佛罗里达侧耳,鲍鱼菇和香菇原生质体融合菌丝体的酶谱分析

本试验测定了佛罗里达侧耳与鲍鱼菇以及佛罗里达侧耳与香菇原生质体融合处理后生长的菌丝体及其亲本的酯酶、过氧化物酶、苹果酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、醇脱氢酶、山梨醇脱氢酶和葡萄糖脱氢酶7种同工酶。结果表明佛罗里达侧耳与香菇原生质体融合生长的菌丝体多种酶谱与两亲本均有明显区别。佛罗里达侧耳与鲍鱼菇原生质体融合后长出有黑色分生孢子和无分生孢子的两个菌丝体株系,前者酶谱与双亲本差异大于后者。     

热和碘乙酰胺灭活Saccharomyces carlsbergensis原生质体的融合

本文选择了S. carlsbergensis Ⅰ和Ⅱ,分别用热和碘乙酰胺(CIA)双灭活原生质体,在聚乙二醇(PEGMW6000)诱导下进行融合,得到了双亲株融合子,并对形态观察、发酵性能、凝集性作了测定,以及对细胞可溶性蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳谱带进行了分析,认为获得的融合子具双亲特性。     

酿酒酵母的双亲株原生质体灭活融合研究

把两株酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)S_1、S_2的原生质体分别用紫外线(U.V)和碘乙酰胺灭活或只用紫外线灭活,经PEG诱导融合后,在完全培养基上得到了融合子。融合频率为(0.98-2.13)×10~(-7)。融合子的细胞形态、DNA含量等都和亲株有明显差别,并在生产特性上有某些改进。     

平菇原生质体制备、再生及灭活研究

紫孢侧耳、糙皮侧耳和佛罗里达侧耳的原生质体制备与再生的最佳条件为：用１％溶壁酶＋０．５％蜗牛酶的混合酶液酶解培养３～４天的菌丝体，１．５小时后，原生质体产量均可达１０￣（１０）个／Ｌ；三种侧耳的最佳再生培养基分别为ＳＭ、ＭＰ和ＲＰ，再生率分别为０．６１％、０．６７％和０．７６％。随着紫外线对原生质体处理时间的加长，再生率逐渐下降，当处理４ｍｉｎ时，再生率接近零。     

链霉菌种间融合及融合产物的分析

采用灭活龟裂链霉菌原生质体与金霉素链霉菌原生质体在聚乙二醇诱导下进行原生质体种间融合,利用金霉素链霉菌对链霉素的敏感性,建立选择培养基,提高了融合子的检出率。并采用同工酶谱分析及抗生素效价测定,对融合子进行了初步鉴定     

侧耳属一新菌株及其亲本的生化特性

对佛罗里达侧耳和姬菇单孢菌丝经杂交获得的-新菌株及其亲本,应用聚丙烯酰胺凝胶不连续垂直平板电泳方法,测定了酯酶、过氧化物酶、醇脱氢酶、乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶等5种同工酶酶谱;应用薄层等电聚焦电泳方法测定了可溶性蛋白;应用硅胶G薄层层析法鉴定多糖的组成成分。结果表明:新菌株与亲本之一的姬菇,在3种脱氢酶酶谱上甚为相似;新菌株与亲本的酯酶同工酶区带丰富,新菌株多数区带来自亲本,与姬菇相似程度高,但有新区带出现;新菌株的多糖组成成分与佛罗里达侧耳相似;新菌株与亲本的可溶性蛋白无明显区别。推断该新菌株为杂交异核体。     

平菇新品种选育

利用单孢杂交、辐射诱变、原生质体融合几种生物技术，选育三个优良品系，产量较亲本及推广品种显著增产，经酶谱鉴定为杂交品系。同时进行了平茹与香茹属间原生质体融合。     

香菇菌丝原生质体制备及融合条件的研究

讨论不同菌龄、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂对香菇原生质体产率的影响。结果表明 ,香菇菌丝制备原生质体时最适菌龄为 6天 ,酶解时间为 3h ,酶解温度为 34℃ ,渗透压稳定剂用 0 .6mol/L甘露醇为最佳。在此基础上 ,以 35 %的PEG为融合诱导剂进行香菇B0 1、L2 6种间原生质体融合 ,并用显微镜观察到融合子的形成     

啤酒酵母和异常汉逊酵母属间原生质体融合

本文探索了用不可逆生化抑制剂(碘乙酸)抑制—亲株细胞某些酶活性的同时,利用两亲株细胞生理性差异作为啤洒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和异常汉逊酵母(Hansenula anomala)原生质体融合选择性标记的可行性。结果表明这一选择系统简便、可靠和适用。属间原生质体融合率为1.48-2.25×10~8。经菌落形态比较,碳化合物的发酵和同化,DNA含量测定,酯酶型分析,细胞核染色和自然核分离实验,结果表明从选择性培养基上筛选到的菌株分为三种类型:84.4％异常汉逊酵母型:10.4％啤酒酵母型:5.2％是真正核融合子型。本文还讨论了三种类型菌株出现的机理。     

原生质体融合技术及其在苏云金芽孢杆菌中的应用

原生质体融合技术获得的长足进展使其成为一种有效的重组技术并在苏云金芽孢杆菌上得到了广泛应用.本文从PEG诱导融合、电场诱导融合、激光诱导融合和螯合剂诱导融合等方面阐述了原生质体融合技术的进展,并从种内融合、种间融合和远缘融合三个角度列举了它在苏云金芽孢杆菌广谱多功能生态工程菌构建中的应用.     

黑曲霉和假丝酵母属间原生质体融合的研究

用ＰＥＧ促融剂使经硫酸二乙酯灭活的黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）Ｗ２５原生质体与假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｓｐ．）Ｙ００２原生质体融合，在选择性培养基上获得能利用羧甲基纤维素作唯一碳源生长的杂种酵母ＦＡＣＣ．经遗传特性、碳源同化及ＤＮＡ含量等项目分析，表明杂种菌株ＦＡＣＣ与双亲菌株有区别，并进行酶活与ＳＣＰ产量的比较．     

普通小麦与玉米的体细胞杂交再生完整植株

从小麦济南177制备得到两种原生质体，一种来源于具有一定分化能力的愈伤组织但其分裂能力较低；一种来源于生长迅速的悬浮细胞但不能分化，将二种原生质体混合，共同作为受体与经过紫外线（UV）照射的玉米（Zea mays L)原生质体在PEG诱导下融合，培养后获得再生克隆并进一步分化为植株，而它们单独与玉米原生质体融合均不能再生植株，通过染色体、同工酶及5SrDNA分析及生长习性分析证明再生植株均为体细胞杂种。     

禾本科植物原生质体培养的研究进展

近年来，生物技术中最重要的进展之一就是植物原生质体培养和融合的研究。利用这项新技术，不仅大大促进了细胞生物学、植物生理学及遗传学中许多理论问题的研究，而且为作物的品种改良和育种提供了新颖的工具和方法，取得了可喜的进展。十年来的突破性进展表现在许多重要农作物，特别是禾本科作物中，如水稻、小麦、玉米、小米、高梁等原生质体培养得到再生植株。本文将对以上系列研究的进展、原生质体培养的方法和有关研究的意义进行介绍和论述。     

复合诱变和原生质体融合选育S-腺苷甲硫氨酸酿酒酵母高产菌株

对生产S-腺苷甲硫氨酸（SAM）的酿酒酵母（S.cerevisiae）菌株R1进行复合诱变和原生质体融合。采用酶解法获得出发菌株S.cerevisiae R1的单倍体菌株hR10,对其进行UV和DES复合诱变,筛选出了4个单倍体正突变株DR1-3、NM14、NM39和NM45。制备了单倍体正突变株的原生质体,采用热灭活和UV灭活法灭活双亲原生质体,在聚乙二醇（PEG）的诱导下进行原生质体融合,筛选得到融合子F35,其生产 SAM的产量为22.5 mg/L,与出发菌株R1（11.1 mg/L）相比,提高了103%,并且能够稳定遗传。采用正交试验优化了F35发酵生产SAM的培养基和发酵时间,优化了的培养基配方为麦芽糖100 g/L,蛋白胨10 g/L,NH₄H₂PO₄4g/L,NH₄Cl₅g/L,MgSO₄0.1g/L,KH₂PO₄6 g/L,发酵时间为72h。     

灭活原生质体融合技术选育苏云金杆菌新菌种——原生质体融合条件的研究

利用双灭活原生质体融合技术获得了苏云金杆菌新菌株。着重对原生质体制备、再生、灭活及融合的实验条件进行了报道。     

抗药标记酿酒酵母菌株间原生质体融合的研究

酵母属中的一些种是生产单细胞蛋白的主要菌株,通过遗传工程选育高赖氨酸酵母有重要的理论意义和价值,采用100mg/ml蜗牛酶制备亲株的原生质体,在35%聚乙二醇(MW6000)的作用下,成功地获得了酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的株间融合重组子,融合频率为10~(-8)-10~(-7),经过五代的移接验证,融合子稳定,融合子抗药性产生叠加效应,个体形态发生了变化,DNA含量加倍,赖氨酸含量有所提高.