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相似文献
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1.
SlNPV PK基因的部分序列分析   总被引:7,自引:0,他引:7  
SlNPV基因组DNA的HindⅢ-Xba片段上含有部分的PK基因,SlNPVPK的氨基酸序列与HaNPV,HzNPVSpliNPV,AfNPV,AcNIV,LdNPVPK氨基酸序列的同源性分别为45%,44%,89%,37%,38%和37%,其上含有蛋白激酶的特征序列IVHANDVKLENVL。  相似文献   

2.
斜纹夜蛾NPVp74基因的克隆及部分序列分析   总被引:6,自引:0,他引:6  
以含p74基因的AcNPVEcoRⅠ-P片段作探针,与SlNPV基因组在非严格条件下进行Southern杂交,将SlNPVp74基因定位于4900bp的SlNPVXhoⅠ-P片段.对SlNPVXhoⅠ-P片段中的一段940bp的DNA片段进行序列测定,通过internet经BLAST与Gen-Bank中的database比较分析发现,序列中的一段243nt序列与AcNPVp74基因有60%的同源性,一段81nt序列与AcNPVp74基因的同源性高达79%.与CfNPVp74相比,2段264nt和100nt序列分别有60%和71%的同源性.测得序列中的部分序列与BmNPV、OpNPVp74基因也有高达58%~78%的同源性.同时,这部分序列编码的氨基酸与AcNPV及OpNPVP74蛋白的氨基酸序列也有很高的同源性.结果表明所测序列的一部分为SlNPVP74蛋白C-端的编码序列.  相似文献   

3.
根据小RNA 病毒科( Picornaviridae) 中病毒RNA 所具有的结构特征, 采用mRNAcapture kit 提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒(Chinesescabrood virus CSBV) 的RNA, 并以之为cDNA合成的模板. 依据小RNA病毒科中的脊髓灰质炎病毒结构蛋白基因序列设计了一对引物VP5和VP3 , 通过PCR 扩增获得预期大小约为1 100 bp的DNA 片段, 将此片段克隆到pGEMTeasy载体上并直接测序. 序列分析表明, 该片段为中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因, 与意蜂幼虫囊状病病毒结构蛋白基因序列的同源性为86-8 % , 与之对应氨基酸序列的同源性高达93-4 % . 该病毒株为一种新型的蜜蜂囊状幼虫病病毒株  相似文献   

4.
斜纹夜蛾核多角体病毒egt基因的克隆和部分序列分析   总被引:7,自引:0,他引:7  
用AcMNPVegt基因中的保守区部分片段为探针,通过Southern杂交确定SlMN-PVegt基因的位置在PstⅠ4970bp和XbaⅠ2600bp的片段上.采用双链DNA序列分析方法测序,在2600bp片段上的EcoRⅠ位点两侧得到594bpDNA碱基序列,用计算机DNASIS和PROSIS软件,将594bpDNA碱基序列所推测的氨基酸序列与AcMNPV和SliMNPV的egt基因氨基酸序列进行同源比较,其同源性分别为45%和86.5%.  相似文献   

5.
按照马铃薯卷叶病毒(PLRV)核苷酸序列,针对CP基因及其上游基因间隔区全长约0.8kb的区段设计合成两个特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株(PLRV-Ch)的RNA为模板,反转录合成CDNA第一条链,再经PCR扩增合成cDNA,将CDNA克隆于pUC19质粒.限制性酶切分析和核苷酸序列测定表明克隆的PLRV-Ch外壳蛋白(CP)基因及其上游基因间隔区的全长CDNA共824个核苷酸,与国外报道的4个PLRV分离株的核苷梳序列相比具有高度同源性.PLRV的外壳蛋白基因序列与其上游基因间隔区相比保守性更强.  相似文献   

6.
猪瘟病毒HCLV株E2核苷酸序列与结构分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
用RT-PCR技术从CSFV HCLV株F482代感染兔脾的细胞总RNA中分段扩增出CSFV E2基因特异的3个部分重叠的DNA片段,并将之分别克隆到pGEM-T载体上,经核苷酸序列测定和片段重叠完成了包含E2全长基因的1144bp序列的测定,其GC含量为49.0%,核苷酸序列与国外报道的各株病毒的E2基因同源性分别不83.5%_97.5%.  相似文献   

7.
AcNPV增强子hr5增强HBsAg基因表达的研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
用形成包涵体(OOC+)并能利用人工合成启动序列和多角体XIV启动子表达外源基因的转移载体质粒pSXIVVI+X3将多角体基因、乙型肝炎病毒表面抗原(HBSAg)基因和苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的增强子hr5部分序列同时插入无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒TnNPV-SVI-G基因组中,得到两株高效表达HBsAg基因又形成包涵体的重组病毒TnNPV-shr35-OCC+和TnNPV-shr26-OCC+.对重组病毒的酶切鉴定、DNA斑点杂交和Southernblot分析证实,外源基因及其相应的启动子和增强子序列已正确插入病毒基因组中.插入顺序中,hr5增强子是插入HBsAg基因下游,多角体基因与HBsAg基因方向相反.125Ⅰ-固相放射免疫检测和Westernblot结果表明,HBsAg基因在昆虫离体细胞中得到高效表达并保留了抗原活性.TnNPV-shr26-OCC+和TnNPV-shr35-OCC+表达的HBsA吕蛋白与没有插入增强子序列的重组病毒TnNPV—HBs85-OCC+的比较,分别提高了40%和46%.  相似文献   

8.
腺病毒同源重组子的鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
携带入IFN-γcDNA序列的E1区缺失的腺病毒载体pAdl2/RSV-IFN-bpA与pJM17质粒,通过磷酸钙沉淀法共转染293细胞,经同源重组,共获得6个病毒噬斑。病毒噬斑感染293细胞,至出现完全细胞病变效应(CPE)后,抽提细胞内的病毒DNA,经XhoⅠ酶切后走凝胶电泳,出现重组腺病毒圾的3.5kb大小的DNA条带,^32P标记的探针pAdl2/RSV-IFN-bpA与XhoⅠ酶切过的病  相似文献   

9.
斜纹夜蛾NPV多角体基因的克隆和部分测序   总被引:1,自引:1,他引:1  
本文对SINPV基因组作了酶解分析,测得其基因组大小为145kb,并用双酶法确定了SINPV基因组的HindⅢ和PstⅠ物理图谱。以含AcNPV多角体基因的质粒pAC-Ⅰ的SalI-C片段为探针,对SINPVDNA酶切片段southern转印杂交结果,初步判断多角体基因定位于PstI-B/C/D片段、BglⅡ-C/D片段、BamHI-B/C片段和EcoRI-A/B片段上,且SINPV与AcNPV多角体蛋白基因有64%的同源性,而以大肠仟菌质粒pUC19为载体对SINPV的多角体基因试克隆,得到带有BglⅡ-PstⅠ双酶切片段的2个克隆子。对这两个杂交阳性克隆子之一的核苷酸序列测定,表明插入片段与BmNPV多角体基因上游序列亦有一定同源性。  相似文献   

10.
从河南省西峡晚白垩世一枚恐龙蛋化石内腔絮状内含物及外壳提取DNA样品,并用一段特异引物与6碱基随机引物进行PCR扩增、基因克隆和序列分析。结果表明用这对引物从蛋腔絮状内含物样品中扩增到一段150bp的DNA片段,推测氨基酸序列与EMBL库中已知蛋白质氨基酸序列进行了序列同源性分析,结果表明所克隆到的这段基因与非洲爪蟾表皮钙粘着蛋白(cad-herin)前体及脑细胞粘着蛋白、牛及人胎盘胞钙粘着蛋白在氨基酸水平有显著的序列同源性,分别为40.6%,37.5%,34.4%和36.4%。  相似文献   

11.
用PCR扩增和克隆鸡贫血病毒衣壳蛋白VP2基因   总被引:1,自引:0,他引:1  
接种鸡贫血病毒(CAV)Cux-1毒株于MDCC-RP1细胞中,并用经狄高辛标记的CAV衣壳蛋白VP1基因克隆DNA作为探针在斑点杂交中检测和比较了各代细胞中CAV DNA水平。通过聚合酶链式反应(PCR),从CAV DNA水平较高的MDCC-RP1细胞基因组DNA中扩增出CAV衣壳蛋白VP2基因片段约650bp的编码序列,将该PCR扩增的产物于EcoRI和KpnI位点克隆到pUC19质粒载体中,  相似文献   

12.
香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,SDS-酚法纯化的基因组RNA作为模板,RT-PCR合成并扩增外壳蛋白基因cDNA,cDNA克隆于pGEM-T easy vector,转化为E.coliJM109。阳笥克隆pTCaCP经序列分析,证明带有全长CP基因。  相似文献   

13.
SpltNPVp49基因的克隆和序列分析   总被引:6,自引:0,他引:6  
根据新发现的杆状病毒凋亡抑制基因p49基因的序列设计了一对引物,以SpltNPV基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得了预期大小的约1.3kb的DNA片段,将此片段克隆到pGEM-T载体上并直接测序。序列分析表明,该片段为SpltNPV完整的p49基因开放读码框。与已知的杆状病毒p49基因的序列同源性为87%,与之对应的氨基酸序列的同源性高达93%。它是首次从SpltNPV中克隆到的抑制细胞凋亡的  相似文献   

14.
光合细菌Chromatium vinosum可溶性氢酶小亚基基因的克隆   总被引:6,自引:2,他引:4  
光合细菌C.vinosum可溶性氢酶由52kDa和21.5kDa两个亚基组成。该酶大亚基N-末端氨基酸序列为:SRTITIEPVTRXEGHAR,小亚基N末端氨基酸序列为:STQPKITVATXLDG。根据大、小亚基N-末端氨基酸序列设计两套引物,Primer1:5’gAT(gTgAT(g/C)gTgAT(g/C)gT(g/A)Cg3’和Primer2:5’AgC AC(C/g)CAgCC(C/g  相似文献   

15.
维甲酸激活表达的人肺腺癌细胞分化相关基因的筛选   总被引:1,自引:0,他引:1  
通过对维甲酸诱导的人肺腺癌细胞GLC-82 cDNA消减文库的筛选,获得2个特异存在于维甲酸诱导1天cDNA文库中的cDNA片段RA97及RA107,测序后与最新GenBank提供的序列比较,RA97与人22号染色体臂13区PAC408N23同源性很强,其中一段与PAC408N23完全同源,此片段与可能的肿瘤抑制基因SNC6同源性也相当强,其中一段与SNC6完全同源,提示这一cDNA片段可能与肿瘤  相似文献   

16.
通过PCR方法扩增了人胰岛素(HI)基因1.34kb的DNA片段并克隆于pUC18的SmaⅠ位点内。经DNA序列分析表明,该片段为HI基因的氨基酸编码区及3'端调控区序列。同时,应用PCR方法对牛α-乳白蛋白(BαLA)基因进行了扩增,得到了0.84kbDNA扩增片段。将其克隆于去除了EcoRI位点的pUC18SmaI位点内,经内切酶分析和DNA测序证明该片段是BαLA基因5'调控区序列。EcoR  相似文献   

17.
研究三株人癌细胞和两株对照细胞对细小病毒H-1杀伤作用敏感性的分子机制.表明了在感染复数moi(multipicityofinfection)为5pfu(plaqueformingunit)/细胞的情况下,作为H—1病毒复制受纳细胞的人肝癌细胞株OGY-7703和人胃癌细胞株SGC—7901,能够支持病毒DNA扩增和非结构蛋白NS—1基因的表达,这和作为阳性对照的由SV40转化的新生儿肾细胞株NB—K一样,但对H—1病毒感染有抗性的人肾癌细胞株OUR—10和它的对照人胎肾细胞株HuK—1,并不支持病毒DNA扩增和NS—1蛋白的表达.本文结果指出,细小病毒H—1的杀伤作用与细胞中的病毒DNA扩增及NS—1基因表达的程度相关.  相似文献   

18.
研究三株人癌细胞和两株对照细胞对细小病毒H-1杀伤作用第三性的分子机制,表明了感染复moi(multiplicityofinfection)为5pfu(plaqueformingunit)/细胞的情况下,作为H-1病毒复制受纲细胞的人癌细胞株QGY-7703和人胃癌细胞株SGC-7901,能够支持病毒DNA扩增和非结构蛋白NS-1基因的表达,这和作为阳性对照的由SV40转化的新生儿肾细胞株NB-K  相似文献   

19.
HSV1-tk基因的部分DNA序列分析   总被引:3,自引:0,他引:3  
采用PCR技术从商品质粒pHSV106扩增出HSV1-tk基因(1128bp),PCR产物用BamHI和EcoRI双酶切后定向克隆至真核表达载体pcDNA3,然后以重组质粒pcTK为模板tk基因的5端引物为DNA测序引物进行部分DNA序列分析,部分DNA序列分析证明PCR产物为HSV1-tk基因正确无误,成功筛选到HSV1-tk基因的真核表达载体pcTK,并为利用tk基因在实验动物体内进行自杀性基  相似文献   

20.
根据国外报道的JEV(Japanese encephalitis virus)基因组全序列,针对JEV E基因5′端设计合成一对特异引物,以日本脑炎病毒内蒙古分离株M73-1RNA为模板,经RT-PCR扩增,获得366bp的JEV E基因cDNA片段。将此片段重组于质粒pUC19中,并转化大肠杆菌DH5α,经PCR扩增,酶切及序列分析,结果表明JEV M73-1 5′端126个核苷酸序列与JEV日  相似文献   

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