有机溶剂对南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

研究了几种有机溶剂对南美白对虾（Penaeus vannamei）N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）活力的影响．结果表明：甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、乙二醇和丙三醇对NAGase的作用均表现为低浓度时对酶有激活作用，随着浓度的升高，激活作用减弱并速转为抑制作用；二甲亚砜和二氧六环对酶的抑制作用呈现明显的浓度效应，随浓度增大酶活力迅速下降．进一步研究二甲亚砜的抑制作用动力学，结果表明：二甲亚砜对酶的抑制作用是一种可逆过程，抑制机理表现为混合型抑制类型，抑制常数K1=0．27mol／L，KB=2．05mol／L．     

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

研究几种抗菌药物对凡纳滨对虾壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC 3.2.1.52)活力的影响.结果表明,诺氟沙星和磺胺甲噁唑对该酶活力有不同程度的抑制作用,盐酸环丙沙星对此酶有激活作用,而青霉素钾、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、磺胺嘧啶等对酶活力基本上没有影响;磺胺甲噁唑的抑制作用最为显著,导致酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)为0.094 mg/mL.抑制作用动力学研究结果表明,磺胺甲噁唑对酶的抑制作用为混合型可逆抑制,其抑制常数KI为5.98 mg/mL,对酶-底物络合物的抑制常数KIS为13.08 mg/mL.该研究对凡纳滨对虾的人工养殖具有一定的参考价值.     

产物类似物对南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

以南美白对虾为材料,分离提纯N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶,研究产物NAG及产物类似物glu、gal、fru等对该酶催化水解pNp-β-D-GlcNAc活力的影响.抑制强度次序为NAG＞gla＞glu＞suc＞fru.研究抑制作用动力学,结果表明NAG对酶的抑制作用表现为反竞争型,其抑制常数KIS为11.4 mmol/L/;gal、glu、fru对酶的作用表现为竞争型抑制,抑制常数KI分别为0.709、0.747和2.94 mol/L;suc对酶的抑制作用表现为非竞争型,抑制常数KI=KIS=2.58 mol/L.     

乙醇对南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力与构象的影响

以南美白对虾为材料,分离提纯N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶,研究乙醇对该酶的活力与构象影响.结果表明,浓度低于22%(体积比)的乙醇对该酶活力有明显的激活效应;乙醇浓度为8%时,达到最大激活效应,酶活力为纯酶的180%.动力学研究表明,在30%浓度范围内,乙醇对酶活性的激活及抑制作用均是可逆的.乙醇低浓度下,Km值与Vmax值随乙醇浓度增大而增大;随着乙醇浓度的进一步升高,Km值保持不变,Vmax值则出现下降.紫外光谱与荧光光谱分析表明,低浓度乙醇对N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶的构象产生轻微的影响,而高浓度乙醇则使酶的整体构象趋于松散.由此可以推断,乙醇对该酶的活力影响是微扰酶活性中心产生激活效应与引发整体变构失活效应的共同作用结果.     

丙酮对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力与构象的影响

以丙酮为效应物,研究其对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响,结果表明:该酶的剩余活力随着丙酮浓度增大而呈指数下降,当丙酮浓度达25%,酶的剩余活力仅为20%,说明丙酮对青蟹NA-Gase有明显的失活作用.导致酶活力丧失50%的丙酮浓度为7.5%.在较低丙酮浓度(＜10%)的失活是可逆的反应过程.动力学研究表明,该酶的失活过程属于混合型,并进一步测定游离酶(E)和酶底物络合物(ES)与丙酮的结合常数(K1和K1s),分别为4.06%和10.49%,K1＜K1s,说明底物存在对酶被丙酮的失活作用有一定的保护作用.应用荧光发射光谱研究青蟹NAGase经丙酮微扰后的分子构象变化情况,结果表明:丙酮对酶分子构象有显著的影响,酶的内源荧光强度随丙酮浓度增大而降低,说明酶分子中的生色基团Trp和Tyr残基的微环境发生了变化.     

菜青虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的抑制剂筛选

以菜青虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)为研究对象,比较了不同菜青虫部位来源及不同生长期的菜青虫NAGase活性.结果表明,5龄虫和预蛹表皮来源的NAGase比活最高.选取肉桂酸等天然化合物及其衍生物以及一些具有抗虫或杀虫活性的植物的粗提物,以其对菜青虫NAGase的抑制作用为指标来粗筛NAGase抑制剂,结果表明茴香酸、异丙基苯甲酸、间-羟基苯甲酸、2,4-二甲氧基苯甲酸以及肉桂酸对该酶具有一定的抑制效果,6 mmol/L浓度可以分别使酶活力被抑制35.3%、25.9%、26.7%、29.1%和20.0%;银杏外种皮粗提物有较强的抑制效果,0.4 mg/mL的银杏酸可以让酶活力几乎完全丧失.上述结果提示有望从粗筛得到的几种植物中进一步分离纯化出高效的NAGase抑制剂,为开发新型生物农药提供理论依据.     

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶在儿科疾病中的临床应用

尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）是在临床应用最广泛的诊断肾脏病变的酶之一,NAG主要来自近曲小管的溶酶体,尿中含量相对稳定,其排泄异常提示肾脏损害,因此是肾小管损伤的敏感标志物,在很多儿科疾病中可以判断是否有肾脏损害和（或）严重程度。     

肾损伤标志物N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶检测方法的研究进展

药物引起的肾损伤是一个备受关注的公共健康问题,目前对于早期肾损伤的临床诊断缺少有效的技术手段,导致疾病不能得到及时治疗,最终危及患者的生命安全。N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG）是一种新型的肾脏损伤的生物标志物,在早期肾损伤时尿液中的NAG活度即可发生显著变化,因此,开发NAG的精确、批量、低成本检测技术,对于肾脏疾病的早期诊断和治疗具有重大意义。为此,中外学者在近几十年内做了大量的研究工作。本文综述了NAG检测方法的研究进展,分析了各种方法的优势和不足,最后讨论了NAG检测技术的发展方向。     

养殖常用抗菌药物对凡纳滨对虾外壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

研究几种抗菌药物对凡纳滨对虾壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase。EC3．2．1．52）活力的影响．结果表明,诺氟沙星和磺胺甲嗯唑对该酶活力有不同程度的抑制作用,盐酸环丙沙星对此酶有激活作用,而青霉素钾、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、磺胺嘧啶等对酶活力基本上没有影响;磺胺甲嗯唑的抑制作用最为显著,导致酶活力下降50％的抑制剂浓度（IC50）为0．094mg／mL．抑制作用动力学研究结果表明,磺胺甲嚼唑对酶的抑制作用为混合型可逆抑制,其抑制常数K1为5．98mg／mL,对酶-底物络合物的抑制常数K1S为13．08mg／mL．该研究对凡纳滨对虾的人工养殖具有一定的参考价值．     

N-乙酰-D-氨基葡萄糖的研制

研究了以氨基葡萄糖盐酸盐(GAH)为原料、乙酸酐为酰化剂制备了N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)。着重考察了反应时间、酰化剂量、pH值以及溶剂极性对N-乙酰化反应的影响。同时通过一系列的纯化处理，得到了NAG精制品。研究结果表明：反应时间影响较小；当NH2和Ac20的摩尔比为1：4，在吡啶为溶剂的碱性环境下N-乙酰化反应得率较高，达70％。NAG精制品的结构通过红外图谱、熔点等进行确证。     

氨基酸对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的效应

研究Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Phe、Met、Asn、Cys、Ser、Thr、Asp、Glu、His、Lys、Arg等17种氨基酸对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明:非极性氨基酸中Gly、Ala、Leu、Phe对酶活力几乎没有作用,而Val、Ile对酶略有激活,20 mmol/L的Val可以使酶活力提高7.5%,40 mmol/L的Ile可以使酶活力提高10.5%;Pro、Met对该酶略有抑制作用,当浓度为40 mmol/L时,分别可以使酶活力下降15.2%和9.8%;极性氨基酸Asn、Cys、Ser、Thr对酶的活力没有影响;带负电荷的酸性氨基酸Asp和Glu对酶有抑制作用;带正电荷的碱性氨基酸His对该酶略有抑制,Lys和Arg对该酶抑制作用较强.研究Lys和Arg对酶催化pNP-NAG水解反应的抑制机理,并测定其抑制常数,结果表明:Lys和Arg的抑制作用均表现为可逆效应,抑制类型均为反竞争性抑制,其K.分别为5.29mmol/L和3.76 mmol/L.     

菜青虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性必需基团的研究

从菜青虫表皮分离纯化N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase），获得电泳单一纯的酶制剂，通过化学修饰法研究该酶的活性必需基团．分别以碳化二亚胺（EDC）、N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）、对-氯汞苯甲酸（pCMB）、二硫苏糖醇（DTT）、澳代乙酸（BrAc）和乙酰丙酮在特定条件下对该酶进行特异的化学修饰，结果表明酸性氨基酸的侧链羧基、半胱氨酸巯基、色氨酸的吲哚基、组氨酸的咪唑基、二硫键被修饰后，酶活性均显著下降，因此这些氨基酸残基是酶活性的必需基团，而精氨酸残基及赖氨酸ε-氨基被修饰后对酶活力没有影响，不是酶的必需基团．     

HPLC示差折光分析法测定D-氨基葡萄糖盐酸盐中的N-乙酰-D-氨基葡萄糖

利用高效液相示差折光分析法测定D-氨基葡萄糖盐酸盐中的N-乙酰-D-氨基葡萄糖.方法采用Alltech C18柱(250×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-醋酸盐缓冲液(3∶97),流速1 mL/min,柱温40℃,进样量20 μL.N-乙酰-D-氨基葡萄糖在4.18～1 079.33 μg/mL范~围内星显著的线性关系,相关系数为0.999 3.方法的加标回收率98.78%,检出限4.18 μg/mL.     

蝾螺(Turbo cornutus Solander)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及性质的初步研究

以蝾螺内脏为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、SephadexG 200分子筛柱层析和两次DEAE SephadexA 50离子交换柱层析纯化,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳单一纯的N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶酶制剂.纯酶的比活力为1448U·mg-1.酶的紫外特征吸收峰在275nm处,内源荧光发射峰在340nm处.以对 硝基苯 N 乙酰 β D 氨基葡萄糖为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学,结果表明:酶的最适pH为4.5,最适温度为45℃.该酶在pH3.5～6.0区域较稳定,而在pH>7能很快失活;在40℃以下处理30min,酶活力保持稳定,高于40℃,酶稳定性较差,很快失活.酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为3.13mmol·L-1,最大反应速度Vm为17.68μmol·L-1·min-1.     

锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶在甲醛溶液中的失活动力学研究

研究甲醛对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAGase EC 3．2．1．52）活力的影响．结果表明：随着甲醛浓度的增大．酶活力呈指数下降．导致酶活力下降50％的甲醛浓度（失活半衰期，IC50）为0．60mol／L。酶在低浓度甲醛溶液中的失活过程显示为可逆失活．用底物反应动力学方法考察酶在甲醛溶液中的失活动力学．测定游离酶（E）和酶-底物络合物（ES）在甲醛溶液中失活的微观速度常数。并比较游离酶（E）和酶-底物络合物（ES）的正向反应的微观失活速度常数k＋0〉k’＋0．表明底物对酶被甲醛的失活作用有一定的保护作用．正向的失活速度常数k＋0和k’＋0随着甲醛浓度的增大而增大．而逆向的速度常数k-0随着甲醛浓度的增大而减小．表明随着甲醛浓度的增大。酶变性越来越快。而活力恢复越来越难．     

N-乙酰氨基-D-葡萄糖合成方法的改进

以D-氨基葡萄糖盐酸盐(D-GlcN*HCl)及乙酸酐为原料合成N-乙酰氨基-D-葡萄糖(N-AcGA),当D-GlcN*HCl为21 g(0.1 mol/L)时,溶剂水为100 mL,催化剂NaOH为4.0 g,乙酸酐13.0 mL时,在25～30 ℃下搅拌反应3 h,精品收率为78.0%,纯度为99.4%.     

N-硝基苯甲酰基-1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-氨基葡萄糖的合成与表征

以D-氨基葡萄糖盐酸盐、间硝基苯甲酸和对甲基苯甲酸为原料,先将氨基葡萄糖的羟基加以保护,然后以N,N-二环已基碳二亚胺(DCC)为脱水剂,合成N-硝基苯甲酰基-1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-氨基葡萄糖.产品结构经傅里叶变换红外光谱(FT-IR)及核磁共振氢谱(1 H NMR)表征确认.研究表明:1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-氨基葡萄糖、DCC和间硝基苯甲酸/对甲基苯甲酸的摩尔比为1∶1.5∶1.5,反应温度为40℃,反应时间为4h为最佳反应条件.     

1,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖盐酸盐的制备及其还原性研究

以氨基葡萄糖盐酸盐为起始原料,与对甲氧基苯甲醛反应得到氨基保护的中间体2-对甲氧苯亚甲基氨基-D-葡萄糖（1）.用乙酸酐-吡啶乙酰化、盐酸-乙醚溶液脱去氨基保护基合成目标产物1,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖盐酸盐（3）,三步总收率为46％.产物结构经IR、1 H NMR得以确证.在相同条件下,以铁氰化钾溶液结合分光光度法测定得1,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖盐酸盐还原性比氨基葡萄糖盐酸盐和N-乙酰氨基葡萄糖差.     

不同生长期凡纳滨对虾肝胰腺NAGase的基本性质变化

凡纳滨对虾[Lifopenaeus vannamei(Boune 1931)]N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(β-N-acetyl-D-glucosaminidase,简称NAGase,EC3.2.1.52)与周期性蜕壳和生长密切相关.我们研究了凡纳滨对虾肝胰腺中该酶的活力与部分性质在不同生长期的变化,结果表明:在不同生长期该酶活力有较大的变化,幼体虾的酶活力为每mg蛋白40 U,随着虾的生长,酶活力迅速下降,当养殖到第6周时,酶活力下降到每mg蛋白18 U,达到最低点.随后,酶活力随着虾的长大快速增大,当养殖到成虾时,酶活力达到最高值,为每mg蛋白58 U.不同生长期的酶,其最适pH均在5.5～6.0之间,最适温度由原来的34℃改变为37℃,同时测定不同生长期酶的动力学参数(Km、Vm)、酶促反应活化能(Ea)及对Cu2 、Zn2 和Hg2 的敏感性并进行了相应的比较.     

pH值对纤维素酶系内切β-葡聚糖苷酶活力影响的酶催化动力学模型

pH值是影响酶催化反应速率的重要因素之一，建立动力学模型有助于定量分析酶解反应。经典的“三状态”动力学模型未考虑pH值对底物解离状态的影响及产物抑制的作用，该文对“三状态”动力学模型进行改进。在一系列假设基础上提出绿色木霉产纤维素酶水解羧甲基纤维素钠（CMC-Na）的反应机理，建立了pH值对纤维素酶系内切β-葡聚糖苷酶活力影响的动力学模型，推导出反应速率表达式。Lineweaver-Burk作图法求得内切β-葡聚糖苷酶水解CMC-Na在不同pH的动力学参数：K＇m和V＇max，试验最佳初始pH值与模型计算pH值符合，从而模型得以验证。