犬卵母细胞体外成熟培养前后的超微结构变化

从屠宰场采集犬卵巢，收集间情期（不可见卵泡）和发情期卵巢卵母细胞。成熟培养前，其超微结构有以下特征：间情期犬卵母细胞与卵丘细胞间以及卵丘细胞之间通过胞质突起相连，胞质中的主要细胞器是线粒体和脂滴，质膜下有发达的粗面内质网；囊状卵泡的卵母细胞，结构近似于间情期犬卵母细胞，但细胞间连接更为普遍，胞质中细胞器更加丰富，并出现零星的皮质颗粒。经ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ体外培养３６ｈ后，微绒毛、线粒体、滑面内质网、皮质颗粒等细胞器增多，胞质内细胞器向皮质区迁移，核仁发生致密化。体外培养７２ｈ后，卵母细胞进一步成熟，表面微绒毛由倒伏状变得细长且坚起，皮质颗料沿质膜下呈线行排列，线粒体分散于皮质中央     

猪卵母细胞体外成熟的研究

从屠宰场收集卵巢，用注射器从卵泡中吸出卵丘－卵母细胞复合体，对猪卵母细胞体外成熟的条件进行研究，根据卵母细胞体外成熟时的核成熟率、胞质成熟及体外受精时精子的穿卵速度，合适的体外成熟培养时间为４２～４５ｈ．卵母细胞周围卵丘细胞的多少及其排列紧密状态与卵母细胞的体外成熟率密切相关。卵泡大小与卵母细胞的体外成熟率有关，大卵泡卵优于小卵泡卵。ＰＭＳＧ促进猪卵母细胞体外成熟。     

牛胚胎体外生产技术的应用研究

利用屠宰牛卵巢抽出的卵母细胞，以卵裂率和囊胚发育为标准，对牛胚胎体外生产过程进行了简化试验，结果显示：不加卵丘细胞的高密度卵母细胞体外成熟（１００－２００枚／平皿）可代替加卵丘细胞标准密度培养，其卵裂率和囊胚发育率没有显著变化，体外授精时间可从成熟培养后２２小时延长至２７小时，卵裂率和囊胚发育率均没有显著变化。卵母细胞体外成熟后可以不经洗涤直接移入受精滴，原成熟培养皿内残留孵丘细胞再培养４８小时形     

第一次减数分裂期小鼠卵母细胞的化学去核

过免疫荧光染色法确定了小鼠第一次减数分裂的进程,在此基础上分别用脱羧秋水仙碱和放线菌酮处理成熟培养的小鼠卵母细胞,抑制其纺锤体极间微管的延长和降低成熟促进因子的浓度,使其核物质随极体全部排出.结果表明:(1) 卵母细胞从有腔卵泡中分离时处于生发泡期,可见核仁;成熟2h内则全部发生生发泡破裂;培养5h,90%到达第一次减数分裂的前中期;培养8h,则33.3%处于中期;71.4%的细胞在成熟12h后发育为后期;第二次减数分裂的中期则于成熟培养15h发生.(2) 于成熟的不同时间取卵母细胞-卵丘细胞复合体进行去核处理后发现,体外成熟培养5h(即卵母细胞处于第一次减数分裂前中期时进行处理),其去核率最高,达85.6%;成熟5h之前各组随成熟培养时间的延长而去核率升高,之后各组则降低.(3) 比较卵母细胞-卵丘细胞复合体与自然裸卵去核率,后者效率为56%,显著低于前者(p＜0.05),因此该方法在卵母细胞-卵丘细胞复合体的完全去核率与传统的物理去核方法相当.     

褪黑素对小鼠卵母细胞体外自发成熟的影响

本文通过卵母细胞自发成熟体外培养模型研究了褪黑素(MT)对小鼠如母细胞成熟的影响。结果表明:0.1mg/ml、0.02mg/ml、0.004mg/mg及0.0008mg/ml浓度的MT均能显著抑制小鼠卵丘卵母细胞复合体(CEO_s)自发成熟过程(P<0.01)。但对裸卵(DO_s)自发成熟,没有影响。结论:MT是调节哺乳动物卵母细胞成熟的重要激素之一,其作用机制可能是通过卵丘细胞实现的。     

体外培养绵羊卵母细胞超微结构的变化

实验利用透射电镜研究了根据卵泡大小和卵丘细胞层多少分类后类绵羊卵母细胞在体外成熟增培养前后超微结构的变化,结果表明,小卵泡卵经过体外培养其线粒体、皮层颗粒等细胞器均未达到熟卵母细胞中这两种超微结构的分布状态;大、中两类卵泡卵经过体外培养细胞成熟较好,     

绵羊卵母细胞不同采集方法对体外成熟培养的影响

为提高绵羊卵巢卵母细胞的采集效率,提供用于卵母细胞体外成熟培养和体外受精的更多优质的成熟卵母细胞,试验利用抽吸法和剖切法2种采集方法采集绵羊卵巢卵母细胞进行体外成熟培养并对其效果进行了对比研究.结果表明剖切法获得的卵子数量显著高于抽吸法(P<0.05),而所用时间则无显著差异(P>0.05);A、B级卵母细胞的比例在剖切法中显著高于抽吸法(P<0.05),抽吸法所采集的C级细胞显著高于剖切法(P<0.05);剖切法中卵丘扩散率和第一极体排出率要显著高于抽吸法(P<0.05).     

三疣梭子蟹雌性生殖系统的组织学研究

从组织学和组织化学两个方面研究了三疣梭子蟹的雌性生殖系统。卵巢壁薄，由外膜和内生殖上皮构成。外膜主要由结缔组织和薄层肌肉构成，它有许多延伸物伸入卵巢中把卵巢分成一个个小区。内生殖上皮不断增产生生殖带，其中含有卵原细胞等各阶段雌性生殖细胞和滤泡细胞。卵原细胞较小，核圆形，核仁不明显。初级卵母细胞核开始增大，由于核质增多而逐渐呈空泡状，核仁圆形。卵母细胞胞质内的卵黄逐渐积累增多而发育为成熟卵母细胞。卵     

DHEA对小鼠超排卵和卵母细胞质量的影响

目的 研究脱氢表雄酮(DHEA)对C57BL/6J雌鼠超排卵效果和卵母细胞质量的影响及其机制。方法 3周龄C57BL/6J雌鼠30只随机分为3组,分别为对照组、低剂量处理组(2 mg/kg·d-1)和高剂量处理组(5 mg/kg·d-1)。用DHEA灌胃1周,再经超排卵后分别进行体外受精和收集卵丘细胞。提取卵丘细胞RNA进行qRT-PCR检测与胚胎质量相关基因Grem1、Has2、Ptgs1、Ptgs2和Vcan的mRNA水平以及凋亡相关基因Caspase3和Bcl2l10的mRNA水平。结果 经过DHEA处理的雌鼠超排卵后,体外受精(IVF)显示实验组异型卵比例下降。实验组卵丘细胞中与胚胎质量相关基因Has2,Ptsg1和Vcan转录水平与对照组相比上调,而Germ1和Ptgs2的mRNA水平下调。Caspase3的mRNA水平下调,Bcl2l10的mRNA水平上调。结论 经过DHEA处理后可以通过抑制卵丘细胞凋亡,提高卵母细胞的质量。     

完全体外化牛细胞核移植的研究

本研究探讨了用体外成熟卵母细胞和体外受精胚胎进行核移植的可能性。本研究结果在我国首次获得牛核移植的成功。从屠宰场回收的卵巢中抽取卵球－卵母细胞复合体，采用以前报道的方法（石德顺等，广西农业大学学报’１９９４：１３：１－５）进行体外成熟（ＩＶＭ）和体外受精（ＩＶＦ），获得ＩＶＭ卵母细胞和ＩＶＦ胚胎，体外成熟２３－２４ｈ后，在含０．１％透明质酸酶的无钙镁ＰＢＳ（ＰＢＳ）内，用细管反复吹打去掉卵丘细胞。选择具有明显第一极体的卵母细胞通过显微操作移去第一极体及其附近约一半的细胞质进行去核，去核的卵细胞在成熟液内继续培养到ＩＶＭ３０ｈ．体外发育到８－３２细胞期的ＩＶＦ胚胎用作核供体．供体胚胎用含０．２５％Ｐｒｏｎａｓｅ（溶于ＰＢＳ￣－）溶解透明带，并用细管吹打将其分散成单个卵裂球，在ＩＶＭ３０ｈ将单个卵裂球显微注入去核卵母细胞的卵周隙内，并在ＩＶＭ３１ｈ用８０Ｖ／ｍｍ４０μｓ两次电脉冲（间隔１秒）来诱导卵裂球与去核卵母细胞的融合。融合卵在颗粒细胞单层培养滴内共培养，体外培养２４ｈ后观察卵裂结果，经体外培养５－８天后发育到桑椹和囊胚的核移植胚胎移植到同期发情的受体．２个月后直检妊娠情况．本实验中共操作１９４枚卵母细胞，     

白蜡虫雌性生殖系统的形态和结构的研究

白蜡虫雌性生殖系统由卵巢,一、二级分枝输卵管,侧输卵管、中输卵管、副性腺和受精囊组成.卵巢管属端滋式,由二级输卵管分化形成.营养腔内有3个滋养细胞,卵室内一个卵母细胞,每条卵巢管只形成一个卵.受精囊一个,圆球形.副性腺两对.     

三疣梭子蟹第一次卵巢发育过程中卵母细胞和卵泡细胞超微结构的观察

通过透射电镜技术研究了东海三疣梭子蟹初产卵巢发育过程中卵巢的超微结构的变化.1)三疣梭子蟹初产卵巢发育过程中卵黄发生期可分为初期和后期;2)卵黄发生初期在7~9月间,此阶段卵黄生成以内源性合成为主,卵母细胞核物质外输明显,胞浆内大量的粗面内质网正在进行卵黄物质的内源性合成;3)卵黄发生后期在10月至第二年4月间,卵泡细胞与卵母细胞的结合阶段,卵母细胞借助卵泡细胞进行外源性卵黄物质合成,卵母细胞与卵泡细胞间的界线逐渐消失,部分卵泡细胞由于胞质大量输出仅见胞核,此时内源性卵黄合成仍然存在;4)排卵后,由于大量成熟卵细胞的排出,卵巢组织存在大量的基膜,残留成熟卵母细胞中的卵黄物质已经解体,卵黄颗粒自中央向边缘逐渐松散.     

卵母细胞成熟过程中一些重要分子的作用

在卵母细胞成熟过程中,质膜蛋白表现出多态现象和高度保守性,G-actin转变成F-actin,CG转移至皮质区,线粒体迁移至卵的内质区域.Cyclin B1的翻译控制MⅠ期定时过渡到后Ⅰ期.层粘连蛋白A和B1链mRNA出现去腺苷化.PDE3在减数分裂恢复的信号通路中起关键作用.Mos是卵母细胞成熟的一种起始物,并与MⅡ期停顿有关.NO是卵母细胞减数分裂的一个关键调节分子.在卵母细胞成熟过程中,胞内钙浓度增长.ATP在卵丘细胞中诱导的钙信号通过缝隙连接引起卵母细胞中出现钙波动.     

绵羊卵母细胞不同cAMP水平模型的构建

环腺苷酸(cAMP)是维持哺乳动物卵母细胞减数分裂停滞的关键分子.本试验利用ELISA和地衣红染色技术,检测了西洛酰胺(Cilostamide)与乌药醚内酯(Linderane)对绵羊卵母细胞和卵丘细胞内cAMP水平以及生发泡破裂(GVBD)的影响.结果显示:体外培养3h后,10μmol/L Cilostamide和5μmol/L Linderane分别能显著提升和抑制卵母细胞而非卵丘细胞内的cAMP水平;体外培养6h后,Cilostamide组卵母细胞GVBD率(14.91%)显著低于对照组(34.45%)与联合添加组(33.47%)(P0.05),而Linderane组与其相反,表明不同cAMP水平卵母细胞模型构建成功.     

鲶卵巢发育组织学的初步研究

以鲶卵巢为材料，研究了卵巢和卵母细胞发育的形态结构特点。鲶卵巢的发育划分为６期，其卵母细胞相应地划分为６个时相，第一时相的卵母细胞呈原始分化状态，细胞外具一层细胞质膜，第二时相卵母细胞外不仅具质膜，而且还有滤泡膜和结缔组织膜。第三和第四时相的卵母细胞分化明显，由散在的卵黄沉积逐渐形成大的卵黄颗粒。第四时相卵母细胞具有漏斗状的精孔及椭圆形的精孔细胞。第五时相和第六时相分别为卵子形成和退化吸收时相。     

中华稻蝗卵子发生的观察

对直翅目蝗总科中华稻蝗[Oxya chinesis(Thunberg)]卵子发生过程进行细胞学观察及阶段划分，成虫期卵子发生可分为卵母细胞分化、卵母细胞营养及卵母细胞卵黄形成3个时期，并且可划分为8个阶段：第l阶段，卵母细胞位于卵原区，进行第一次减数分裂前期；第2阶段，卵母细胞增大，滤泡上皮细胞开始出现；第3阶段，滤泡上皮细胞呈扁平状排列为一层包围在卵母细胞外，卵室内有空隙；第4阶段，滤泡上皮细胞呈立方形，卵室内无空隙，胚泡向卵质周缘移动；第5阶段，卵母细胞体积增大，滤泡上皮细胞长柱状，细胞间开始出现空位；第6阶段，卵母细胞胞质周缘有泡状小体出现并有卵黄颗粒积累；第7阶段，卵母细胞胞质内充满了染色较深的卵黄球，卵黄物质逐渐被卵黄膜包被，胚泡膜消失；第8阶段，卵黄积累完成，滤泡上皮细胞分泌卵壳蛋白凝聚固化而成为卵壳。     

蟋蟀（Scapsipedus micado saussure）雌性生殖系统结构和卵子发生

蟋蟀的雌性生殖系统主要由一对卵巢,一对输卵管,一个生殖腔和一个受精囊组成。卵巢黄色,由约50根卵巢管组成。卵巢管属无滋式,主要由原卵区和卵黄区组成。卵子发生的动态是：一龄期,卵巢管仅具一些卵原细胞;二－四龄期,卵母细胞的体积迅速增大,开始逐步沉积卵黄;五龄期,卵母细胞中卵黄沉积结束,胚泡膜破裂,其中的细胞核达成熟分裂期,成熟的卵子冲破卵管塞进入输卵管,残留的卵泡细胞则退化解体,不形成黄体。     

中华蚱蜢卵子发生的观察

对中华蚱(Acrida chinensis)卵子发生过程进行了形态观察及描述．根据卵母细胞体积及核的变化、卵黄形成、滤泡细胞的形态变化等特征指标显示，可将卵子发生划分为八个阶段．第一阶段：卵母细胞位于原卵区，处于第一次减数分裂的前期．第二阶段：卵母细胞进入生长阶段，滤泡细胞零星地在其周围．第三阶段：卵母细胞体积变大，滤泡细胞呈单层均匀包围卵母细胞．第四阶段：进入卵黄形成准备期．第五阶段：卵黄形成开始．第六阶段：卵母细胞内充满卵黄，卵母细胞核膜消失．第七阶段：卵壳出现，滤泡细胞呈扁平状．第八阶段：卵子发育成熟．     

卵细胞体外成熟(IVM)在小鼠生物净化中的应用

目的 在小鼠生物净化中,从超排后未排卵的卵巢,取卵泡内未成熟卵采用卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)使之在体外成熟并具备受精能力,以提高卵子利用率和作为常规促超排失败的一种补救措施。方法 在小鼠生物净化中,取注射PMSG和HCG后未排卵卵巢,在实体显微镜下划破卵泡挑选卵丘卵母细胞复合物(COCs),置于成熟液滴中在体外发育成熟。同时以注射PMSG和HCG后正常超排卵、只注射PMSG后取未成熟卵体外成熟和注射PMSG和HCG后取疑似成熟卵和裸卵体外成熟作为对照。经体外受精、体外胚胎发育后,将2-细胞胚移植到受体输卵管,使其在受体内发育成为成熟的个体。结果 注射PMSG和HCG后未排卵组(A组),卵细胞体外成熟率为87.0%±3.2%,二胞率为55.1%±12.3%,囊胚率为23.1%,移植41枚二细胞胚至2只受体鼠,出生5只幼崽,产仔率12.2%。只注射PMSG,48 h后取未成熟卵组(B组),体外成熟率为83.9%±3.9%,二胞率为51.8%±9.3%,囊胚率为38.5%±13.9%。注射PMSG和HCG正常超排组(C组),其二胞率为78.9%±0.6%,囊胚率为78.0%±3.8%。注射PMSG和HCG未排卵卵巢,取裸卵和疑似成熟卵(D组),体外成熟培养0 h,6 h和16～18 h,其成熟率、二胞率和囊胚率与其它三组相比均较低且有极显著性差异。A组和B组与正常对照C组相比,二胞率均有显著性差异,囊胚率均有极显著性差异。结论 卵母细胞体外成熟(IVM)可以作为小鼠生物净化中促超排失败的一种补救措施,并且可以提高珍稀品系小鼠的卵子利用率。     

冷藏于4℃的小鼠卵母细胞的受精能力研究

本研究探讨了冷藏于4℃的小鼠卵母细胞的受精能力，NIH雌鼠用10单位的PMSG和10单位的HCG进行超排。卵母细胞和卵丘细胞复合物（OCC）从小鼠输卵管收集，然后，OCC团块转移到Whittingham’s液进行体外受精，或移入Whitten’s液进行冷藏。精子从成熟的雄性小鼠的附睾尾挤出并孵育在37℃中获能。用于体外受精的卵子分为3组。新鲜的卵子是注射HCG后13h收集而得。19h的卵子是注射HCG后19h收集的。冷藏的卵子是在注射HCG后13h收集，并藏存于4℃水浴中6h。授精后观察卵子的结构形态、极体和卵裂情况。授精后次日卵发生卵裂作为受精发生…