转基因马铃薯中病原诱导GO基因的表达及其对晚疫病的抗性

利用ＰＣＲ技术从黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）中扩增并克隆了葡萄糖氧化酶（ｇｌｕｃｏｓｅ ｏｘｉｄａｓｅ,简称ＧＯ）基因,并将马铃薯病原诱导型启动子（Ｐｒｐ１－１基因启动子）与其融合构建了植物表达载体ｐＣＡＭＧＯ。经农杆菌介导转化获得了转基因植株,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交显示葡萄糖氧化酶基因整合进马铃薯基因组。该基因的表达及所引起的Ｈ２Ｏ２的生成由淀粉－ＫＩ的显色反应得到证实。用马铃薯晚     

稻瘟病病原物诱导启动子的构建及表达

利用ＰＣＲ技术从小麦和马铃薯中分别扩增并克隆了病原诱导性谷胱甘肽－Ｓ－转移酶基因ＧｓｔＡｌ和Ｇｓｔｌ启动子片段,将它们分别与水稻肌动蛋白基因（Ａｃｔｌ）核心启动子序列、５’端非翻译前导序列以及ＧＵＳ基因融合构建出植物载体ｐＷＭＩＧ－５０和ｐＰＭＩＧ－５０,然后转化水稻,并对嵌合启动子的诱导活性进行了分析。结果表明：（１）在转基因水稻细胞中嵌合启动子可受稻瘟病病原物的诱导;（２）水稻Ａｃｔｌ第一内含     

小麦黄花叶病毒72ku蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备

采用逆转录－ＰＣＲ方法,扩增获得小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）ＲＮＡ２上的７２ｋｕ蛋白基因,将其克隆到ｐＥＴ３０ａ（＋）上,构建了该基因的原核表达载体ｐＥＴＰ７２。ＳＤＳ－ＲＡＧＥ分析结果显示,经ＩＰＴＧ诱导,７２ｋｕ蛋白基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中得到高效表达。以含表达产物的凝胶作为抗原,免疫家兔,首次制备了小麦黄花叶病毒ＲＮＡ２７２ｋｕ蛋白特异性抗血清。     

拟南芥profilin2启动子5′端缺失对维管束特异表达的影响

用 ＰＣＲ法扩增并克隆了 ｐｒｏｆｉｌｉｎ２全长启动子（１６６７ ｂｐ）,经 ５’端不同长度缺失,与 ｇｕｓ（ｕｉｄＡ）基因连接,构建植物表达载体,转化伽蓝菜,证实在转基因植株中全长启动子Ｐｆｎ１．７呈维管束特异表达．５’端缺失分析显示,可将该启动子分为 ３个区段：区段 １,－１６６７—１３８０ ｂｐ,缺失该区段后 ｇｕｓ基因由维管束特异表达变为组成型表达,推测在该区段中存在维管束特异表达元件;区段 ２,－１１５３～－５９７ ｂｐ,强烈抑制 ｇｕｓ基因的表达;区段 ３,－５９７～－１ｂｐ,可认为是ｐｒｏｆｉｌｉｎ２的基本启动子．     

一个猪免疫球蛋白 IgG H 链基因的克隆、序列分析及表达

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从猪脾脏中分离到于段１４２５ｂｐ的ＤＮＡ片段,该片段编码免疫球蛋白基因。经全序列分析证明此片段与前人报道的序列有较高同源性,其Ｃ区属于猪Ｉｇγ链基因亚类３。用ＥｃｏＲＩ和ＮｓｉＩ切点将该片段切焉插入ｐＥＴ－３ｂ（ＮＳＥＢ）（－＿中,表达出约５２ｋｕ的蛋白质,表达量约为２１％。     

转基因小鼠中糜酶在心脏血管紧张素Ⅱ形成中的作用

为研究人心糜酶（ｈＣｈｙｍａｓｅ）在心脏血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ,ＡｎｇⅡ）形成中的作用及在心肌重塑过程中的意义,建立了ＭＬＣ２－人心糜酶转基因小鼠,用ＲＴ－ＰＣＲ方法分析了糜酶基因的组织特异性表达和心脏中Ⅰ,Ⅲ型胶原基因的转录表达,并用放射免疫法检测了心脏糜酶及血管紧张素转换酶（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ,ＡＣＥ）活力以及心脏和血浆的ＡｎｇⅡ含量,用     

水稻减数分裂相关基因OsDMC1的克隆

酵母ＤＭＣ１基因是一个在减数分裂前期 Ｉ表达的减数分裂特异基因,其产物是减数分裂同源染色体配对所必需的．根据在酵母Ｄｍｃ１与拟南芥ＡｔＤｍｃ１中保守的氨基酸ｍｏｔｉｆｓ合成的简并性引物,以ｃＤＮＡ作模板,通过套式ＰＣＲ（ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）和ＲＡＣＥｓ克隆了水稻中酵母ＤＭＣ１的同源基因 ＯｓＤＭＣ１．ＯｓＤＭＣ１全长的 ｃＤＮＡ是 １３４８ ｂｐ,编码 ３４４个氨基酸组成的多肽（ＯｓＤｍｃ１）． ＯｓＤｍｃ１与 Ｄｍｃ１和ＡｔＤｍｃ１的氨基酸序列一致性分别是５１．８％和８１．７％．ＯｓＤＭＣ１在生殖器官中表达量较高,在根中有少量表达,而在叶和幼芽中不表达． Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明水稻基因组中有两个拷贝的 ＯｓＤＭＣ１．     

抑制衰老的嵌合基因在水稻中的转化

利用基因枪法把带有特异衰老基因ＳＡＧ１２启动子的ＩＰＴ基因导入水稻,经ＰＣＲ,点杂交以及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,证明外源基因已整合到水稻基因组中,通过ＧＵＳ活性细胞分裂素含量的分析以及Ｔ１代转基因植株成熟期的形态观察,证明此抑制衰老的自我调节系统在部分转基因水稻中表达,叶片衰老受到明显的抑制。     

钙调神经磷酸酶催化结构域的活性和性质

钙调神经磷酸酶（Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ,ＣＮ）是唯一的Ｃａ＾２＋／钙调素（Ｃａｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）信赖的蛋白磷酸酶,由催化亚基Ａ（ＣＮＡ,６１ｋｕ）和调节亚基Ｂ（ＣＮＢ,１９ｋｕ）１：１组成。用ＰＣＲ方法构建了仅含ＣＮＡ催化结构域的编码区ｃＤＮＡ序列。经在Ｅ．ｃｏｌｉ中诱导表达,纯化,制备了ＣＮＡ催化结构域多肽。以ＰＮＰＰ为底物,研究了其磷酸酶活力。结果表明,在有ＣａＭ和ＣＮＢ时,其活性为ＣＮ     

将商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA导入油菜获得抗病毒转基因植株

以子叶柄为材料,分别采用农杆菌介导法与激光微束穿刺法,将损伤诱导型启动子控制之下的商陆抗病毒蛋白（ＰＡＰ）ｃＤＮＡ导入甘蓝型油型（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ．）“双低”品种Ｈ１６５．经庆大霉素筛选,获得了抗性再生植株。ＰＣＲ扩增检测及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明,ＰＡＰｃＤＮＡ连同损伤诱导型启动子已稳定整合至油菜基因组。     

人和鼠GRY-RBP cDNA的克隆

通过筛选人胎儿脑ｃＤＮＡ文库,克隆了编码一个新的ＲＮＡ结合蛋白的人ｃＤＮＡ,命名为ＧＲＹ－ＲＢＰ,人ＧＲＹ－ＲＢＰ ｃＤＮＡ的长度为２９３２ｂｐ,编码一个具６２３个氨基酸,分子量为６９．６ｋｕ的ＲＮＡ结合蛋白。ＧＲＹ－ＲＢＰ蛋白含有３个ＲＮＡ识别基序（ＲＮＡ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆｓ,ＲＲＭｓ）和一个富含甘氨酸（Ｇ）、精氨酸（Ｒ）、酷氨酸（Ｙ）的羧基端,经数据库比较发现该蛋白与许多ＲＲ     

Pfu酶基因的克隆、表达、纯化及长距离PCR的研究

用ＰＣＲ方法从Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ的总ＮＤＡ扩增出了含有Ｐｆｕ ＤＮＡ ｐｏｌＡ基因的２．３ｋｂ片段,并将该基因克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体。用ＮｃｏＩ和ＸｈｏＩ对重组质粒ｐＴ－ｐｆｕ进行了酶切。并将ｐｆｕ ｐｏｌＡ基因捶 入表达载体ｐＥＴ－３ｄ－Ｘ。     

玉米愈伤组织的遗传转化及抗除草剂植株再生

以玉米胚性愈伤组织为受体,采用基因枪轰击法将来自拟南芥菜（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）的突变抗除草剂基因ａｌｓ导入玉米愈伤组织细胞;转化后的细胞经除草剂ｃｈｌｏｒｓｕｌｆｕｒｏｎ筛选,产生了抗性愈伤组织并再生植株,经ＰＣＲ检测和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法鉴定,部分再生植株转入了ａｌｓ基因,喷施除草剂试验表明,转基因植株具有良好的抗除草剂特性．研究的目的是获得抗除草剂ｃｈｌｏｒｓｕｌｆｕｒ     

棉花曲叶病毒外壳蛋白基因启动子不是组织特异表达的启动子

双生病毒是一种单链ＤＮＡ病毒,来自番茄金色花叶病毒（ＴＧＭＶ）的资料表明,其外壳蛋白基因（ｃｐ）启动子在韧皮部特异表达,对新近发现并鉴定的棉花曲叶病毒（ＣＬＣｕＶ）ｃｐ启动子的研究表明,它不是韧皮部特异表达的启动子,该启动子驱动的ｇｕｓ基因表达活笥不仅存在于韧皮部,而且出现在叶肉组织和根尖分生组织中,瞬时表达研究表明,ＡＣ２激活后的ｃｐ启动子在叶肉及叶脉组织均有表达活性。     

水稻过敏原基因cDNA原核表达产物的功能分析

在大多数的禾谷类植物中,如小麦、高梁、玉米等,广泛存在着抑制α淀粉酶的蛋白,它们属于禾谷类植物α淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂家族.长期以来人们认为在水稻中没有α淀粉酶抑制剂.近年来有人从水稻胚乳中分离到一类称为水稻过敏原(ＲｉｃｅＡｌｌｅｒｇｅｎ)的蛋白,分子量约14～16ｋｕ[1],由一个多基因家族编码[2].根据基因序列比较的结果人们把水稻过敏原归入α淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂家族,但对它们是抑制α淀粉酶还是抑制胰蛋白酶尚不清楚.我们通过ＲＴＰＣＲ从水稻未成熟种子中扩增并克隆了一个水稻过敏原基因ＲＡ17[3],并将其转到原核表达载…     

用脉冲辐解法研究藻胆蛋白与羟自由基反应动力学

用竞争反应动力学方法研究,３种藻胆蛋白对羟基自由基的清除作用,其中Ｃ－藻蓝蛋白（Ｃ－ＰＣ）和变藻蓝蛋白（ＡＰＣ）从螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）中提取; Ｒ－藻红蛋白（Ｒ－ＰＥ）从多管藻（Ｐｏｌｙｓｉｐｈｏｎｉａ ｕｒｃｅｏｌａｔａ）中提取;羟基自由基通过脉冲辐解水产生．实验结果表明, ３种藻胆蛋白对羟自由基有强的清除作用;测量得到清除反应速率常数在（２．８～５．６）×１０~９Ｌ·ｍｏｌ~（－１）·ｓ~（－１）之间。     

衣藻叶绿体表达体系的建立

构建了甲型肝炎病毒ＶＰ３Ｐ１区和丙型肝炎病毒Ｃ区融合抗原基因的衣藻叶绿体转化载体ｐＡＣⅢ,并用基因枪法将其导入衣藻叶绿体内,转化子通过抗性培养和暗培养筛选,经ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｍ ｂｌｏｔｔｉｎｇ,Ｎｏｒｔｈｅｍ ｂｌｏｔｔｉｎｇ和Ｗｅｓｔｅｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定,证实融合抗原基因已整合于衣藻叶绿体基因组中的ｃｈｌＬ结构基因位置,并在衣藻叶绿体本身的双启动子５’ｃｈｌＬ－５‘ａｔｐＡ调控下,得     

表达cryIA/gna双价抗虫基因烟草兼抗棉铃虫和蚜虫

利用人工合成的、密码子优化后的雪花莲凝集素（ＧＮＡ）基因,与人工合成的ＣＦＭ ｃｒｙＩＡ构建了双价抗虫基因植物高效表达载体。通过根癌农杆菌介导转化烟草,获得２８株卡那酶素抗性植株,经ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹检测,证实了双价抗虫基因在烟草基因组中的整合,转基因烟草杀棉铃虫试验表明,４０％转基因烟草植株对棉铃虫具有高抗性;Ｂｔ杀虫蛋白ＥＬＩＳＡ检测获得与虫试较一致结果,抗虫性较强株Ｋ１１号ＣｒｙＩ     

人白血病细胞株中Gsα转录物的新型异常剪接

Ｇｓα是与激活腺苷酸环化酶信号转导途径相关的蛋白质,不同的ＧｓαｍＲＮＡ是由不同形式的剪接或利用不同的启动子产生的。报道人白血病细胞株中Ｇｓα转录物的一种新型民学剪接。以来自Ｊｕｒｋａｔ细胞株的人白血病文库ｃＤＮＡ及人白血病细胞株ＨＬ－６０ｍＲＮＡ反转录后的ｃＤＮＡ第一链模板,ＰＣＲ扩增出Ｇｓα基因完整编码区,ＤＮＡ序列分析表明,ＧｓαＬｅｕ与正常Ｇｓα相比有２个区域发生不改变阅读框架的缺失,一个     

应用FLUPD-DD-PCR检测血清饥饿对胶质瘤细胞mRNA表达的影响

荧光通用引物差异显示ＰＣＲ（ＦＬＵＰＤ－ＤＤ－ＰＣＲ）是以荧光通用引物和相应１０碱基随机引物进行ＤＤ－ＰＣＲ扩增,在荧光自动测序仪上进行电泳。通过对电泳图谱的分析进行特异条带的确定,使准确度和自动化程度大大提高,尤其对于表达量上有差异的ｃＤＮＡ片段,这一方法比传统的ＤＤ－ＰＣＲ更为方便。