结核分枝杆菌的免疫机制及抗原研究进展

结核分枝杆菌是一种胞内病原苗，在抗结核分枝杆菌感染中，活菌疫苗中的分泌蛋白起主要的免疫保护作用，它们激活宿主Ｔ细胞介导的细胞免疫，影响宿主免疫保护与病菌耐受性之间的不稳定平衡，决定宿主是否得病．结核分枝杆菌的特异性和保护性抗原的筛选为结核病的快速诊断及新型疫苗构建打下基础．     

表达结核分枝杆菌休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白

利用大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pDE22,构建能够表达结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis, M.s）。采用聚合酶链反应（PCR）方法,从MTB H37Rv基因组DNA中扩增MTB休眠相关抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段并克隆入pMD18-T载体,序列测定正确后分别亚克隆入大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pDE22,将重组载体pDE22-Rv2031c-Rv2626c电穿孔导入M.s,42℃热诱导表达目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western-blot分析。利用PCR方法扩增获得MTB休眠相关抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段,大小分别为435bp和480bp,基因测序与Genebank公布的基因序列完全一致。SDS-PAGE分析结果表明重组载体pDE22-Rv2031c-Rv2626c电穿导入M.s后能够特异性表达目的蛋白,大小约为35kDa,与理论值相符。Western-blot鉴定结果表明抗Rv2031c和抗Rv2626c的单克隆抗体均能够与目的蛋白发生特异性的反应,大小相一致。成功构建表达MTB休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白的重组M.s,并命名为Rv2031c-Rv2626c-rM.s,为其用于结核新型疫苗的研究奠定了基础。     

小鼠结核分枝杆菌感染模型用于评价重组HBHA疫苗免疫效果的实验研究

目的通过复制小鼠结核病模型评价重组HBHA疫苗的免疫效果。方法将重组肝素结合血凝素(HBHA)疫苗接种BALB/c小鼠,观察其诱导的细胞免疫应答水平,并以MTB H37Rv毒株攻击免疫小鼠,研究重组疫苗诱导的保护力。结果重组HBHA免疫BALB/c小鼠后可诱发细胞毒作用,将体内MTB裂解。重组疫苗不仅能刺激CD4+T,CD8+T增殖、活化,还可诱导脾细胞分泌IFN-γ、IL-2等细胞因子。H37Rv毒株攻击后,被免疫小鼠的组织病理学症状减轻。结论本研究通过检测小鼠体内细胞免疫应答和肺脏组织病理学改变等指标,客观的反映了重组疫苗免疫小鼠结核模型的保护效果。     

结核分枝杆菌单克隆抗体与自身抗原组蛋白的免疫交叉反应研究

ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验证实了结核分枝杆菌的Ｈ３７Ｒａ的单克隆抗体与自身抗原组蛋白发生免疫交叉反应。     

结核分枝杆菌诊断抗原的研究进展

结核病的血清学诊断是一种敏感、特异、快速、低成本的检验方法,而所用诊断抗原的特异性、敏感性与诊断符合率密切相关。本文就目前在研的几种结核分枝杆菌诊断抗原(结核菌素、38 kD蛋白、ESAT-6、MPT64、M tb8.4、A-60、LAM、TB4)作一简要综述。     

表达结核杆菌抗原的重组酿酒酵母免疫小鼠研究

近年来研究显示全细胞重组酿酒酵母疫苗具有治疗性疫苗潜能.为了研究重组酿酒酵母结核病候选疫苗的免疫效果,将IFN-γ基因与结核杆菌抗原蛋白Ag85B、ESAT6的基因融合,利用pHR酿酒酵母表达系统和同源重组方法,成功构建了以酿酒酵母Y16为宿主的表达融合蛋白IF-γ-Ag85B和IF-γ-ESAT6-Ag85B的重组酿...     

结核分枝杆菌单克隆抗体与自身抗原组蛋自的免疫交叉反应研究

WesternBlot实验证实了结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）H37Ra的单克隆抗体与自身抗原组蛋白发生免疫交叉反应．利用计算机软件对交叉反应的分子生物学基础进行了分析,发现结核分枝杆菌H37Ra的蛋白与组蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4各有一个包含3个或4个氨基酸的序列同源区域．     

结核分枝杆菌和卡介苗抗原蛋白的比较研究

利用Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ技术,对结核分枝杆菌和卡介苗抗原蛋白进行研究,发现两个菌种的３１ＫＤ和３０ＫＤ蛋白均能单克隆抗体识别,且两蛋白均存在于培养基滤液中,并对卡介苗诱发抗结核反应的机制进行了探讨。     

表达HBHA和hIL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗作用

评价表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌用于结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗效果.结核分枝杆菌H37Rv感染小鼠4周后,用表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌免疫治疗,检测免疫小鼠肺部荷菌量和组织病理变化.重组耻垢分枝杆菌可有效控制感染小鼠肺部结核分枝杆菌的荷菌量,减轻病理损伤.但在降低肺部荷菌量方面不如化疗药物.表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌可有效控制结核分枝杆菌在小鼠体内的增殖,可能成为联合化疗药物控制结核病的有效候选疫苗.     

带His-tag的乙肝病毒融合抗原在毕赤氏酵母中的表达

乙肝病毒融合抗原SpreS1（简称SS1抗原）较S抗原有更强的免疫原性,可望有更好的临床应用前景．为了便于表达产物的纯化,利用化学合成的寡聚核苷酸链和PCR扩增,在SS1基因的5’端和3’端分别融合了6His-EK和6His的编码序列,将其重组质粒pPIC3.5k-6His-EK-SS1,pPIC3．5k-SS1-6His转化毕赤氏酵母菌GS115,筛选鉴定得到的重组酵母工程菌进行诱导培养,然后采用镍离子柱（Ni-NTA Basin）纯化表达产物,纯化的蛋白样品经ELISA效价测定、SDS-PAGE和Western Blot分析,结果表明融合抗原基因6His-EK-SS1和SS1-6His在毕赤氏酵母中均能表达,纯化的产物仍有免疫原性,所用的纯化方法简便有效．     

尘肺结核患者Mycobacterium tuberculosis耐药基因突变研究

研究尘肺结核患者结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)耐药基因突变与耐药性的关系。在97例尘肺结核患者痰中检出MTB菌株28株,采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因突变,并与采用常规药敏试验(AST)法检测的耐药结果进行对比分析。采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因,突变率分别为42.86%(12/28)、42.86%(12/28)和32.14%(9/28),采用AST法检测INH、RFP和SM,耐药率分别为64.23%(18/28)、60.71%(17/28)和53.57%(15/28),两者之间差异均无显著性(P>0.05)。其中多耐药株20例(71.43%),包括耐三种药物12例(42.86%),耐两种药8例(28.57%),单耐药株6例(21.43%),敏感株2例,耐药率92.86%。PCR-SSCP法检出3个基因联合突变8株,与AST法符合率为66.67%(8/12);2个基因突变5株,符合率为62.50%(5/8);单基因突变2株,符合率为33.33%(2/6)。结果表明:PCR-SSCP技术适用于MTB katG、rpoB和rpsL耐药基因突变的筛选,对指导尘肺结核患者临床用药上具有重要意义。