重组痘苗病毒对不同哺乳动物细胞株的感染效率及EGFP表达水平研究

研究重组痘苗病毒对不同哺乳动物细胞的感染效率及表达水平，可为痘苗病毒表达系统宿主细胞的正确选择提供依据．本研究利用重组绿色荧光蛋白基因的痘苗病毒WR—EGFP同时感染不同的哺乳动物细胞株，利用流式细胞仪检测EGFP的表达强度．共使用20种哺乳动物细胞株，其中10种人类组织细胞，2种猴组织细胞。8种小鼠组织细胞．结果表明，重组痘苗病毒wR-EGFP对鼠细胞系BHK21和人细胞系A-549的感染效率和表达效率最佳；整体看，痘苗病毒对多数灵长类动物细胞的感染效率和表达效率优于鼠细胞；对贴壁细胞的感染效率和表达效率明显优于悬浮细胞；但没有特别的组织偏嗜性。     

含狂犬病毒糖蛋白基因的重组痘苗病毒(RTTVV-3)传代后生物学特性研究

将重组病毒在原代鸡胚细胞上连续传至30代(P30),其结果P30与第11代(P11)一样,在含中性红和X-gal的琼脂糖平板上为蓝色蚀斑;空斑法测定P11至P30,各代病毒滴度均稳定在3×10~7PFU/mL～4×10~7PFU/mL;血凝试验表明。不同代次的血凝滴度基本稳定在相同水平;Western blot检测P30与P11在同一位置出现相同蛋白带;血清中和试验证实传代后的重组病毒抗原活性及保护性稳定。重组病毒经传30代后,在生物学特性和表达水平上都具有良好的遗传稳定性。     

小鼠脂多糖应答蛋白mlrpS的载体构建及融合蛋白表达

为构建小鼠mlrpS-cDNA基因原核、真核表达载体,大肠杆菌表达其融合蛋白。采用反转录-聚合酶链反应从经脂多糖刺激的鼠NIH3T3细胞cDNA中,扩增出编码mlrpS的cDNA。用限制性内切酶KpnⅠand XhoⅠ消化后,插入原核表达载体pTAT中,经酶切鉴定与测序证实后,转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株。异丙基β—D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导产生融合蛋白。经KpnⅠ和XhoⅠ酶切回收mlrpS-cDNA,插入pcDNA3．1载体中;pcDNA3．1-mlrpS再经KpnⅠ和ApaⅠ酶切后,插入到pEGFP—c1载体上,构建pEGFP-mlrpS融合的真核表达载体。构建mlrpS表达载体经测序证实,与GenBank登录的序列完全一致;双酶切鉴定证实,克隆基因正确插入载体pEGFP及pTAT;SDS—PAGE证实融合蛋白表达成功。说明：成功地构建了mlrpS原核、真核表达载体,成功正确表达了6His／mlrpS融合蛋白。     

丙型肝炎病毒DNA免疫研究进展

DNA免疫是近年发展起来的一种新型免疫技术。由于其具有显的优越性,特别适用于具有高度变异性的丙型肝炎病毒(HCV)疫苗的研制。对丙型肝炎病毒DNA免疫的研究证明,确可诱生较高水平的体液及细胞免疫应答。     

Gene transfer into primary cultures of fetal neural stem cells by a recombinant adenovirus carrying the gene for green fluorescent protein

Objective： To evaluate the transduction efficiency of a recombinant adenovirus carrying the gene for green fluorescent protein （Ad-GFP） into the primary cultures of fetal neural stem cells （NSCs） by the expression of GFP. Methods： The Ad-GFP was constructed by homologous recombination in bacteria with the AdEasy system; NSCs were isolated from rat fetal hippocampus and cultured as neurosphere suspensions. After infection with the recombinant Ad-GFP, NSCs were examined with a fluorescent microscopy and a flow cytometry for their expression of GFP. Results： After the viral infection, flow cytometry analysis revealed that the percentage of GFP-positive cells was as high as 97.05%. The infected NSCs sustained the GFP expression for above 4 weeks. After differentiated into astrocytes or neurons, they continued to express GFP efficiently. Conclusion： We have success- fully constructed a viral vector Ad-GFP that can efficiently infect the primary NSCs. The reporter gene was showed fully and sustained expression in the infected cells as well as their differentiated progenies.     

HPV16、18型E6/E7融合基因痘苗病毒表达载体的构建

目的:构建一种含人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型E6/E7融合基因痘苗病毒表达载体.方法:PCR扩增HPV16型、18型E6、E7基因,克隆到pSC-A载体中,通过定点突变方法,分别构建成含E6/E7融合基因的质粒,即pSC-A.HPV16 E6/E7和pSC-A-HPV18 mE6/E7,并将二者连接成载体pSC-A-HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E(pSC-T,HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E7:T),最后以痘苗病毒表达载体pJ38为转移载体,构建质粒pJ38-HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E7(pJ38-T),对所有重组质粒进行酶切鉴定和测序分析.结果:E6/E7融合基因成功克隆到pJ38上.结论:成功构建表达HPV E6/E7融合基因重组痘苗病毒载体,为研制宫颈癌治疗性疫苗奠定基础.     

油桐尺蠖核型和木(木尞)尺蠖核型多角体病毒的限制性内切酶分析

油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)、木(木尞)尺蠖核型多角体病毒(CpNPV)和用CpNPV感染油桐尺蠖幼虫面得到的病毒CpNPV-Bs,三者经HaeⅢ酶解后的电泳图谱均一致,经HindⅢ酶解后,均获得11条片段。各病毒DNA的总分子量约为57.5×10~6D。本文初步认为BsNPV和CpNPV为同一种病毒。     

基于免疫机制的动态多目标优化免疫算法

作者针对一类决策空间的维数随时间变化的动态多目标优化问题,借鉴免疫应答蕴含的动态进化机制,提出了一种动态多目标优化免疫算法。算法设计中,依据抗体学习机理,设计几种具有自适应能力的免疫算子进化当前抗体群,以及借助免疫系统的识别功能设计环境识别规则,用于加速相似环境的寻优过程。另外,借助两个性能评价指标,经由比较性的数值试验,获得该算法具有较好的搜索效果以及较稳定的环境跟踪能力。     

流感病毒RNA聚合酶重组质粒pQE32-PB2-1转化效率的实验研究

目的:甲型流感病毒RNA聚合酶PB2-1亚基的基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化入受体菌,并优化转化条件,以建立其高效、快速的转化体系.方法:以大肠杆菌DH5α菌株为受体菌,研究了氯化钙溶液浓度(25、50、75、100mmol/L),热休克温度(30、37、42、50℃),转化时间(15、30、60、75min)及热休克作用时间(60、80、100、120sec)对基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化效率的影响.结果:氯化钙溶液浓度、转化时间、热休克温度、热休克作用时间对转化效率的影响有统计学意义(P<0.05).氯化钙溶液浓度和转化时间之间及热休克温度和热休克作用时间之间分别存在交互作用.结论:在本实验条件下,以75mmol/L氯化钙制备感受态细胞,转化60min,经42℃热休克作用120秒后直接涂平板选择转化子,可获得高效、快速的转化效果.     

芜菁花叶病毒衣壳蛋白降解原因的初步研究

通过对广州郊区芜菁花叶病毒芜菁毒系的研究，表明该病毒的衣壳蛋白为单一组分，分子量为２００００。当纯化病毒或病毒蛋白在４℃冰箱中放置两个月后，蛋白质已部分降解，高效液相色谱分析得到两个吸收峰，聚丙烯酰胺凝胶电泳得到分子量为２００００和８７７０的两种组分。降解是由于病毒衣壳蛋白自身的原因造成的。     

A conserved structural motif shared by EIAV gp90 and HIV gp120

Both HIV (human immunodeficiency virus) and EIAV (equine infectious anemia virus) belong to the retroviridae family and lentivirus genus. EIAV is similar to HIV not only in its morphology, genomic structure and antigenicity, but also in its replicative and infectious characteristics. Their env genes comprise surface unit (SU) and trans- membrane protein (TM). The large number of disulfide bonds and N-glycosylation sites are prominent structural properties of SU (HIV gp120 and EIAV g…     

分支DNA探针法检测21例丙型肝炎血清病毒RNA

目前主要依赖检测丙型肝炎抗体来确定对丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染的诊断,但它不能反应机体是否有活动的病毒血症。分支DNA探针法应用合成的DNA分子与靶HCV—RNA特异性的杂交,形成RNA—DNA杂交体,用dioxetane作为底物与化学发光物结合,通过测定其发光强度可直接检测血清HCV—RNA的含量。本文测定21例慢性活动性丙型肝炎血清。HCV—RNA最低值为0.66Meg/ml;最高值为58Meg/ml,21例中86％的数值分布在0.66Meg/m-12Meg/ml的范围内。此方法cutoff值为0.5Meg//ml。我们所测定的21例均高于cutoff值。此方法操作简便,特异性强。为临床丙型肝炎治疗的监测及疗效的判断提供了重要的依据。     

新疆辣椒上一种球状病毒的鉴定

1990年,从辣椒上分离到一个病毒分离物,代号P—9003。人工接种可侵染6科14种植物,回接辣椒产生轻微花叶,不被蚜虫传播,可通过汁液摩擦传染。致死温度80—85℃,稀释限点为10~(-7),体外保活期18天左右。病毒粒体球状,密集时呈多角形,直径33—34nm。该病毒在寄主体内浓度较大,通过差速离心和蔗糖梯度离心容易获得较高浓度的纯化病毒,病毒衣壳蛋白分子量为一个组份,约为27500道尔顿。核酸分子量为三组份,分子量分别为1.24,0.55和0.37×10~6道尔顿。与黄瓜花叶病毒(CMV),蚕豆萎蔫病毒(BBWV),烟草坏死病毒(TNV),烟草环斑病毒(TRSV),香石竹环斑病毒(CRSV)的抗血清不发生反应。与番茄黑环病毒(TBRV)抗血清产生微弱的沉淀线。衣壳蛋白分子由211个氨基酸组成。根据多项测定结果认为,虽P—9003与TBRV抗血清有微弱反应,但其它各项特性与TBRV相差甚远,为非特异反应。P—9003的核酸和蛋白分子量与已知的几个球状病毒组的数据均不相符,因此认为P9003为一种木报导过的球状病毒,暂定名为辣椒轻花叶病毒(PepperMild Mosaic Virus,PMMV)。     

腺病毒介导的bFGF基因对大鼠大脑中动脉闭塞模型的作用

采用改良的Zea Longa法制备大鼠脑缺血模型,研究腺病毒介导的bFGF的基因治疗对大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO) 模型的治疗作用及脑血管发生的影响,将30只SD大鼠随机分为假手术组、空载体组（Ad-null组）和治疗组（Ad-bFGF组）,于造模成功后24h尾静脉给药.检测实验各组脑组织含水率的变化,通过核磁共振的和免疫组化分别检测实验各组大脑梗死体积和血管发生的变化.结果发现治疗组大鼠脑组织含水率和脑梗死面积明显小于空载体组,脑血管密度显著高于空载组.说明腺病毒介导的bFGF基因卡显著减小脑组织含水率和脑梗死面积,促进脑部血管发生,为缺血性脑卒中的基因治疗提供了新的途径.