大豆外源基因转化体系建立及条件优化研究

建立了适用于多个大豆品种的萌动胚真空渗透辅助的外源基因转化方法,对影响农杆菌介导转化的有关参数进行了比较研究。确定的优化条件为:预培养3d,在菌种活化液的OD600值为0.6并加以200μmol.L-1乙酰丁香酮的农杆菌菌种活化液,侵染时间为6h,共培养3d。在优化条件下,将携带GUS基因的35S启动子驱动的表达载体pCAMBIA1304的根癌农杆菌菌株GV3101分别转入鲁豆11和潍6823中,获得510株鲁豆11再生植株和591株潍6823再生植株,其中,抗性再生植株分别为444株和462株。通过PCR和GUS检测,证明分别获得了13株和15株转基因植株,转化率分别为2.2%和2.5%。     

罗勒毛状根培养体系的优化

为寻找最佳罗勒毛状根培养体系优化方案,用四种发根农杆菌A4,R1601,C58C1,15834诱导药用植物罗勒外植体产生毛状根.实验从外植体、菌株、侵染时间、共培养四个因素优化罗勒毛状根培养体系.结果表明,用发根农杆菌R1601诱导罗勒叶片,预培养时间48h、共培养时间48h、侵染时间6min时,出根效果最好;用1/2MS液体培养基继代培养30d最佳.     

雄性二倍体毛白杨再生体系的构建和遗传转化的研究

【目的】建立雄性二倍体毛白杨再生体系,构建稳定的遗传转化方法,为进一步研究毛白杨基因功能提供试验平台。【方法】以雄性二倍体毛白杨的幼嫩茎段和叶片为外植体,1/2 MS为基本培养基,通过调整6-BA、IAA和TDZ激素浓度进行再生体系筛选;采用农杆菌EHA105介导叶盘法,控制预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间和卡那霉素筛选浓度,进行遗传转化;以幼嫩叶片原生质体为受体细胞,PEG介导转化荧光标记基因EGFP,进行瞬时表达。【结果】雄性二倍体毛白杨再生过程包括继代、芽伸长和生根3个阶段,其培养基组分分别为1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.005 mg/L TDZ、1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA和1/2 MS+0.3 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA,该条件下生根率为96.7%,增殖系数为4.47。遗传转化过程包括预培养、农杆菌侵染、共培养、抗性筛选和生根5个阶段,其中预培养为12 h、农杆菌浓度OD₆₀₀为0.4、侵染时间为20 min、共培养时间为24 h、卡那霉素(30 mg/L)筛选45 d和抗性苗生根20 d。试验共获得86株抗性植株,其中14株分子鉴定结果为阳性。在40% PEG4000的介导下,EGFP基因瞬间转化效率为50%。【结论】雄性二倍体毛白杨再生周期短、遗传转化稳定,是杨树基础研究的理想材料。本研究拓宽了杨树遗传转化体系,为杨树分子辅助育种提供了新途径。     

根癌农杆菌介导遗传转化烟草‘NC89’效率的影响因素（英文）

【目的】通过农杆菌介导将PBI121:CslA1基因转入烟草‘NC89’,研究遗传转化的影响因素,旨在提高转化效率,优化相关技术。【方法】通过培养基的筛选在MS培养基+6-BA(2.0 mg/L)+NAA(1.0 mg/L)获得了大量的幼苗,以其作为转基因受体材料,通过控制农杆菌浓度、预培养时间、农杆菌侵染时间、共培养时间等条件,进行含卡那选择性培养基的筛选,获得转基因壮苗。【结果】最佳的转基因植株培养方法为:共培养2 d以后,农杆菌的浓度D600为0.7,农杆菌诱导20 min,培养基的卡那质量浓度为100 mg/m L;暗培养4 d易于提高再生率,更换选择性培养基后暗培养7 d,更容易缩短愈伤诱导的时间。用RT-PCR和Southern杂交进一步验证和分析了转基因的结果。【结论】通过优化转基因的各环节条件,实现烟草的过量表达,提高了转基因的效率。研究结果可为农杆菌介导转化法在烟草及其相关植物的遗传转化应用提供参考。     

农杆菌介导的唐菖蒲遗传转化体系的建立

在唐菖蒲‘Advanced Red’胚性愈伤组织受体系统的基础上,建立其遗传转化体系。采用根癌农杆菌（GV3101）介导法,研究了侵染液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮（AS）浓度、负压和筛选方式等因子对唐菖蒲遗传转化效率的影响。结果表明：在遗传转化过程中,不经预培养,负压处理下,农杆菌菌液OD600为0.6～0.8,侵染时间15～20min,添加100μmol/L AS,共培养3d,可获得较高的遗传转化效率。经过3～4个月选择培养,部分抗性植株经PCR和Southern杂交检测表明,目的基因gus已整合到唐菖蒲基因组中。     

水稻转座子Pong特异性RNAi载体TPAS的构建和农杆菌介导的遗传转化条件的优化

为研究水稻转座子Pong的功能,构建了Pong的特异RNAi表达载体TPAS,并利用农杆菌介导法将这个载体转化到水稻的成熟胚愈伤组织,获得了PCR阳性的再生植株.同时通过对农杆菌侵染途径、侵染浓度和侵染时间等的研究,建立并优化了水稻的遗传转化程序,结果表明:在农杆菌侵染成熟胚愈伤组织的时间为3 min,共培养2～4 d...     

甘薯离体遗传转化体系的优化

对影响根癌农杆菌介导的甘薯离体遗传转化的若干因素进行了研究.结果表明:甘薯茎段外植体在浓度为OD600=0 4的菌液中浸染4min、预培养3d、共培养3d并在共培养基中加入6mg·L-1硝酸银,或25mg·L-1乙酰丁香酮,并将培养基pH值从5 8下调至pH5 0等措施均能显著提高其遗传转化频率,而菌液中加入乙酰丁香酮、在预培养基中加入硝酸银等措施均不利于甘薯遗传转化.     

长春花转化毛状根诱导及培养条件的优化

用A4和R10002种发根农杆菌菌株分别感染长春花的愈伤组织、真叶叶片、叶柄及根，诱导出毛状根。研究了不同外植体、不同菌株以及外植体预培养时间、与发根农杆菌共培养时间、乙酰丁香酮（As)等条件对转化频率的影响，其结果为：A4转化频率高于R1000，真叶叶片转化频率最高，最佳预培养时间为2-3d；最佳共培养时间2－3d；以100mg/mL的As同时加入共培养基中转化频率高达86．25％。不同种类的培养基以及碳源、氮源对毛状根生长也有较大的影响。     

农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化研究

大豆遗传转化是目前研究的热点,为提高大豆遗传转化效率提供理论依据,试通过实验确立农杆菌介导大豆遗传转化条件.实验利用含有pCAMBIA3301质粒的农杆菌LBA4404对辽豆-45子叶节进行了侵染,对消毒方法、草铵膦浓度、侵染浓度、侵染时间、乙酰丁香酮浓度、共培养时间等方面进行了优化.实验结果表明:氯气灭菌5h的二次消毒法,可在不影响种子活力的同时把污染率降低为0,确定草铵膦的选择压力为6mg/L.同时确定辽豆-45子叶节遗传转化的最佳条件为:农杆菌侵染菌液的浓度为OD600=0.6,侵染时间为30 min,暗培养条件下共培养时间为96h,且共培养液体培养基添加200μmol/L的乙酰丁香酮有利于转化.经草铵膦抗性筛选、GUS组织化学染色检测、PCR检测,证实pCAMBIA3301质粒的T-DNA已经整合进了辽豆-45基因组,共获得23株转基因大豆.     

花生子叶节外植体遗传转化体系的建立

目的： 为了建立花生的高效遗传转化体系。方法：利用花生子叶节高效再生体系,以农杆菌介导法,用含有表达质粒pBOG3VP7的根癌农杆菌进行外源基因转化,优化花生的遗传转化体系。结果：通过对影响农杆菌介导的花生遗传转化的诸多因素进行的优化,试验表明：侵染菌液添加100祄ol/L AS,结合负压处理,农杆菌侵染10min,共培养3d,延后选择2w。对抗性植株进行PCR和PCR－Southern检测,11株中有6株PCR反应呈阳性,其中有3株Southern杂交有特异性目标带出现。结论：结果表明,外源基因已经整合到了花生基因组上。     

农杆菌介导的花生遗传转化体系的初步研究

应用花生胚小叶再生体系,以农杆菌介导法对质粒上的基因转化进行初步探讨.通过对影响基因转化的各因素,如抗生素的筛选压、共培养时间、AS的影响、及外植体取材方式等进行研究,结果发现:外植体与农杆菌在加有AS(100μmol/L)的改良MS液体培养基中共培养4 d后,先进行10 d的恢复培养,继而转入加有Hy(25 mg/L)和Cef(200 mg/L)的抗性筛选培养基中进行筛选培养40～50 d,后转入含Hy(20 mg/L)的分化培养基中分化,3个月后在首批材料中得到6个再生植株,经PCR检测,有1株显示了800 bp的GUS基因核酸片段,初步证实了此转化体系合理有效.     

二球悬铃木叶片离体植株再生

研究不同浓度细胞分裂素BA或TDZ与生长素NAA或IBA组合对二球悬铃木种子苗所繁殖植株的叶片分化不定芽的影响.结果表明,诱导二球悬铃木种子苗所繁殖植株的叶片形成不定芽的最佳激素组合为3 mg/L BA和0.5 mg/L IBA;不定芽的诱导效果与植株的繁殖代数有关,在60 d的培养过程中,繁殖6代、10代、15代和20代的不定芽形成率分别为47%、44%、40%和38%.所有长达1 cm的不定芽在含2 mg/LIBA和1 g/L活性炭的培养基上培养20 d均生根良好.经过炼苗后,再生植株的移栽成活率达到92%.     

臭氧流冰对南美白对虾保鲜效果的研究

文章探讨臭氧流冰及低温保藏对南美白对虾的保鲜效果。分别使用3mg／L、5mg／L和10mg／L3种浓度的臭氧流冰对南美白对虾进行处理,浸泡时间为20min,低温0℃下贮藏。对贮藏过程中自对虾的水分、pH值、灰分值、蛋白质、脂肪、细菌总数及TVB-N的变化进行了分析。结果表明。使用浓度为10mg／L的臭氧流冰保鲜效果最好,比对照值延长了6天。     

文心兰的快速繁殖和试管苗移栽

通过对文心兰试管苗的增殖、生根以及试管苗的移栽进行研究。结果表明：影响试管苗增殖和生根的最敏感的因素是培养物的生理状态，其次为激素的比例。其培养方案为：(1)增殖培养：选择原球茎为培养物．培养基为：MS 6-BA3.0mg／L NAA0.2mg/L 0．1％活性炭；(2)生根培养：选择具有3片叶子，高约6-7cm的小苗作为培养物，培养基为：MS 6-BA3.0mg/L NAA0.3mg／L 0.1％活性炭．并将发育形成的试管苗经“炼苗处理”后，移栽成活。     

多菌种混合发酵的西瓜酒生产工艺

以西瓜为主要原料,利用多菌种混合发酵工艺生产西瓜酒,开发了一条适合西瓜酒的发酵工艺路线,对工艺的几个关键环节进行了说明.通过单因素试验和正交优化试验,确定了3株不同菌株接种量的最佳配比,即Zymaflore X5接种量250 mg/L、Lalvin DV10接种量200 mg/L、Lactoenos SB3接种量30 ...     

泗洪大枣组培繁殖技术

泗洪大枣(Zizyphus jujuba Mill．var．sihongensis)组培繁殖技术研究结果表明，促进泗洪大枣试管苗茎、叶营养生长效果最佳的培养基配方为改良WPM＋1．0mg／LBA＋0．005mg／LTDZ＋0．2mg／LIBA＋3．0％S，40d生长高度达3．8cm；促进增殖最佳培养基配方为改良WPM＋1．5mg／LBA＋0．005mg／LTDZ＋0．15mg／LIBA＋3．0%S，35d增殖4．5倍；促使试管苗产生优质根系的最佳培养基配方为1／2WPM＋0．5mg／I．IBA＋0．2mg／LNAA＋2．0％S，试管苗生根率达90％以上，且发根粗而短，生理活性旺盛；生根试管苗在V砻糠灰：V黄心土=3：2混合的基质中移栽，成活率最高达85．0％。     

福建山樱花不定芽诱导和植株再生规模化繁殖试验

取长约4 cm的3年生福建山樱花中选树的春梢为外植体,接种于添加6-BA和IBA的MS培养基中,诱导产生不定芽。结果表明:当培养基为1/4 MS时,能有效地防止外植体的褐化死亡;添加1.0 mg/L 6-BA和0.01 mg/L IBA的培养基上,外植体能快速生长,且无玻璃化苗发生。增殖阶段以添加1.0 mg/L 6-BA 0.3 mg/L GA3的MS培养基最好,1个周期的增殖率可达600%。当外殖体高约4 cm时,即转入1/2MS 1.0 mg/L NAA 0.2 mg/L IBA培养基进行生根诱导培养,25 d后即可陆续生根并长成完整植株,35 d生根率可达92.1%。以1/3份珍珠岩 2/3份泥炭混合基质为移栽基质时,试管苗移栽成活率可达94%。该试验中各项指标已达到快速繁育苗木的要求,其技术措施可直接应用于规模化生产。     

葶苈子植物愈伤组织诱导及植株再生的研究

对葶苈子植物 :葶苈 (Drabanemorosa)、印度菜 (Rorippaindica)及北美独行菜(Lepidiumvirginicum)愈伤组织的诱导、分化、再生苗的生根进行了研究。结果表明 :(1)在基本培养基为MS ,附加 6 -BA 0 .5mg/L +NAA0 .5mg/L的培养基上三种植物均能产生愈伤组织 ,其出愈率达 10 0 % ,而且 2 0 %的外植体具有一次成苗的能力 ;(2 )在愈伤组织的分化中 ,6 -BA1mg/L +NAA 1mg/L的激素组合是最佳的 ,其分化率为 10 0 % ;(3)无根苗生根的培养基为MS + 0 .5mg/LNAA ,生根率为 90 %     

蜻蜓凤梨快速繁殖的研究

通过对蜻蜓凤梨快速繁殖进行研究,结果表明:用蜻蜓凤梨试管苗茎的中部进行诱导侧芽效果比较好,培养基为MS 6-BA3.0mg/L IBA0.3mg/L 蔗糖30g/L 琼脂7g/L;增殖阶段适宜培养基为MS 6-BA3.0mg/L IBA0.3mg/L 蔗糖30g/L 琼脂7g/L或MS 6-BA4.0mg/L IBA1.0mg/L NAA1.0mg/L 蔗糖30g/L 琼脂7g/L;生根阶段适宜培养基为1/2MS NAA0.5mg/L 活性碳0.1%.蜻蜓凤梨组培苗容易移栽成活,移栽成活率可达95%以上.