苏云金芽孢杆菌cyt1Aa基因在拟步甲亚种菌株中的表达及重组菌株杀虫活性研究

将含苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis,简称Bti)cyt1Aa基因的质粒电激转化至对鞘翅目害虫有专一活性的Bt拟步甲亚种(Bacillus thuringiensis subsp.tenebrionis,简称Btt)菌株中进行表达,获得重组菌株Btt-WF45。对表达产物进行SDS-PAGE分析,显示Cyt1Aa蛋白获得了大量表达。生物测定结果表明,Btt-WF45对鞘翅目小圆叶甲(Plagiodera Redtenbacher)幼虫没有毒力,对致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)的毒力比对照菌株4Q7-WF45高0.33倍,对白纹伊蚊(Aedes albopictus)的毒力比4Q7-WF45高0.63倍。由于在重组菌株Btt-WF45中Cry3A蛋白的表达量太低,所以在该结果中未能显示Cyt1Aa蛋白与Cry3A蛋白是否存在协同增效作用。     

酸碱度对温和噬菌体存活与吸附效率的影响

实验测定了ｐＨ对Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｖａｒ．ｅｎｔｏｍｏｃｉｄｕｓ温和噬菌体ＴＰ３存活与吸附效率的影响作用。结果表明：在不同ｐＨ的介质中,ＴＰ３存活的能力相差很大;酸性介质及高碱性介质对ＴＰ３都有不同程度的瞬间灭活作用;ＴＰ３存活的最适ｐＨ为７．７,且适宜其存活的ｐＨ范围很窄;ｐＨ不同,ＴＰ３吸附到苏云金芽孢杆菌表面上的效率也不同,在ｐＨ≥９范围内,ｐＨ升高,吸附效率降低。     

Streptomyces alboflavus抗真菌物质对串珠镰刀菌的抑制机理研究

研究了Streptomyces alboflavus产生的抗真菌物质对串珠镰刀菌的抑菌机理。通过pH纸层析和捷克八溶剂纸层析实验对抗菌物质进行定性分析;利用荧光显微镜和扫描电子显微镜观察抗菌物质对串珠镰刀菌细胞膜和细胞壁的破坏作用;通过细胞膜和细胞壁主要组分对抑菌物质的拮抗效果,探索抑菌物质的作用靶点;用高效液相色谱法检测抑菌物质对串珠镰刀菌细胞膜中麦角甾醇的抑制作用。极性实验显示,该物质呈中性,捷克八溶剂纸层析表明,该物质属于非水溶性Ⅰ型抗生素;光学显微镜观察,抑菌物质对串珠镰刀菌孢子萌发有抑制作用,同时使菌丝畸形,顶端、中部出现膨大泡囊,呈“念珠状”;经PI染色后荧光显微镜观察,抗菌物质作用后的菌丝细胞膜通透性改变,进一步通过扫描电子显微镜观察,发现泡囊状菌丝表面凹凸不平,并残留有碎片;抑菌物质对细胞壁和细胞膜的组分拮抗作用和高效液相色谱方法检测显示,抑菌物质影响细胞膜中麦角甾醇的合成。研究结果表明,Streptomyces alboflavus产生的抗真菌物质发挥抑菌作用时,影响串珠镰刀菌细胞膜中麦角甾醇的合成。本研究可为抑菌物质的鉴定和拮抗菌的应用提供理论参考。     

多轮复合诱变选育抗真菌抗生素高产菌株及其发酵条件研究

对抗真菌抗生紊Terreicacid—179M(简称179M)产生菌黄柄曲霉(Aspergillus flavipes)进行紫外线、亚硝基胍、紫外线加亚硝基服多轮复合诱变，以对自身次生代谢产物抗性作为筛选策略，选育到对自身抗生素抗性提高且发酵相对效价提高到383％的高产菌株。菌落形态观察发现在SabauraMd(SBD)培养基上产孢子丰富且形成黄色孢子和黄色菌丝的179M产量较高。179M最佳发酵温度为28℃，培养基最适起始pH值为6。     

苏云金芽孢杆菌MS7培养条件的优化

通过单因子试验对苏云金芽孢杆菌MS7菌株的培养条件进行优化．研究表明,该菌株的最佳培养基组成和发酵条件为：蔗糖10．0g／L、牛肉膏10．0g／L、K2HPO42．0g／L,初始发酵pH7．0,装液量25mL,培养温度35℃,培养时间36h,优化后细菌总数可达1．2×10^8CFU／mL．     

抗真菌抗生素高产菌株的推理选育及其发酵调控研究

探讨海洋霉菌M182菌株对自身次生代谢产物－抗真菌抗生素M182A抗性与该抗生素产量的关系;通过亚硝基胍、亚硝基胍加紫外线复合处理,选育到对该抗生素抗性有明显提高和抗生素发酵相对效价提高到244％的高产突变菌株。稳定性实验表明该突变株遗传稳定性良好。在液体发酵中,利用天然有机营养物质发酵效果优于合成化合物。合适的温度刺激能促进该物质的形成。     

透明颤菌血红蛋白基因在苏云金杆菌中的表达

采用大肠杆菌与枯草杆菌的穿梭质粒pMK4作为载体,构建了含有果聚糖酶基因(sacB)启动子和vgb基因的重组质粒pMK-SV.通过原生质体和电转化,将pMK-SV转入苏云金杆菌中,经影印筛选得到转化子Bt4.对Bt4诱导表达,与原菌株相比Bt4的生长量增加了20.2%.     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因的克隆与结构分析

分别克隆了叶片、苔藓和土壤中分离的Bacillus thuringiensis的aiiA基因,并对其编码的蛋白AiiA-P28、AiiA-B19和AiiA-S2进行了理化特征分析、进化树分析和空间结构的研究.结果表明AiiA-P28、 AiiA-B19和AiiA-S2分子质量均为28 ku ;等电点分别为4.77、4.77、4.93;三者均为亲水性蛋白,具有很高的同源性.进化树分析结果表明叶片中分离的AiiA-P28与苔藓中分离的AiiA-B19进化距离较近, 而土壤中分离的AiiA-S2则与它们的进化距离较远.三维结构分析表明,AiiA蛋白具有典型的αβ/βα折叠的空间结构.     

粉被马利娅霉(Marianaea pruinosa)对苏云金杆菌抗紫外线辐射的保护效应

本文首次报道了粉被虫草的无性型粉被马利娅霉(Marianaea pruinosa Liang)对苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis subsp. galleria Hermpel)的抗紫外辐射的保护作用,建立了粉被马利娅霉抗紫外辐射物质的苏云金杆菌检测法。用粉被马利娅霉的培养液,菌丝体浸提液及孢梗束浸提液所培养的苏云金杆菌经紫外辐射后,活菌数依次比对照提高26.3％,138.6％和187.8％,揭示了抗辐射物质的含量是梗孢束高,菌丝体次之。培养液最低的趋势,主要为胞内产物。不同来源的粉被马利娅霉菌株抗紫外辐射物质的含量是有差异的。     

Bt培养基配比及伴孢晶体纯化条件的优化

苏云金芽孢杆菌[Bt(HD-1)]发酵中培养基的配方影响发酵水平,还决定发酵产物杀虫毒力的效果.本实验在基础参数试验基础上,采用均匀设计法对Bt发酵中培养基组分、杀虫晶体蛋白纯化条件进行优化,并直接采用发酵中伴孢晶体量作为最终评价指标.结果表明:Bt培养基成分对发酵的主要影响因素依次为:MgSO4、蛋白胨、可溶性淀粉,最佳用量为(g/L):1.3、2.6、4.5;晶体蛋白双液相纯化的主要影响因素依次为:K2HPO4/KH2PO4质量比、PEG浓度、沉淀量、离心速度,最佳条件为:3:1、110 g/L、1 g、1 440 r/min,其中离心速度若选500 r/min,可能对晶体纯度提高更有利,但低速对回收率有负影响.     

几丁质酶产生菌C4发酵培养基优化及其对Bt的增效作用研究

为提高几丁质酶产生菌C4的产酶效率,加强其对Bt（Bacillus thuringiensis）的增效作用,本研究通过培养基优化,筛选出了该菌发酵优化培养基,配方为：蛋白胨0.8%,酵母膏0.8% KNO3 0.8%,MgSO4 0.05%,KH2PO4 0.03%,pH 7.5. 28℃,180 r/min,培养48 h至对数期,加入1.0%的胶体几丁质,诱导C4菌产生几丁质酶.在此条件下,C4菌产酶周期由5 d缩短为4 d;几丁质酶活力由2.68 U/mL提高到5.95 U/mL.用此发酵菌液与B