应用PCR技术检测结核菌的临床研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对２４４例呼吸疾病患者临床标本进行结核菌ＤＮＡ检测，并同时与涂片抗酸染色结果进行比较。结果显示：１１２例结核标本涂片和ＰＣＲ检测阳性率分别为１６．１％和５２．７％，两者差别有显著性（Ｐ＜０．０１）。９４例涂阴结核标本ＰＣＲ阳性达４５．７％。结果表明应用ＰＣＲ技术检测结核杆菌ＤＮＡ具有快速敏感、特异性较高等优点，尤其对涂阴病人具有较大诊断价值     

应用聚合酶链反应检测血清中结核杆菌DNA的探讨

应用聚合酶链技术对89例肺部病人血清中结核杆菌DNA进行检测。结果表明PCR-TB-DNA检出率为72％。其中78例确诊为肺结核的病人的检出率为83％。由此可见血清PCR-TB-DNA有较高的应用价值。     

α—珠蛋白基因的PCR检测

用多对引物的复合ＰＣＲ技术，分别扩增α－珠蛋白基因族中α１和α２基因片段；参照β－珠蛋白基因ＰＣＲ扩增产物量，判断α１和α２基因是否正常，是否为缺失的纯合子或杂合子，对α－地中海贫血症先征者家系基因型进行ＰＣＲ分型诊断。     

应用PCR技术检测单纯疱疹病毒

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测２０５例样本，其中单纯疱疹病毒阳性６５例，阳性率３１．７％．ＰＣＲ技术具有高度的敏感性和特异性，为疱疹病毒感染的临床早期准确诊断、判定药物疗效和流行病学研究等提供了有效的手段     

PCR技术检测致病真菌感染的研究

目的建立适合临床实践的常见致病真菌的PCR检测方法。方法根据真菌的保守基因设计不同的特异性引物,对152例临床标本进行PCR检测,与传统检验方法的结果进行比较。结果真菌培养阳性46例;真菌PCR检测阳性57例,分别为白色念珠菌感染30份、烟曲霉感染9份、黄曲菌感染8份,其他真菌感染10份。两种方法比较,检出率差异无统计学意义。结论 PCR法可快速、特异、灵敏地检测致病真菌,适合临床实验室的快速诊断。     

PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素D基因

根据金黄色葡萄球菌肠毒素Ｄ基因的序列,设计相应的引物,建立检测金黄色葡萄球菌肠毒素Ｄ基因的ＰＣＲ技术。利用该方法可从含有肠毒素Ｄ基因的金黄色葡萄球菌中扩增出ＰＣＲ产物。扩增产物具有特异性,长为３１６个碱基对。经限制性核酸内切酶ＨｈＩⅠ酶切证实扩增产物为ＳＥＤ基因片段。     

应用PCR技术检测α—地中海贫血SEA型携带者

ＳＥＡ型α－地中海贫血症在东南亚的地区很普遍，在我国广西壮族自治区，发病率也很高。应用跨ＳＥＡ型５端和３端缺失断裂点的三引物进行ＰＣＲ扩增，在有该缺失的染色体上扩增一条１９４ｂｐ的特异条带，在无该缺失的染色体上扩增一条２８７ｂｐ的特异条带，可以清楚地区分ＳＥＡ型缺失杂合子，纯合子和正常个体。检测４０例α－地中海贫血症患者的结果表明：ＳＥＡ型缺失杂合子２８例（７０％），ＳＥＡ缺失的高发区，此法在临床     

非特异性PCR产物的分离和扩增

在PCR（polymerase chain reaction)扩增产物的非特异性电泳带位置上及弥散状背景的一定间隔位置上，分别以切胶分离相应分子量的DNA分子作为模板，用产生这些非特异性DNA分子的一种引物在通用PCR条件下进行PCR扩增，仅在切胶的相应位置出现DNA分子量同样大小的电泳条带。阐述了这种模板DNA分子形成和出现非特异性电泳带与弥散状背景之间的关系。     

859例性病患者PCR检测结果及流行病学分析

目的 :了解本辖区性传播疾病 (STD)中 ,淋球菌 (NG)、沙眼衣原体 (CT)、解脲支原体 (U U)的感染情况及流行趋势。方法 :用聚合酶链反应 (PCR)技术对 85 9例 STD患者的尿道 (宫颈 )拭子标本进行NG、U U及 CT的检测 ,并进行统计学处理。结果 :三种病原体的检出率分别为 U U35 .0 4%、CT2 3.0 5 %、NG15 .0 2 % ,混合感染率以 NG为最高 (2 7.13% ) ,CT次之 (2 1.6 9% ) ,UU最低 (16 .97% )。病原体的检出率明显集中在 19～ 42岁年龄段 ,占全部阳性例数的 90 %。结论 :以 UU、CT为感染源的非淋球性尿道炎 (宫颈炎 )在 STD发病率中呈明显上升趋势 ,19～ 42岁年龄段的患者为主要传染源 ,应作为 STD防治工作中的重点对象     

用PCR产物制备探讨针检测EB病毒

目的：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物制备地主辛标记探针，通过斑中杂交检测鼻咽癌患咽拭子、活检组织及血标本中ＥＢ病毒ＤＮＡ。方法：按献「４」的方法，以Ｂ９５－８ＤＮ为模权进行ＣＰＲ，用ＰＣＲ产物进行地主辛标记反应获得探针。将梯度稀释的变性探针制成ＮＣ膜，与对照标记的ＤＮＡ进行比较，以测试探针的灵敏度。结果：表明标记探针的检测灵敏度可达０．１ｐｇ，有地对９例患的一（均经ＰＣＲ检测，证实ＥＢ病毒Ｄ     

PCR检测白血病患者外周血中EB病毒的DNA

目的：了解白血病患者ＥＢ病毒感染情况。方法：收集２１例急性淋巴细胞白血病、１例慢性淋巴细胞白血病、１５例急性粒细胞白血病、８例慢性粒细胞白血病患者及３２例正常对照组的外周血,分离单个核细胞,提取ＤＮＡ,应用ＰＣＲ方法检测ＥＢ病毒ＤＮＡ。结果：在１例初诊慢性粒细胞白血病病人样本中发现ＥＢ病毒阳性,余均为阴性。结论：白血病患者存在ＥＢ病毒感染情况,但并不普遍。     

通用引物PCR方法检测生殖道HPV

目的：通用引物ＰＣＲ技术检测生殖道人乳头瘤病毒。方法：根据国外献报道的基因序列选出一对寡核苷酸引物，其扩增片断为４５０ｂｐ。结果：在４５０ｂｐ处出现ＤＮＡ扩增带为阳性，用于临床标本的检测，其阳性率为３０％（２９／９６）。结论：通用引物ＰＣＲ技术检测生殖道ＨＰＶ－ＤＮＡ快速，敏感，可靠。     

应用PCR技术快速检测妇科样本中的念珠菌分布

目的:传统的念珠菌检测方法存在耗时长、阳性率低的缺点,本研究将PCR技术应用于妇科念珠菌检测中,寻找出一种能够快速、准确、有效检测妇科念珠菌的方法.方法:收集临床妇科阴道分泌物样本100例,科玛嘉显色培养基进行培养,同时应用PCR方法对100例临床样本进行检测鉴定.结果:在100例样本中,传统培养方法的阳性率为41%,PCR方法检测的阳性率为72%.传统的念珠菌检测方法耗时长,尤其是培养法,至少需时48 h;应用PR方法对念珠菌进行检测,只需要5 h,且阳性检出率和准确性较高.结论:相对于念珠菌传统培养方法,PCR方法是一种更加简便理想的检测方法.     

定量PCR技术在食源性致病微生物检测中的应用

食源性疾病发病率的提高及食品安全问题对人们健康造成的危害,引起世界范围内加强对食品安全、卫生及质量的关注。通过聚合酶链反应(PCR)技术在食源性致病微生物检测中的应用,提高了检测的有效性,PCR技术的发展也经历了多个发展阶段,即常规PCR检测、多重PCR检测、荧光定量PCR检测阶段。本文主要对荧光定量PCR检测技术进行分析,探讨定量PCR技术在食源性致病微生物检测中的应用。     

指示剂法快速检测结核杆菌耐药试验的探讨

结核杆菌快速耐药试验方法学的研究，是结核病细菌学急待解决的问题。国内经典的检测方法都存在着各自的优缺点，而未能改变现行改良罗氏培养耐药试验方法[1]。因此我们探讨用指示剂快速检测结核杆菌耐药试验的方法。1材料与方法1．12％B指示剂1．2含药培养基以舒通培养基为基础，制成液体培养基，经103．43KPa，75％乙醇处理后，15分钟高压灭菌加入药物，然后分装于15mm×10mm小试管中，每管吸1．0ml，其中药物含量：SM：100μg／ml10μg／mlINH：10μg／ml1μg／mlPAS：10μg／ml1μg／ml25μg／ml5μg／mlKM：50μg／ml10μg／mlEM…     

用微量单管RT－PCR快速检测及定型脊髓灰质炎病毒

介绍一种逆转录─聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的简单快速检测和定型脊髓灰质炎病毒（ＰＶ）的方法，无需提取ＰＶＲＮＡ，共用一种缓冲系统，将ＲＴ和ＰＣＲ试剂混合在２０μＬ反应体系中，整个操作可置于一不间断温度循环程度程序中完成。一步法ＲＴ－ＰＣＲ与常规ＲＴ－ＰＣＲ及中和抗体试验对ＰＶ的检测结果完全一致，它的检测敏感度可达５ＴＣＩＤ（５０）／ｍＬ。该法需要的时间，费用和污染的都大大减少，而且特别适于临床常规诊断和鉴别ＰＶ的需要。     

PCR技术在分子生物学中的应用

ＰＣＲ方法，即聚合酶链式反应，又称体外基因倍增，它在分子生物学中有着广泛的应用。文中主要讨论了ＰＣＲ技术在辅助构建跳跃及连锁文库，染色体走步，基因修饰，重组ＰＣＲ，足迹法，进行克隆和亚克隆诸方面的应用。