采用PhR-L20C光生物反应器培养转胸腺素α1基因蓝藻的研究

采用PhR L20C光生物反应器对转胸腺素α1基因聚球藻Synechococcussp.PCC7942进行6批次的培养,结果表明,采用本实验室优化后的培养条件,根据该型气升式光生物反应器所具备的各项性能指标和参数条件进行培养,一个培养收获周期为6d,平均生长速率为0.61OD730/d,6d后藻细胞平均终浓度达到OD730=4.27,绘制了转基因藻细胞的光密度与其干质量的标准曲线,通过曲线得出产率平均约为0.36g/(Ld),最高0.40g/(Ld);最终细胞密度平均可达2.52g/L,最高2.84g/L.     

从猪胸腺提取胸腺素α1的工艺

为了提高猪胸腺的利用价值,探索猪胸腺素活性物质的提取工艺.选取猪胸腺为原料,采用匀浆、凝胶过滤、离子交换层析和丙酮分级沉淀的方法纯化胸腺素α1, 并用Bradford法检测蛋白含量,用SDS-PAGE电泳测定蛋白纯度.将猪胸腺组织匀浆、三次冻融和80 ℃热变性纯化后,上清采用Sephadex G-50柱填料凝胶过滤,然后进行阴离子交换树脂DEAE-C32离子交换层析和丙酮分级沉淀,通过真空冷冻干燥,最后得到胸腺素α1, 纯度为95%以上, 得率为3.84×10 -5.最终得到提取胸腺素α1的有效工艺.     

固相合成胸腺素α1

胸腺素α1是由28个氨基酸残基组成，N端乙酰化的生物活性多肽。采用固相合成方法，以Fmoc氨基酸为原料，经1-氧-3-双二甲胺羧基苯骈三氮唑四氟化硼盐／1-羧基苯并三氮唑(HBTU／HOBt)缩合，三氟乙酸-乙二硫醇-水脱保护，并从Wang树脂上切割下来，粗肽得率为60％，经RP-HPLC纯化，获得纯度在98％以上的目标肽。其ESIMS和氨基酸组分分析结果与理论值相符。     

植物生物反应器瞬时表达外源蛋白的研究进展

植物生物反应器瞬时表达外源蛋白是一种经济的生产方式,而且此种方法安全性高,实验周期短,见效快,为实现医用蛋白的产业化生产提供了一条捷径。本文综述了植物生物反应器瞬时表达体系的种类、特点、接种方法和研究现状。     

免疫组化方法研究胸腺素α1在小鼠肉瘤S180细胞中的表达

探讨了胸腺素α1在小鼠S180肉瘤中的表达及其临床意义．以小鼠肉瘤S180组织和正常小鼠组织为材料，福马林固定和石蜡包埋．运用兔抗胸腺素α1多克隆抗体，按常规免疫组织化学方法检测接种在小鼠皮下的小鼠肉瘤组织以及正常小鼠皮下肌肉组织细胞中胸腺素α1的表达状况．研究结果发现胸腺素α1定位表达在小鼠肉瘤组织细胞的胞浆和细胞核中。免疫组化呈现强阳性．而正常组织细胞内基本无显色，呈阴性．试验结果表明：胸腺素α1在恶性肿瘤细胞小鼠肉瘤组织细胞中高表达．而正常小鼠组织则低表达或不表达．细胞内胸腺素α1蛋白的高表达与肿瘤具有明显相关性，该研究成果可能使胸腺素α1作为一个新的和有价值的肿瘤标记物在临床诊断中得到应用，也为进一步探索胸腺素α1与肿瘤之间相互关系的分子机理研究奠定基础，并通过抑制胸腺素α1这条途径达到控制肿瘤生长的效果．     

植物生物反应器瞬时表达外源蛋白的研究进展

植物生物反应器瞬时表达外源蛋白是一种经济的生产方式。而且此种方法安全性高，实验周期短，见效快，为实现医用蛋白的产业化生产提供了一条捷径。本文综述了植物生物反应器瞬时表达体系的种类、特点、接种方法和研究现状。     

植物生物反应器生产药用蛋白研究概述

鉴于微生物和动物生物反应器生产蛋白在技术和生产量上即将到达瓶颈的限制,植物已经成为一种具有吸引力的替代体系来满足对药用蛋白不断增长的需求。本文对几种不同的植物表达系统（稳定的核和叶绿体转化系统,瞬时病毒转化系统）的优缺点进行了评估。并对植物生物反应器的优越性,存在问题及解决方法,应用和展望作了阐述。     

抗体药物的植物反应器生产

大量的重组抗体被用于疾病的预防、诊断和治疗．目前．这些重组抗体绝大多数是利用鼠源细胞生产的．它的缺点是有潜在的隐患和价格昂贵．然而．植物作为反应器生产抗体药物既具有安全性又可大规模廉价生产的特点．具有广阔的前景．     

新型的生物反应器-叶绿体

叶绿体作为一种新型的生物反应器 ,具有高效表达、定点整合、安全性好、表达原核性、后代遗传稳定等优点 ,近几年呈现出诱人的发展前景 .本文着重介绍叶绿体转化体系的特点、转化方法、优越性、国内外研究进展、存在问题与解决策略以及前景展望     

植物生物反应器细胞悬浮培养研究进展

利用生物反应器进行植物细胞悬浮培养可以缩短植物细胞的生长周期，但进行大规模植物细胞悬浮培养会受到植物自身特点和生物技术的限制。通过与微生物相比较，笔详细介绍了植物细胞悬浮培养的特点，分析了用于植物细胞悬浮培养的反应器类型及其特点和适用范围，并提出以植物快速繁育为主要目标的植物生物反应器的研究方向。     

抗肺癌单链抗体融合胸腺素α1重组体的构建

以重组质粒pET39-Tα1为模板,PCR获得Tα1基因,连接到pUCm—T载体上。对质粒pET22-SeFv、pUCm—T—Tα1双酶切,回收相应片段,将Tα1连接到SeFv的C端,成功构建pET22-SeFv—Tα1重组体。     

抗体药物的植物反应器生产

大量的重组抗体被用于疾病的预防、诊断和治疗.目前,这些重组抗体绝大多数是利用鼠源细胞生产的,它的缺点是有潜在的隐患和价格昂贵.然而,植物作为反应器生产抗体药物既具有安全性又可大规模廉价生产的特点,具有广阔的前景.     

胸腺素α1对鸡生长性能及免疫器官发育的影响

通过对照试验在4日龄和7日龄时,低剂量组、中剂量组和高剂量组每只鸡分别肌注0.015 mg*kg-1,0.03 mg*kg-1和0.06 mg*kg-1体重剂量的胸腺素α1(Tα1),对照组注射等量的生理盐水.试验期为56 d,观察Tα1对鸡体重、饲料转化率、法氏囊指数、胸腺指数、和脾脏指数的影响.结果表明在35,42和56日龄时,低剂量组鸡的体重显著高于其他各组(P<0.05),而在14和21日龄时各组平均体重差异不显著(P>0.05).在整个试验期间,低剂量组的饲料报酬均高于其他三组;低剂量组的法氏囊指数均高于其他三组,并在14日龄时与对照组和中剂量组差异显著(P<0.05),而在35日龄与对照组和高剂量组差异显著(P<0.05);低剂量组的胸腺指数也高于其他三组,14日龄时与对照组差异显著(P<0.05),而与中剂量组和高剂量组差异不显著(P>0.05),但在35和56日龄时差异显著(P<0.05);低剂量组的脾脏指数高于其他三组,且在35和56日龄差异显著(P<0.05).     

抗胸腺素α1(Tα1)多克隆抗体的纯化及转基因藻中Tα1的检测

采用不同浓度的硫酸铵分级盐析纯化抗Tα1多克隆抗体,然后用不同量的牛血清白蛋白(BSA)与兔抗Tα1抗体进行中和,以去除血清中的抗BSA抗体,并利用纯化后的抗Tα1多克隆抗体检测转基因藻中Tα1.结果表明:采用25%(NH4)2SO4进行分离纯化,并将BSA加入到血清中进行中和,37℃处理30min,BSA的量与血清的比例以1μL血清 15μgBSA可达到中和血清中的抗BSA抗体的目的.获得的抗Tα1抗体效价与未进行分离前基本相同,并且阴性本底低.采用ELISA方法检测野生藻和转基因藻中的Tα1,转基因藻的Tα1OD450值比野生藻的高2.1倍以上,提示Tα1在转基因藻中成功表达.实验证明,此方法能有效纯化抗胸腺素α1多克隆抗体,获得特异性强的抗胸腺素Tα1抗体,并且效价不受影响.     

胸腺素α原基因的克隆及在大肠杆菌中的融合表达

胸腺素α原(ProTα)作为一种免疫增强剂,对各种免疫缺陷疾病、病毒感染以及肿瘤都具有一定的作用.此外ProTα可以作为核蛋白参与细胞增殖,在肿瘤的预测、诊断及治疗中有一定应用.根据人胸腺素α原已发表的核苷酸序列,设计了一对特异性引物(P1/P2),应用RT-PCR法从中国人外周血中克隆到ProTα基因,将扩增产物连接到pMD18-T载体中并转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组质粒进行序列测定;同时用EcoRI和BamHI双酶切PCR产物,将该基因片断插入经同样双酶切的质粒pGEX 6P-1中,转化大肠杆菌BL21中进行表达.结果表明,克隆到的ProTα基因与参考的氨基酸同源性为99.70%;原核表达产物经过SDS-PAGE电泳分析,融合蛋白分子量为37 ku,主要以可溶形式存在.     

胸腺素α_1对鸡生长性能及免疫器官发育的影响

通过对照试验在 4日龄和 7日龄时 ,低剂量组、中剂量组和高剂量组每只鸡分别肌注 0 .0 1 5 mg·kg- 1 ,0 .0 3 mg· kg- 1 和 0 .0 6mg· kg- 1 体重剂量的胸腺素α1 ( Tα1 ) ,对照组注射等量的生理盐水。试验期为 5 6d,观察 Tα1 对鸡体重、饲料转化率、法氏囊指数、胸腺指数、和脾脏指数的影响。结果表明 :在 3 5 ,42和 5 6日龄时 ,低剂量组鸡的体重显著高于其他各组 ( P<0 .0 5 ) ,而在 1 4和 2 1日龄时各组平均体重差异不显著 ( P>0 .0 5 )。在整个试验期间 ,低剂量组的饲料报酬均高于其他三组 ;低剂量组的法氏囊指数均高于其他三组 ,并在 1 4日龄时与对照组和中剂量组差异显著 ( P <0 .0 5 ) ,而在 3 5日龄与对照组和高剂量组差异显著 ( P <0 .0 5 ) ;低剂量组的胸腺指数也高于其他三组 ,1 4日龄时与对照组差异显著 ( P <0 .0 5 ) ,而与中剂量组和高剂量组差异不显著( P>0 .0 5 ) ,但在 3 5和 5 6日龄时差异显著 ( P <0 .0 5 ) ;低剂量组的脾脏指数高于其他三组 ,且在 3 5和 5 6日龄差异显著 ( P <0 .0 5 )。     

人超氧化物歧化酶-胸腺素α1融合蛋白在毕赤酵母中的表达与活性检测

为了增强胸腺素α1(Thyα1)的稳定性和免疫功能,采用胸腺素α1与人超氧化物歧化酶(hSOD)融合的策略,构建了6HishSOD-(G4S)1-Thyα1和6His-hSOD-(G4S)2-Thyα1 2个融合基因,并分别在毕赤酵母中实现了高水平表达.重组表达的融合蛋白经过Ni-NTA亲和层析纯化后,纯度达到80%以...     

培养紫苏细胞的生物反应器的比较

在培养紫苏植物细胞以生产花色素的过程中，选择或设计了鼓泡式和搅拌式四种不同的生物反应器，考察了各种反应器中的培养条件，结果表明，基于花色素的生产率，鼓泡式和带螺旋桨的搅拌式反应器优于两种涡轮桨反应器，本研究为该细胞培养所用反应器的选择、设计、优化和放大，提供了一定的实验依据。     

乳腺生物反应器在生物制药领域的研究进展

乳腺生物反应器是利用转基因动物生产功能蛋白质的技术.这项技术开创了基因工程制药的新途径.而其具有的低成本、高质量,稳定的生物学活性、较短的生产周期、较高的经济效益等一系列研发特点,使得这一生产方式成为医药产业的主要手段.