碳酸钙材料对HL-7702细胞的体外毒性

以人正常肝细胞HL-7702为研究对象,探讨碳酸钙材料对细胞的体外毒性.将HL-7702细胞暴露于碳酸钙质量浓度为0、5、10、20、40、60、80、100 μg/mL的悬浮液中,通过CCK-8法检测暴露于碳酸钙材料悬浮液24 h后HL-7702细胞的存活率,并且检测HL-7702细胞内活性氧的含量.结果表明,该碳酸钙材料在实验剂量下对HL-7702无细胞毒性,能够引起人肝细胞内产生少量的活性氧(ROS).这些结果说明碳酸钙材料在一定剂量下对HL-7702细胞具有良好的体外细胞亲和性(毒性为0级或1级).     

多溴联苯醚对HL-7702细胞和小鼠皮肤成纤维细胞间隙连接通讯的影响

利用划痕染料示踪标记(SLDT)方法,检测了多溴联苯醚(PBDEs)对人肝正常细胞(HL-7702)与小鼠皮肤成纤维细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响.结果表明,PBDE-47与PBDE-209均显著抑制HL-7702细胞的GJIC(10～50μmol.L-1),随着剂量的升高,抑制作用随之增强.在小鼠皮肤成纤维细胞中,PBDE-47在3.75～50μmol.L-1范围内对GJIC有显著的抑制作用,而PBDE-209在15～50μmol.L-1范围内对GJIC有显著的抑制作用,在两种细胞中,PBDE-47的抑制作用大于PBDE-209.停止染毒后,细胞GJIC有一定程度的恢复.实验表明PBDEs可抑制细胞间隙连接通讯,为进一步研究PBDEs的毒性机制提供了科学依据.     

OA对人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402增殖的影响和对细胞凋亡的诱导作用研究

 以人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402为研究对象,通过MTT法、细胞外部形态观察、Annexin V.FITC&;PI双染法及TUNEL法等方法,研究了腹泻性贝毒的主要组分大田软海绵酸（Okadaic acid, OA）对其增殖的影响及对细胞凋亡的诱导作用。结果表明：OA对人两株细胞的增殖均有显著的抑制作用,24 h IC₅₀分别为65 ng/mL和60 ng/mL,且这种抑制作用呈剂量依赖性。OA导致两株细胞的形态均发生明显变化：细胞变圆,脱壁,细胞膜形成泡状突起,最终形成膜包裹的凋亡小体。Annexin V.FITC和PI双染法及TUNEL法检测均发现：OA能够诱导两株细胞发生不同程度的凋亡,且凋亡细胞的比例与OA的浓度相关。以上结果表明：OA能够通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而对人肝细胞和肝癌细胞造成影响,且这种影响的程度与OA的浓度和作用时间密切相关。     

BMP7基因多态对大白猪生长性状的影响

目的为了筛查猪BMP7基因SNP位点及分析其对猪生长性状的影响。方法通过PCR产物测序确定BMP7基因外显子上的5个潜在多态位点,用sequenom法对实验猪群进行基因分型并开展基因型与猪生长性状的关联分析。结果在BMP7基因5个潜在SNP位点中检测确定了2个SNP位点:A83509G和G84966A,且均属错义突变。A83509G位点AA型校正达100 kg日龄显著低于AG型和GG型(P0.05),GG型校正达100 kg眼肌面积显著高于AG型(P0.05); G84966A位点GG型校正达100 kg日龄和达100 kg眼肌面积都显著高于AA型(P0.05);在A83509G和G84966A位点单倍型中,AGGA、AAAA型个体校正达100 kg日龄显著低于AGGG基因型个体(P 0.05); AGGA基因型个体校正达100 kg眼肌面积显著高于AGAA基因型个体(P0.05)。结论 A83509G、G84966A变异位点对大白猪眼肌面积及生长速度具有显著影响,可作为猪生长性状选择的潜在分子标记。     

过表达maspin对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

通过构建maspin表达质粒,在人乳腺癌MCF-7细胞中过表达maspin,研究maspin对MCF-7细胞增殖率及凋亡率的影响.MTT检测实验表明,过表达maspin能够剂量依赖性抑制MCF-7细胞的增殖率.采用TUNEL法和流式细胞术检测maspin对MCF-7细胞凋亡的影响,结果表明过表达maspin可促进MCF-7细胞凋亡进而抑制其增殖.     

BMP7基因真核表达载体的构建及荷瘤小鼠制备

目的克隆BMP7基因及构建BMP7基因真核表达载体,稳定转染于H22细胞系,制备荷瘤小鼠。方法应用RT-PCR技术从人胚肾细胞系293T细胞总RNA中成功扩增出1 293 bp包含BMP7基因编码区的cDNA序列,在上下游加上BamHI及HindⅢ双酶切位点后形成带酶切位点的BMP7基因,然后连入含BaraH I及HindⅢ双酶切位点的pEGFP-C1表达质粒上,构建BMP7基因的重组真核表达质粒pEGFP-C1-BMP7。脂质体介导方法转染细胞,RT-PCR、western-blot方法检测其mRNA及蛋白表达,皮下注射制备荷瘤小鼠。结果扩增的cDNA经测序比较与基因文库完全一致;BamHI及HindⅢ双酶切后,质粒形成约4.7 kb和约1.3 kb两条带,与理论计算值完全一致。注射转染BMP7基因后H22细胞小鼠瘤体明显增大。结论成功克隆BMP7基因及构建BMP7基因的真核表达载体。BMP7基因高表达可能是细胞癌变的原因之一。     

p53蛋白对HL-60肿瘤细胞凋亡率的影响

实验以人白血病HL-60细胞为实验对象,观察p53蛋白对HL-60细胞凋亡的影响。采用吖啶橙（AO）荧光染色法分析p53蛋白对HL-60细胞生长的影响,所呈现的量效和时效关系,运用形态学、吖啶橙荧光染色法、透射电子显微镜观察法检测细胞凋亡。     

全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞MAGE家族分子表达的影响

研究全反式维甲酸（ATRA）在诱导乳腺癌MCF-7细胞分化和凋亡过程中黑色素瘤相关抗原基因（Melanoma AssociatedAntigen,MAGE）家族分子的表达水平的变化,从而为其功能研究提供线索.六孔培养板培养乳腺癌MCF-7细胞至对数生长期,给以终浓度为10-6 mol/L的ATRA的刺激,于不同时间点（0 h,12 h,18 h,24 h,36 h,48 h）收集细胞,RT-PCR检测MAGE家族中（MAGE-A1、MAGE-C1、MAGE-D1、Necdin）分子的表达水平.结果ATRA诱导不同时间的MCF-7细胞MAGE家族分子表达水平呈现MAGE酸性亚家族（Ⅰ型抗原）表达逐步下调,而MAGE碱性亚家族（Ⅱ型抗原）表达逐步上升的趋势.说明MAGE家族酸性和碱性分子均参与ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡,而且可能发挥作用是相反的.     

nm23-H1基因与人早幼粒白血病细胞HL-60增殖的相关性分析

目的探讨nm23-H1基因的表达与白血病细胞HL-60增殖之间的关系。方法：以25ng／mL阿糖胞苷处理HL-60细胞,MTT法测定细胞生长抑制率,NBT还原比色法判断细胞分化状况,RT-PCR检测nm23-H1基因表达的变化;构建nm23-H1基因的真核表达质粒pEGFP-N1-nm23-H1,转染HL-60细胞,通过细胞生长曲线和血清依赖性实验检测nm23-H1基因的过表达对HL-60细胞生长的影响。结果：小剂量Ara-C对HL-60细胞的生长呈时间依赖性抑制,作用4d后细胞NBT还原能力增强且nm23-H1基因的表达下调;转染nm23-H1基因的HL-60细胞生长加快、血清依赖性下降。结论：Ara-C对HL-60细胞增殖的抑制作用与下调nm23-H1基因的表达有-定关系;nm23-H1基因在HL-60细胞中的过表达有促细胞增殖的作用,即增高了HL-60细胞的恶性程度。     

原位细胞电化学法检测紫杉醇对MCF-7细胞活性的影响

采用原位细胞电化学法研究了紫杉醇药物作用时间和作用剂量对MCF-7细胞电化学信号的影响.结果显示,细胞电化学信号可以很好地反映紫杉醇对MCF-7细胞作用的时间,剂量依赖性.将原位电化学法与MTT法检测紫杉醇对MCF-7细胞活性的影响结果进行比较,得到一致的趋势,表明原位细胞电化学法可以发展为一种有效的体外抗癌药物筛选新方法.     

全反式维甲酸对HL—60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）诱导HL－60细胞分化过程中人类端粒酶逆转录酶（hTERT)蛋白表达和端粒酶活性的改变,方法：应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量的变化;采用多聚酶链反应－酶联免疫反应（PCR－ELISA）方法检测ATRA处理HL－60细胞前后端粒酶活性的改变,用碘化丙锭染色经流式细胞仪检测细胞周期的变化,结果：ATRA作用于HL－60细胞后,细胞内hTERT蛋白含量逐渐降低,细胞的端粒酶活性相应受到抑制。结论：在IL－60细胞分化过程中,可以通过hTERT基因的表达下调而抑制端粒酶的活性。     

异常黑胆质成熟剂中各单味药对HL-60细胞增殖的抑制作用

异常黑胆质成熟剂是维吾尔医复方制剂,由甘草、红枣、破布木、牛舌草、铁线蕨、地锦草、小茴香、薰衣草、蜜蜂花和刺糖10味药组成,用于治疗由异常黑胆质所导致的肿瘤、糖尿病和心血管疾病等。研究了异常黑胆质成熟剂中各单味药(除刺糖外)对HL-60细胞增殖的抑制作用。HL-60细胞暴露于各单味药两种不同提取物(二氯甲烷和甲醇),于37℃、CO2体积分数为5%的恒温孵箱中培养后24、48、72h,用台盼蓝染色法检测细胞存活率。结果表明,各单味药的二氯甲烷提取物除小茴香外均显著降低HL-60癌细胞的存活率(P<0.05)。在甲醇提取物中,只有甘草和地锦草两味药的甲醇提取物可显著降低HL-60癌细胞的存活率(P<0.05)。与各单味药甲醇提取物相比,其二氯甲烷提取物均显著降低HL-60癌细胞的存活率(P<0.05)。结果显示,破布木、地锦草、铁线蕨、甘草、红枣、薰衣草、牛舌草和蜜蜂花8味药的二氯甲烷提取物和甘草、地锦草两味药的甲醇提取物均能抑制HL-60癌细胞的体外增殖。各单味药二氯甲烷提取物对HL-60细胞增殖的抑制作用均明显强于其相应的甲醇提取物。     

Microcalorimetric study of the effect of porphyrin-cholesterol esters on cancer cells HL-60

By using an LKB-2277 Bioactivity Monitor, the effect of porphyrin-cholesterol esters on cancer cells HL-60 were examined at 25°C. There is a difference in the shape of the thermogenesis curve samong different kinds of porphyrin-cholesterol esters, and the death rate of HL-60 cells is also different. The results show that porphyrin-chsterol esters can powerfully inhibit their metabolism, the inhibitory sequence is II>I>III, but the inhibitory way of each ester is different. Supported by the National Natural Science Foundation of China Liu Yi: born in Nov. 1970, Ph. D. graduate student     

bcl-2基因反义核酸对HL-60和K562白血病细胞生存的影响

目的：探索ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞生存的影响。方法：主要应用细胞培养和细胞克隆的方法,检测了ｂｃｌ－２基因反义核酸对ＨＬ－６０和Ｋ５６２白血病细胞系生存的影响。结果：ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度在２～８μｍｏｌ／Ｌ和６～１２μｍｏｌ／Ｌ分别对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的生存有明显的抑制效应,呈剂量－效应关系,二者起效应时间均为第３ｄ;ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度为４μｍｏｌ／Ｌ时,对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞集落形成都有明显抑制效应。结论：ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞生存有明显的影响。     

丙戊酸诱导多药耐药白血病细胞HL-60／ADR凋亡的研究

目的研究丙戊酸对多药耐药白血病细胞HL-60／ADR的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色试验观察丙戊酸对多药耐药细胞HL-60／ADR的抑制作用。采用光镜技术观察细胞形态结构的改变,利用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果（1）丙戊酸能明显抑制HL-60／ADR细胞的生长,药物浓度相当于生药32．65mg／mL时,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度0c．50）相当于生药66．44mg／mL。（2）形态学改变呈典型的凋亡特征。（3）丙戊酸能诱导多药耐药细胞HL-60／ADR凋亡,凋亡率也呈时间和剂量的依赖性。结论丙戊酸对多药耐药细胞HL-60／ADR的生长具有极强的抑制作用,诱导其凋亡是其机制之一。