Asp38与果蝇醇脱氢酶的辅酶特异性

果蝇醇脱氢酶依赖于ＮＡＤ＾＋,Ａｓｐ３８是一个保守残基,它与ＮＡＤ＾＋的ＡＭＰ单位中核糖羟基作用。野生型果蝇ＡＤＨ的Ａｓｐ３８突变成Ａｓｎ３８（Ｄ３８Ｎ）后,Ｋｍ（ａｐｐ）ＮＡＤＰ值下降至１／６２,Ｋｃａｔ／Ｋｍ（ａｐｐ）ＮＡＤＰ值则增加至５９０倍（ＰＨ９．８）。     

基因多位点定点突变法机理的探讨

用多个化学合成的寡聚脱氧核苷酸作为诱变引物，对枯草杆菌蛋白酸疼Ｅ基因进行体外突变，借此系统地探讨了基因多位点定占突变中引物的类型和数量、引物的分布、引物间的相互位置、引物与模板ＤＮＡ间摩尔数比等因素对突变效果的影响。     

我国东部沿海地区黑腹果蝇醇脱氢酶座位的多态性和渐变群研究

应用标准琼脂糖平板电泳技术,对我国东部沿海地区9个地方黑腹果蝇自然群体的醇脱氢酶座位的等位基因频率进行了测定。结果发现,在全部的群体中,该座位皆是多态的,且基因频率表现出纬度渐变群分布。还对这种多态性和渐变群形成的可能机理进行了讨论。     

蛋白质分子的定点突变和化学修饰

回顾蛋白质工程研究及应用技术、手段和方法,分析定点突变及化学修饰在改造蛋白质分子结构与功能方面的异同。定点突变技术可以随心所欲地在已知DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段。该方法与使用化学因素导致突变的方法相比,具有突变率高、简单易行、重复性好的特点。     

棒状链霉菌扩环酶R306位点的定点突变

目的:通过对棒状链霉菌的脱乙酰氧基头孢菌素C合酶(DAOCS)C末端R306位点突变,改变酶的活力和底物专一性。方法:利用生物信息学和空间结构分析推测,利用定点突变技术,对DAOCS的C-末端R306位点进行定点突变。结果:将DAOCS的C末端R306位点突变为其它3种性质相异的氨基酸,显示酶的活力和底物专一性都有一定改变。结论:DAOCS的C末端修饰对于提高酶活力或改变酶的底物专一性是一个非常有效的策略。     

酿酒酵母rho1活性突变细胞株的构建

酿酒酵母CWI信号途径中,包含了一个与细胞表面感受器配对的小G蛋白家族,叫做RHO1.作者采用定点突变的方法,构建了rho1活性突变细胞株,为进一步研究Rho1功能奠定了基础.     

计算机辅助木糖还原酶定点突变的生物信息学分析

木糖还原酶（xylose reductase,XR）是木糖代谢生成乙醇途径中一个重要的酶,目前利用纤维素生成酒精的关键问题之一：木糖代谢过程中XR和木糖醇脱氢酶（xylitol dehydrogenase,XDH）的氧化还原不平衡。本研究借助生物信息学手段（酶三维结构建模、酶和辅酶分子对接）,充分分析数据库资源,找到了一些可能影响XR酶活性或辅酶依赖性的关键氨基酸。毕赤氏酵母XR与NADP之间有Lys21（K）、Val222（V）、Glu223（E）、Phe236（F）和Thr273（T）;毕赤氏酵母XR与NAD之间有Val222（V）、Glu223（E）、Phe236（F）、Glu237（E）和Thr273（T）;热带假丝酵母XR与NADP之间有Asn278（N）和Arg282（R）。对比两种辅酶与毕赤氏酵母XR形成氢键的氨基酸,如果使毕赤氏酵母XR只与辅酶NAD结合,则可以将Lys21替换成其它的氨基酸,因Lys21在所有XR序列中完全保守,需要进行氨基酸替代模拟计算预实验,在确保酶三维结构不变及NAD可以结合XR的前提条件下替代Lys21;如果使毕赤氏酵母XR只与辅酶NADP结合,则可以将Glu237（不完全保守）替换成其它的氨基酸。另外,还可以根据需要将这些形成氢键的氨基酸进行组合替代。要改变热带假丝酵母XR的NADP依赖性,可以替代Asn278（N）和/或Arg282（R）（不完全保守）。本研究为进一步酶的理性设计（提高活性及改变辅酶依赖性）并在分子水平上对木糖还原酶进行改造打下了基础。     

发夹状核酶G11 突变对体外切割活性的影响

为了研究发夹状核酶结构中G 11 特定核苷酸对于其体外切割活性的影响,用 32 P标记长度为267nt含有乙型肝炎病毒C区pKC的体外转录物作为靶RNA,把合成的G 11 位突变的发夹状核酶基因片段克隆入自剪切核酶载体p1.5内形成pHpRz;利用 32 P标记pHpRz的体外转录物,凝胶电泳进行核酶的鉴定和纯化.把未标记的各种核酶与同位素标记的靶RNA在不同条件下进行切割反应,凝胶电泳,放射自显影分析反应结果.切割结果显示与底物的靶序列完全互补的发夹状核酶具有最高的切割活性,随着与靶序列的互补能力降低发夹状核酶的切割活性逐渐下降,甚至消失.这表明发夹状核酶结构中的G 11 位点对于发夹状核酶的切割活性不是必需的,所以与发夹状核酶的G 11 位点相对应的靶序列的选择不受此位点的限制.     

脱毛碱性蛋白酶定点突变的初步分析

来自于Bacillus pumilus菌株BA06的碱性蛋白酶DHAP具有良好的脱毛能力. 为了更好地了解DHAP的催化特性和进一步改造使之更加符合制革工艺的要求, 根据蛋白质同源建模和嗜冷嗜热酶氨基酸组成的统计分析结果, 确定了13个氨基酸位点进行定点突变. 通过牛奶平板和对粗酶液在不同温度和热稳定性方面的活性进行了分析. 结果发现位于DHAP空间结构上底物结合“口袋”开口处α-螺旋上的氨基酸残基(E220, V223和K244)严重影响酶的活性; 位于底物结合口袋袋底的三个保守位点V256L、V25     

甲醇对果蝇寿命影响的研究

目的:研究甲醇对果蝇寿命的影响.方法:将雌雄果蝇随机分为四组,分别用含甲醇为0%、0.1%、0.4%和1.6%的培养基进行喂养,每日观察并记录各组果蝇死亡数.三天更换一次培养基.结果:随着甲醇浓度的提高,雌雄果蝇的最高寿命、平均寿命和半数致死时间都缩短.结论:甲醇的毒性作用使雌雄果蝇的寿命显著降低.     

洗涤剂对果蝇生长发育和生殖的影响

为研究洗涤剂对果蝇生长发育和生殖的影响.本实验取亲本置于不同浓度受试物的培养基中,培养得到F1代;随机取2对F1代处女蝇作为F2代亲本,于各相应浓度的培养基中培养.记录F2代的生长发育状况,获得了每管果蝇中幼虫、蛹及成虫首次出现的时间,并统计各浓度梯度下每管果蝇每天羽化的数目.结果表明:经洗涤剂处理后,果蝇后代的数量随着洗涤剂浓度的升高而减少,果蝇后代的羽化速度随着洗涤剂浓度的升高而降低,果蝇的发育也随洗涤剂浓度的升高而减慢.     

北五味子对果蝇繁殖力的影响研究

研究了北五味子对果蝇繁殖力的影响.在培养基中加入不同重量的北五味子干燥果肉粗粉进行果蝇培养,在一定时间内统计完成羽化的F1、F2果蝇的数量.结果表明,与对照相比,添加北五味子的3个处理F1羽化成虫数量显著增多(P<0.05),其中,添加1%北五味子干燥果肉粗粉的处理果蝇数量较对照增加了45.75%.这表明北五味子能够显著地增强果蝇的繁殖力.本研究为果蝇的高效培养繁殖提供了科学依据.     

xyl-d二型乙醇脱氢酶(SADH)G198R突变体的研究

本研究通过设计简并引物及文献参考,PCR 克隆得到嗜热厌氧菌菌株 xyl-d 的SADH,并利用定点诱变技术将该酶的198位苷氨酸(Gly)突变为精氨酸(Arg)。将野生型和突变基因连接到原核表达载体pET28a,IPTG诱导表达,再经镍柱纯化,然后比较了两个蛋白分别以 NAD/NADH,NADP/NADPH 为辅因子、异丙醇或异丁醛为底物、55℃条件下的酶活。发现突变后蛋白的总体催化活性相对于野生型有所下降,其中突变蛋白对 NAD/NADH 的亲和性分别下降了约8倍和6倍,而且对NADPH 的亲和性下降也非常明显,但对NADP的亲和性变化却不大。     

青霉素G酰化酶调节基因定点诱变的研究

构建了大肠杆菌中青霉素G酰化酶（PAC）的调节基因（pacR）翻译起始密码定点突变株。对突变后PAC的表达调控特征进行了研究，结果表明：突变株的pac基因表达后能正常加工成24ku、65ku的α亚基和β亚基；突变后，虽然PAC表达仍需要苯乙酸诱导，但是，可诱导性提高，形成低组成型表达，无葡萄糖有分解代谢物阻遏效应，因而pacR对PAC表达水平存在着影响，pacR基因是葡萄糖以及它的分解代谢物在分子水平上影响PAC表达的另一作用因素。采用突变株进行发酵生产中，PAC产量较亲株提高3倍，而且可以采用葡萄糖作为碳源，有利于改善PAC的生产。     

Cysteine Not Required for Catalytic Activity of Adenosine Deaminase

ＣｙｓｔｅｉｎｅＮｏｔＲｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒＣａｔａｌｙｔｉｃＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＡｄｅｎｏｓｉｎｅＤｅａｍｉｎａｓｅ＊ＣｈａｎｇＺｅｎｇｙｉ（昌增益），ＤａｖｉｄＫ．Ｗｉｌｓｏｎ＋，ＲｏｄｎｅｙＥ．Ｋｅｌｅｍｓ＋，ＦｌｏｒａｎｔｅＡ．Ｑｕｉｏｃｈｏ...     

一例果蝇镶嵌体形成可能性的研究

在杂交劣生试验中,发现了一只镶嵌体雌蝇。其右侧的四个性状与父本相同而左侧的四个性状与母本相同。故对该镶体的种系基因型做了三点测交试验,并检查了她的后代的唾腺染色体。可推测,这只镶嵌体是极体与受精卵共同发育而来。     

启动子对外源基因在转基因植物中表达的影响

将来自ｐＢＩ１２１质粒的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子片段插入到ｐＢＩ１２１的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子与ＧＵＳ基因之间，构建了串联的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子载体ｐＬＢ３８．通过三亲交配，将ｐＢＩ１２１及ｐＬＢ３８分别转移到含ｐＧｖ３８５０的农杆菌中，成为适合本研究的双元载体。以叶圆盘转化法将外源基因转入烟草，获得了２种转基因植株。经ＤＮＡ分子杂交、ＮＰＴⅡ点分析、ＧＵＳ荧光定性及定量分析，证明外源基因已整合进烟草基因组并获得表达。ｐＬＢ３８的ＧＵＳ表达量为ｎＢｌ１２１的３～４倍，这表明启动子数目的不同会直接影响其启动基因的表达水平。     

郑州黑腹果蝇自然群体P—M细胞型多态性研究

应用性腺败育频率的遗传分析方法，对郑州黑腹果蝇自然群体的Ｐ因子活性和细胞型进行了较详尽的剖析。结果发现，该群体的Ｐ因子活性是单态的；而细胞型在群体、单雌系内和个体间皆表现出多态现象；该群体为缺乏完整Ｐ因子的Ｍ′品系。提出了Ｑ因子调控模型，以解释在缺乏完整Ｐ因子的Ｍ′品系中细胞型决定和多态现象产生的机理，并对细胞型的频率分布规律与平均ＧＤ（性腺）不育频率之间的内在联系进行了讨论。     

北京棒杆菌天冬氨酸激酶M372I-T379S双突变体的构建及其酶学性质

为构建高酶活力天冬氨酸激酶(aspartokinase, AK), 并削弱或解除Lys(lysine)反馈抑制作用突变体, 通过定点突变和高通量筛选技术构建突变体M372I,T379S和M372I-T379S, 对野生型（WT）和突变体分别进行诱导表达、 纯化及酶学性质表征. 结果表明： 突变体M372I,T379S和M372I-T379S AK与WTAK相比, V_max分别提高了13.77,15.02,15.60倍, K_m和n值均降低； 最适pH值分别升高为8.0,8.5,8.5, 且半衰期分别延长了1.0,0.9,2.3 h； M372I-T379S AK最适温度为30 ℃, 比WT AK高2 ℃； 当浓度为1~10 mmol/L时, 突变体均削弱或部分解除了抑制剂Lys的反馈抑制作用.