法线性范围为1.0×101 copies/μL～1.0×109 copies/μL,相关系数为0.998,检测极限达10 copies/μL;特异性结果显示所建方法具有良好的特异性,并在142份实验用猫样品中检测出阳性样品6份。结论 实时荧光定量PCR方法可用于实验用猫巴尔通体的检测工作中。     

高效液相色谱法分析银杏叶提取物中的黄酮化合物

采用反相高效液相色谱法分离测定了银杏提取物水解后的三个甙元－－槲皮素、山萘酚、异鼠李素的含量，用Ｎｏｖａｐａｋ Ｃ１８柱，Ｖ（甲醇）：Ｖ（水）为５０：５０，ｐＨ２．５的磷酸体系为流动相，ＵＶ３６０ｎｍ检测，三个黄酮甙元获得良好的分离，利用各甙元的转换因子计算了黄铜化合物的总含量。这种方法定量结果准确，重视性好。     

DNA的不同提取方法对转基因产品定值的影响

国内外非常重视转基因产品的检测工作,主要依赖于DNA的PCR方法进行检测,其检测结果可靠、稳定、灵敏度较高。尤其在转基因产品的定值实验中,荧光定量PCR的应用起到重要的作用,但是DNA的质量是保证荧光定量PCR定值准确的关键。实验以100%的克螟稻为材料,用CTAB法、商品化的Promega、Qiagen以及TIANGEN提取试剂盒,分别提取克螟稻基因组DNA,经过核酸蛋白分析仪初步测定浓度、纯度以及离子浓度后,分别以水稻内源基因PLD和克螟稻特异性转化体引物及探针实施荧光定量PCR实验,以100%克螟稻为盲样实施定值,来确定一种更适合荧光定量PCR定值实验的DNA提取方法,最终确定Qiagen和TIANGEN提取试剂盒满足荧光定量PCR对100%的克螟稻标准物质定值实验的要求。     

实时定量聚合酶链反应的研究及应用(综述)

实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RQ-PCR）是综合PCR、分子杂交和酶动力学的一种新技术，它根据荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy translation,FRET）的原理进行。目前已经成功地开发出TayManTM、molecular beacon probe、amplifluor technologies、LightCycler和single-labeled probe几种相关的技术，并广泛地应用于病毒学、遗传性疾病和肿瘤等方面的诊断检测。实验研究表明：RQ－RCR作为一种快速、准确的核酸检测方法，在临床及生物学研究方面均具有相当的实用价值。     

一种简便、高效的实时荧光PCR 相对定量方法的建立

摘要: 目的建立一种简便、高效的实时荧光PCR 相对定量方法。方法采用严格一致的引物参数,对Fabp5、 Ppar-α 及β-Actin 三个基因分别设计特异性扩增引物,制备相应的质粒标准品,10 倍梯度稀释后制作标准曲线。并以这三个标准曲线分别单独定量正常小鼠肝组织、H-ras12V 转基因小鼠肝肿瘤周围组织和肿瘤组织中的Fabp5、Ppar-α 和β-Actin 的表达水平,以β-Actin 为内参,分别采用双标准曲线法、2 － △△Ct 法和单标准曲线法对Fabp5 和Ppar-α 的表达进行相对定量分析。结果单标准曲线法与双标准曲线法测定的Fabp5 和Ppar-α 差异性表达的相对定量值没有显著差异,而用2 － △△Ct法获得的相对定量值与双标准曲线法相比,波动较大。结论在引物参数严 格一致的基础上,单标准曲线法是一种可行、简便、高效的实时荧光PCR 相对定量方法。     

薄层扫描法测定入梦香胶囊中小檗碱的含量

采用薄层扫描法测定中药入梦香胶囊中小檗碱的定量方法，取样品内容物用盐酸－甲醇（1：100）浸泡过夜，超声处理后，过滤，收集续滤液，点样于硅胶G薄层析上，选用苯－醋酸乙酯－甲醇－异丙醇－浓氨试液（12：6：3：3：1）为展开剂，另槽加入等体积的浓氨试液，预平衡，展开后用薄层扫描仪于λ=366nm处进行测定，平均回收率为97.33%，不同浓度下相对标准偏差分别为1.83%，2.13%,1.72%。该方法灵敏、准确、简单、专属性强，可用于本制剂的含量测定及质量控制。     

MBT—PF改必性泡塑富集火焰原子吸收光谱法测定微量金和银

用MBT－PF改性泡塑同时富集水样中的微量金和银，用火焰原子吸收光谱法在不同波长下分别测定金和银，得到定量回收，方法简便、快速和灵敏度高，可以测定μg/L含量的金和银。     

定量免疫PCR检测血清胃肿瘤相关MGAgs新方法的建立及在胃癌早期诊断中的预警价值

建立定量免疫PCR检测血清胃肿瘤相关MGAgs新方法及研究其在胃癌早期诊断中的预警价值.采用定量免疫PCR技术检测43例胃癌、37例健康献血员血清中MGAgs的含量.研究显示,血清MGAgs含量在健康对照组与胃癌组组间存在显著差异(P<0.01), 应用定量免疫PCR方法检测50 μL血清MGAgs的截断值相当于为5 972个MKN45细胞裂解所得抗原.研究表明,定量免疫PCR技术检测血清MGAgs抗原具有较高的灵敏性和稳定性,通过对胃癌患者血清中MGAgs进行定量检测,可能用于胃癌的诊断和鉴别诊断.     

巴戟天药材中耐斯糖含量近红外光谱测定方法的建立

目的建立巴戟天药材中耐斯糖含量的近红外光谱测定方法。方法用高效液相色谱法测定114批巴戟天药材中耐斯糖含量,采集近红外光谱后,运用多元散射校正法,结合最小偏二乘法建立巴戟天耐斯糖含量的定量模型。结果建立的耐斯糖近红外光谱定量模型,内部交叉验证决定系数为0.979 1,校正标准偏差为0.909 0,预测标准差为0.909 0,交叉验证的标准偏差为1.093 0。结论该含量测定近红外光谱模型稳定、准确适用于巴戟天药材中耐斯糖的含量测定。     

应用Real Time PCR方法检测病毒灭活去除效率

目的建立检测血液制品中病毒灭活去除效率的模型。方法应用SYBR GREEN I实时荧光定量PCR验证不同方法的病毒去除效率,并用病毒感染力实验验证不同方法的病毒灭活效率。结果以PCR产物为外参的实时荧光定量PCR正确反映出实际核酸含量和检出拷贝数的线性关系,以重组质粒为外参的实时荧光定量PCR实验证明巴氏灭毒法的病毒去除效率低于金磁颗粒法。病毒感染力实验证明巴氏灭毒法灭活效率略高于金磁颗粒法。结论实时荧光定量PCR法联合病毒感染力试验可以有效评价不同方法在病毒灭活和病毒去除方面的差异。     

Co－5－Cl－PADAB间接法测定汞

本文研究了Ｃｏ－５－Ｃｌ－ＰＡＤＡＢ间接测汞的方法。用汞定量将Ｃｏ（ＤＤＴＣ）＿２／ＣＨＣｌ＿３溶液解析，Ｃｏ￣（２＋）进入水相与钴试剂反应生成水溶性紫红色络合物，以加入钴试剂的水样为参比，在５７ｎｍ处测定水溶液的吸光度。汞含量在０～５×１０￣（－３）ｇ／Ｌ之间遵守比尔定律，最低检出限为６．４×１０￣（－５）ｇ／Ｌ，该方法操作简单快速，选择性好。     

实时荧光定量PCR技术检测牙周炎致病菌中16S rRNA DNA探针的制备

利用实时荧光定量PCR和细菌16S rRNA测定技术制备牙龈卟啉菌染色体探针,并进行检测,为进一步研究牙周病可疑致病菌提供方法.主要方法是:厌氧环境下培养牙龈卟啉菌,抽提细菌DNA;根据基因库已知牙龈卟啉菌16S rRNA DNA序列,设计特异性的TaqMan探针和一对引物;经实时荧光定量PCR仪进行细菌DNA样本的PCR反应获得反应曲线.结果表明,细菌DNA样本经PCR反应后,在15个循环时,开始出现扩增曲线,此后荧光逐渐增强,在26个循环后达峰值.由此可见,利用细菌16S rRNA技术制备致病菌染色体探针,经实时荧光定量PCR测定,可以对目标微生物进行准确定性和定量.     

气相色谱及其质谱联用技术定量检测脂肪酸的研究进展

脂肪酸种类繁多，作为人类不可缺少的营养物质，影响到膳食结构平衡、内分泌稳定和代谢综合征发生等。食品、血清和代谢物样本中脂肪酸含量的准确测定对食品品质控制、疾病监测、健康状况评估具有重要意义，同时，定量检测食品、生物检材中的脂肪酸，也可为公安机关刑事案件侦办食品掺伪售假案件、虐待案件、无名尸体案(事)件等提供线索与侦查方向。论述脂肪酸定量检测的最新研究进展，包括样本前处理、定量模式等，比较各种样本前处理、定量模式的优缺点，展望气相色谱及气相色谱-质谱联用技术定量脂肪酸前景，为研究人员对脂肪酸含量的测定及脂肪酸标准物质的研制提供了方法参考。     

HPLC法测定复方双花气雾剂中麻黄碱的含量

为建立一种用高效液相色谱法测定复方双花气雾剂中麻黄碱含量的方法，用C18－ODS为固定相，甲醇－水－三乙胺（20：80：0．1，用磷酸调pH值3．5－4．5）为流动相，检测波长为527nm。结果表明，在进样量2．04－10．20μg范围内，该方法线性关系良好（r=0.9992)，平均回收率为98．9％，RSD为3．61％（n=5)。表明该方法简便、准确、重复性好，可作为该制剂含量的测定方法。     

抗-HBe阳性乙肝患者血清HBV-DNA检测结果分析

HBV感染的诊断，目前国内应用最广的是酶联免疫试验检测乙肝五项指标。自1985年PCR技术问世以来，以惊人的速度广泛应用于生物科学的各个领域，可以直接测定乙肝病人血清中的HBV－DNA，其测定灵敏度可大10－5Pg。由于FCR直接测定病毒DNA，因而具有特珠的临床意义。我们用PCR法检测了134份HBsAg（＋）、抗-HBe（＋）和抗-HBc（＋）的血清标本中的HBV－DNA，并对检测结果进行了分析。现报告如下：1材料和方法1．1标本134份HBsAg（＋），抗-HBe（＋）和抗-HBc（＋）血清标本均来自我院门诊及住院病人。其中男性83例，女性51例…     

利用衍生DNA研制定量检测基因芯片

 为了建立基因芯片定量检测技术体系,在同一张芯片上完成不同浓度DNA的梯度测定,本研究以检测探针序列为基础,合成不同的衍生DNA作为标准曲线测定的探针序列.由于衍生序列与检测探针序列之间不改变碱基配对关系,同时具有相同的PCR扩增序列,使得标准品的浓度与测定值之间具有较好的相关性,从而解决了基因芯片定量测定中的标准曲线制作问题.结果显示,用衍生DNA序列作为标准DNA,其基因芯片测定值与浓度之间的相关性系数达到0.995以上,用此方法建立定量基因芯片测定的浓度与实际浓度一致.本研究为研制定量检测基因芯片提出了新的思路.     

牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)实时荧光定量PCR检测方法,用于牛源性样本中BHV-1的快速检测。方法 根据已发表的BHV-1 gB基因设计特异引物和TaqMan探针,建立BHV-1实时荧光定量PCR方法。并对方法的特异性、敏感性、重复性稳定性等进行测定。用建立的方法对181份牛源性样本进行检测。结果 建立的BHV-1荧光定量PCR检测方法与牛副流感病毒Ⅲ型(BPIV3)、牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)均无交叉反应;检测灵敏度可达到1×101copies/μL;批内变异系数均小于5%。应用建立的方法检测181份牛源性样本,有6份样本BHV-1核酸为阳性。结论 建立的BHV-1荧光定量PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源性样本中BHV-1污染的检测。