丝状真菌原生质体技术研究

研究了培养基成分,培养方式和培养时间对台湾根霉、糙皮、侧耳、草菇和银丝菇原生质体分离再生的影响。分离再生质体培养基,草菇以ＰＤＡ＋稻草浸出液,银丝菇以ＣＹＭ培养基,糙皮侧以２０％平菇子实体浸出液配制的ＰＱＡ培养基为好,原生质体再生培养基,草菇以ＰＤＡ＋稻草浸出液,糙皮侧以ＢＭ培养基为好,不同培养方式对不同菌种原生质体再生率的影响是不同的。台湾根霉的原生质体在液体再生培养基上的再生率为４５％,而在固     

丝状真菌原生质体技术的研究(Ⅷ)——渗透压稳定剂对原生质体的影响

报道用五种无机盐和有机糖醇作渗透压稳定剂,对草菇、银丝菇、台湾根霉和黑曲霉原生质体分离和再生的影响．分离原生质体以ＫＣｌ、ＮａＣｌ和ＭｇＳＯ４等无机盐渗稳剂较有机糖醇效果好．ＫＣｌ和蔗糖对四种真菌原生质体再生都有较好的效果．就浓度而言,分离原生质体０．６ｍｏｌ／ＬＫＣｌ、ＭｇＳＯ４、蔗糖和甘露醇对黑曲霉和台湾根霉都是最佳的浓度．草菇和银丝菇以０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或０．５ｍｏｌ／ＬＫＣｌ和ＭｇＳＯ４效果较好．渗透压稳定剂的种类和浓度不仅影响原生质体的数量而且影响原生质体的质量．０．６ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ对台湾根霉和黑曲霉原生质体分离有好的效果,而对草菇和银丝菇效果就比较差．０．６ｍｏｌ／ＬＫＣｌ对草菇、银丝菇和台湾根霉原生质体再生有很好的效果,而对黑曲霉效果则相当差．     

丝状真菌原生质体技术的研究——去壁酶对丝状真菌原生质体形成的影响(Ⅱ)

本文研究了几种丝状真菌原生质体形成的最佳酶类和酶浓度(W/V).结果表明:台湾根霉为2％的溶壁酶(Ⅱ);黑曲霉,平菇,草菇,银丝草菇为1.5％的溶壁酶(Ⅰ);放线菌的红霉素链霉菌为0.025％的溶菌酶.     

丝状真菌原生质体技术研究（V）──原生质体融合的形态学观察

本文报道了台湾根霉、黑曲霉、米曲霉、草菇、银丝草菇和糙皮侧耳等，几种丝状真菌原生质体释放、再生和融合过程的形态学观察结果，并对其机制进行了讨论．原生质体释放有顶位、侧位和原位释放３种方式；原生质体分无核、单核、双核和多核４种类型．原生质体的再生过程由壁的再生、修复和萌发３个阶段组成．原生质体萌发可成芽管状、念珠链状和３个以上方向分裂形成的不规则状．原生质体融合分为两个、３个和原生质体再融合３种类型，无核原生质体、原生质修复不完整、遗传物质不完全整合性和细胞壁合成机制不协调，是造成种间融合再生率低的重要因素．     

丝状真菌原生质体技术研究（Ⅵ）：高脚小伞原生质体…

报道高脚小伞菌丝体原生质体制备及再生的结果，多种因素影响原生质体的产量及再生率，在最适条件下，质原质体产量可达２．５４×１０＾６个／ｍｌ，再生率达２３．６％，还对原生质体的活力及核数进行了测定，本研究为进一步的原生质体融合及外源基因转化工作打下了基础。     

丝状真菌原生质体技术的研究（Ⅷ）：渗透压稳定剂对？…

报道用五种无机盐和有机糖醇作渗透压稳定剂,对草菇、银丝菇、台湾根霉和黑曲霉原生质体分离和再生的影响。分离原生质体以ＫＣｌ、ＮａＣｌ和ＭｇＳＯ４等无机盐渗稳剂较有机糖醇效果好。ＫＣｌ和蔗糖对四种真菌原生质体再生都有较好的效果。就浓度而言,分离原生质体０．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４、蔗糖和甘露醇对黑曲霉和台湾根霉都是最佳的浓度。草菇和银丝菇以０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或０．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ和ＭｇＳ     

丝状真菌原生质体技术——(Ⅰ)黑曲霉原生质体灭活

在GM玻璃纸平板上接种10~6数量级的孢子悬液,31℃培养17～18hr,收集菌丝于1.5%Lywallzyme中酶解4hr,过滤离心收集原生质体,原生质体经50℃,5min处理,并20W紫外灯40cm照射,150s,0.1MHNO_2,pH4.6.再经31℃恒温处理7min,原生质体可达到全部灭活.     

丝状真菌原生质体技术研究(Ⅵ)——高脚小伞原生质体的制备与再生

报道高脚小伞菌丝体原生质体制备及再生的结果．多种因素影响原生质体的产量及再生率，在最适条件下，原生质体产量可达２．５４×１０６个／ｍｌ，再生率达２３．６％，还对原生质体的活力及核数进行了测定，本研究为进一步的原生质体融合及外源基因转化工作打下了基础     

组织培养和原生质体培养在林木上应用的现状

组织培养和原生质体培养已成为生物工程的重要技术．并在农业、花卉等方面取得了很大的成就．林木与其他草本植物相比，进展较为缓慢，但近几年来，亦取得了令人鼓舞的成果，本文就国内外林木的组织培养和原生质体培养的现状作以评述．     

Bacillus licheniformis原生质体形成及再生最佳条件的研究

研究了多种因素对Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ原生质体形成及再生的影响。在原生质体形成及再生的最佳条件下制备原生质体，原生质体的形成率和再生率分别达到９９．７％和３０．９％。     

植物原生质体培养与融合的研究进展

对原生质体的分离、培养、融合及植株再生方面进行了简要的论述.并根据对有关文献的分析,讨论了原生质体研究中存在的问题及今后的发展趋势,指出植物原生质体的游离、培养和融合技术在近20多年来得到了迅速的发展,今后在进一步加强原生质体培养基础理论研究的同时,重点放在利用原生质体融合技术进行遗传性状的改良,以获得优良性状的个体并通过无性途径固定下来.     

枯草杆菌(B.subtilis)原生质体融合的方法学研究

利用改良的HM制备液,在适宜的条件下酶解制备亲本株的原生质体,在DNase存在的条件下,用PEG(MW6000)做为聚合剂,经低温短时间处理,将枯草杆菌(B.subtilis)Ki—2—132衍生株与BR_(151)衍生株的原生质体融合。再在适宜的条件下使用改良的DM_3再生培养基,补加适量经处理的人血清白蛋白,同时加入适量适合于枯草杆菌细胞壁再生的引物进行再生,使再生率达到了55～58.15％左右。融合率高达1.82×10~(-2)。筛选出51种不同类型的融合子923株,经传代8代测得其融合子的稳定率达32.46％,从而在工业菌株的选育中使获得高产菌株成为可能。     

枸杞原生质体的分离培养及其多糖成份的研究

本文在研究枸杞原生质体制备的基础上,对枸杞原生质体进行培养,并分析了枸杞多糖的含量和性质,从而为枸杞的转基因研究、医用价值的探索奠定了基础。     

小白链霉菌(Streptomyces albulus)的原生质体制备研究

广谱天然防腐剂ε-多聚赖氨酸产生菌Streptomyces albulus的育种工作目前仅处于常规育种水平,为对其进行原生质体技术的育种改造,对影响S.albulus原生质体制备的几个重要因子进行了详细研究。测定了S.albulus的生长曲线,确定制备原生质体的最佳菌龄为稳定期初期即培养40h;S发酵液中添加2·0%甘氨酸可使原生质体形成率最高;以破坏链霉菌细胞壁效果最好的溶菌酶进行酶解,确定最佳酶解温度为为35℃、最佳酶解时间为180min、最佳溶菌酶浓度为2.0mg·mL-1;在以上最佳原生质体制备条件下可获得纯净且量多的S.albulus原生质体,形成量达1.74×108cfu·mL-1,为S.albulus原生质体的进一步遗传育种奠定了良好的基础。     

G-8菌株原生质体形成和再生条件的研究

以浮游球衣细菌Ｇ－８菌为出发菌株,有杉甘氨酸－溶菌酶－ＥＤＴＡ方法,研究了各种因素对原生质体形成和再生的影响。在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体,Ｇ－８菌原生质体形成率和一率分别达９６．８％和２９．８％,通过光学显微镜技术,观察了原生质体形成和再生的过程。     

酿酒酵母W5原生质体制备及再生条件的初步研究

对影响酿酒酵母W5制备与再生的一系列因素做了初步的研究,确定了原生质体制备与再生的最佳条件:菌龄为12h,脱壁预处理剂作用20min,在30℃,pH为偏酸或者偏碱的条件下,选用2%(m/v)的蜗牛酶用10mL试管摇床温育15min;渗透压稳定剂采用17%(m/v)蔗糖,原生质体制备率和再生率可达到95.11%和14.66%。     

细菌科间原生质体融合方法的研究

本文通过对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)151衍生株和北京棒杆菌(Corynebacterium pekinese)1134衍生株的科间原生质体融合的研究以及灭活原生质体的科间融合的研究,揭示了细菌科间原生质体融合的可能性,同时进行了不同融合方法的分析对比,为今后工业微生物的远缘育种提供了可以选择的有效途径和理论依据。     

高效絮凝剂产生菌的筛选及培养条件优化

从活性污泥中分离筛选到1株高效絮凝剂产生菌E-9，初步鉴定其为大肠杆菌，菌E-9产生絮凝剂的适宜培养基及培养条件为：蔗糖、乙醇为碳源，大豆、蛋白胨为氮源，初始pH值为6．0～7．0温度为30℃，因菌E-9为兼性厌氧菌，未考虑通气量对其影响，絮凝实验结果表明，菌E-9产絮凝剂对高岭土悬液的絮凝率最高可达99．5％。