真核生物DNA聚合酶δ的研究现状

DNA聚合酶δ(DNA polymerase δ)是真核生物DNA复制的主要复制酶,同时还参与DNA修复,对保持真核生物基因组的结构完整性和遗传稳定性具有重要作用.对DNA聚合酶δ蛋白功能活性及其基因表达机制的研究因受技术上的限制而未能深入研究.由于其重要的生物学功能,目前引起人们的更多关注和重视.文中就该酶的生物学功能、亚基组成、核心酶的分子表达调控以及与其他蛋白相互作用等方面对国内外DNA聚合酶δ的研究进行简要综述.     

Pyrococcus sp.DNA聚合酶内蛋白子突变体的剪切性质

将含麦芽糖结合蛋白－嗜热菌ＤＮＡ聚合酶内蛋白子基因的ｐＭＩ８４、ｐＭＩ９４、ｐＭＩ９５三个重组突变体质粒转入Ｅ．ｃｏｌｉ２４２６经发酵及ＩＰＴＧ低温诱导表达,直链淀粉糖亲和纯化获得ＭＩ８４（ｓｅｒ１／Ｓｅｒ５３８Ｓｔｏｐ）、ＭＩ９４（Ｓｅｒ１→ＣｙｓＨ１／Ｓｅｒ５３８Ｓｔｏｐ）、ＭＩ９５（Ｓｅｒ１→Ａｌａ１／Ｓｅｒ５３８Ｓｔｏｐ）三种蛋白质前体。研究了ＰＨ温度、巯基试剂对内蛋白子Ｎ末端的剪切影响。     

应用于PCR技术的DNA聚合酶

DNA聚合酶作为聚合酶链式反应(PCR)的重要因素之一,在PCR过程中起着至关重要的作用,在某种意义上甚至可以说,PCR技术就是耐热DNA聚合酶的技术。故综合研究聚合酶并改善其酶学性能,已成为分子生物学工作者关注的热点之一。本文就PCR技术产生至今DNA聚合酶的研究历史及现状进行简要综述。     

应用于PCR技术的DNA聚合酶

DNA聚合酶作为聚合酶链式反应（PCR）的重要因素之一,在PCR过程中起着至关重要的作用,在某种意义上甚至可以说,PCR技术就是耐热DNA聚合酶的技术。故综合研究聚合酶并改善其酶学性能,已成为分子生物学工作者关注的热点之一。本文就PCR技术产生至今DNA聚合酶的研究历史及现状进行简要综述。     

耐热DNA聚合酶介导的DNA酶促自发合成

构建了无模板引物的“类ＰＣＲ体系”。该体系在适当温度保温一段时间之后，能检测到产物出现，利用热变性分析等手段，初步研究了产物的性质，发现这些产物是随机合成的具有一些特殊构型的ＤＮＡ。本文报道三种构型，两类碱基组成比例，并通过改变反应条件观察对酶促自发合成的影响，探讨耐热ＤＮＡ聚合酶的非特异聚合活性以及介导的酶促自发合成的机理和意义。     

L_(7712)细胞DNA聚合酶的初步研究

用“615”鼠培养L_(7712)细胞作为提取DNA聚合酶的实验材料,是研究真核生物DNA聚合酶,解决真核细胞供源的一种尝试.目的是建立一种将DNA聚合酶作为筛选肿瘤细胞S期特异性抑制剂的分子模型. 作者比较了不同硫酸铵饱和度分极分离DNA聚合酶的得率,证明用50%以上硫酸铵饱和度分离DNA聚合酶α较高,而用65%以上硫酸铵饱和度提取DNA聚合酶β较高.并以低浓度对氯汞苯甲酸(0.025mM)对DNA聚合酶α有明显的抑制作用,而对DNA聚合酶β没有抑制作用.用4mMNEM对DNA聚合酶β无抑制作用而对DNA聚合酶α有明显的抑制作用,以此作为对DNA聚合酶α或β的一种鉴定.此外,对酶活力测定方法也作了一些比较试验,证明Whatman GF/C滤膜对酸沉淀物的吸附效果比国产49型玻璃纤维膜为好.     

人乳铁蛋白阳离子多肽重组Taq DNA聚合酶的研究

本文报道了人乳铁蛋白阳离子多肽(HL-N)替换Taq DNA聚合酶N-末端结构域,构建新型重组Taq酶的研究结果.利用合成寡核苷酸,成功获得具DNA合成功能的HL-N重组Taq酶.对该重组酶的DNA合成加工、血清耐受性等测试显示,HL-N重组Taq DNA聚合酶的DNA扩增速度、扩增物产量、以及对反应体系中血清浓度的耐受性都得到显著提高.     

金属离子对三氯甲烷与DNA结合作用影响的研究

采用荧光光谱法,研究了金属离子与DNA,CHCl3与DNA间的结合作用,并在此基础上,进一步探讨了金属离子对三氯甲烷与DNA结合作用的影响.结果表明,三氯甲烷与DNA作用时,其紫外光谱的最大吸收峰均产生位移,且具有明显的减色效应,同时也能猝灭溴乙锭(EB)-DNA体系的荧光,表明三氯甲烷以插入方式与DNA产生结合.金属离子对CHCla与DNA结合的影响主要取决于金属离子与DNA结合的类型及强弱.与DNA碱基结合能力越强的金属离子,在竞争反应中能够降低CHCl3与DNA的结合;与磷酸基团结合能力强的金属离子,能够促使CHCl3与DNA的结合.     

新型DNA聚合酶Tgo的扩增忠实性测定

用分子克隆技术从Thermococcus gorgonarius克隆并表达重组Tgo DNA聚合酶， 得到纯化的热稳定Tgo DNA聚合酶. 利用重组酶成功扩增了质粒pUC19、 野大麦Na⁺/H⁺逆向运转蛋白基因、 小鼠Cx37基因和人CYT2C9基因. 该酶的扩增性能与Taq酶相当， 而扩增忠实性分别比Taq酶、 Pfu酶高30倍和1.6倍.     

蛋白质与DNA序列上特异和非特异位点结合的研究现况

介绍了蛋白质和DNA序列上特异和非特异位点结合的研究状况,并详细介绍了Michael Slutsky和Maria Barbi等人提出的有关蛋白质和DNA序列结合的理论模型,同时对这几种理论模型提出新的展望.     

企业声誉对创新绩效的影响研究

在文献回顾的基础上提出了企业声誉与人才资源、顾客资源获取对企业创新绩效影响的理论假设模型,并通过调查四川省42家企业所收集的数据对该模型进行了验证。结果表明企业声誉有利于人才资源和顾客资源的获取,并通过资源获取对创新绩效产生正向影响作用。     

胰岛素样生长因子结合蛋白7的研究进展

胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP7）是胰岛素样生长因子结合蛋白超家族（IGFBPs)中一名新成员。与其他结合蛋白一样，它能与胰岛素样生长因子（IGFs)相结合，携带、转运IGF，延长IGF的半衰期，调控IGF的生物活性；更为重要的是，IGFBP7具有许多不依赖于IGF的生物作用，可参与多种类型的组织细胞的生长、发育、分化衰老与癌变等病理生理学过程。     

外资持股对提高企业ESG表现的影响研究

以2013—2022年A股上市企业为研究样本,实证检验了外资持股对企业ESG表现的影响。研究发现,外资持股对企业ESG表现有显著的促进作用,这一结论在经过倾向得分匹配法、工具变量法和替换被解释变量等一系列检验后依然稳健。机制分析表明,外资持股主要通过提高企业创新能力和减少代理成本两条渠道来影响企业ESG表现。调节效应分析表明,市场化和法制化水平会弱化企业外资持股对ESG表现的促进作用。异质性分析表明,外资持股的影响效应在成长期和成熟期的企业中显著,在衰退期的企业中不显著。     

Molecular cloning and expression of Pfu DNA polymerase gene and its application in long-distance PCR

A 2.3 kb DNA fragment containing Pfu DNA polA gene was amplified by PCR from total DNA of Pyrococcus furiosus and cloned into a pGEM-T vector. The recombinant clone pT-pfu was digested with Nco I and Xho I and the fragment was inserted into an expression vector pET3d-X. The Pfu polA gene was expressed in Escherichia coli BL21 (DE3). The gene product (Pfu) was purified with heat denaturation, polyethylenemine (PEI) precipitation and Bio-rex 70 ion-exchange chromatography. The recombinant Pfu was verified by protein N-terminal sequencing. With the recombinant Pfu, large λ DNA fragments were successfully amplified in long-distance PCR.     

管理者预算参与对管理绩效影响的实证研究

引人预算态度、预算激励变量,采用问卷调查法分析管理者的预算参与行为与管理绩效的关系,并构建了结构方程模型.研究发现:管理者预算参与与管理绩效成正相关,而这种正相关又受到预算激励的调节作用,即预算激励既直接调节管理者预算参与与管理绩效的关系,也通过管理者对预算的态度这一中介变量间接调节管理者预算参与与管理绩效的关系.     

泡沫铝夹芯板低速冲击性能研究

对包套轧制及胶粘泡沫铝夹芯板进行了低速冲击试验,分析了两种夹芯板在低速冲击下的力学响应及破坏形式.结果表明,两种结合界面的夹芯板都具有吸能特性,但冶金结合夹芯板抗冲击的缓冲时间明显长于胶粘结合夹芯板.随着加载冲量的增加,冶金结合夹芯板的屈服载荷和平台载荷增加,缓冲时间缩短,抗冲击过程表现出明显的应变率效应.冶金结合夹芯板破坏模式主要为芯层剪切、压实和面板塌陷.     

吡柔比星与DNA作用的光谱和电化学法研究

应用紫外、荧光、黏度、循环伏安等方法研究了吡柔比星与DNA的作用.结果发现:加入DNA后吡柔比星紫外光谱呈现减色效应,同时吡柔比星的加入使得EB-DNA荧光强度增强,黏度增大;循环伏安法表明DNA的加入使得吡柔比星的式量电位正移;Scatchard图表明吡柔比星对溴化乙锭(EB)与DNA的结合为竞争性抑制.综合以上实验结果,吡柔比星与DNA之间为嵌插作用;这些结果,可为合理改善药效,降低抗癌药物毒性和设计新药提供理论依据.