响应面法优化酶法制备酪蛋白糖巨肽的工艺条件

采用Minitab方法设计实验,对影响酪蛋白糖巨肽制备的酶解因素进行优化,发现酶解时间、酶解温度、酶解pH、酶与底物比是影响酶解酪蛋白的主要因素.由于唾液酸是酪蛋白糖巨肽的特征性组分,本文以唾液酸的含量表征酶解上清液中酪蛋白糖巨肽的含量.根据Minitab分析的结果,采用Design Expert软件中水平设计和响应面分析法对影响酪蛋白糖巨肽产量的主要因素进行优化,建立唾液酸含量A580对酶解主要条件的二次回归模型,其回归方程的决定系数达到了0.962,9.得到的最佳酶解条件为:酶解时间80,min,酶解温度42.5,℃,酶解pH 6.28,酶与底物比270,U/g.唾液酸含量A580最高为0.653,此时酪蛋白糖巨肽的得率为17.91 mg/g.     

小肽对幼龄草鱼生长性能的影响

本试验用225尾草鱼分为3组作酪蛋白小肽对幼龄草鱼生长性能的研究。对照组添加0.5％酪蛋白。试验组1和试验组2饵料中分别添加0．5％酶解酪蛋白与0．5％酸解酪蛋白。结果表明：添加0．5％酶解酪蛋白组草鱼其相对生长率、饲料系数、净蛋白沉积率、生长速度均显著高于试验2组和对照组。     

太平洋鲑鱼肠道中小肽与血液循环中肽关系的研究

为了研究太平洋鲑鱼Oncorhynchus spp.肠道完整吸收小肽与肠道中小肽的关系,用20%酶解酪蛋白、酸解酪蛋白、酪蛋白和生理盐水4组溶液分别进行各5尾太平洋鲑(体质量为300±13.8 g)肠道灌注试验(1mL·100g-1).20min后尾静脉采血制备血浆,高效液相色谱分析结果表明:灌注酶解酪蛋白溶液的太平洋鲑鱼血液循环中总肽量和某些肽量极显著(P＜0.01)高于灌注生理盐水、酪蛋白、酸解酪蛋白溶液;较灌注生理盐水、酪蛋白、酸解酪蛋白溶液的太平洋鲑鱼血液循环中总肽量分别提高了167.3%、40.2%和48.3%.实验结果表明,太平洋鲑鱼血浆中肽量的增加与肠道提供的肽种类和数量有关,太平洋鲑鱼肠道能够一定程度地完整吸收某些小肽进入血液循环.     

液相色谱-高分辨串联质谱法检测牛奶中A1和A2 β-酪蛋白

建立一种基于液相色谱\|高分辨串联质谱（LC-HRMS/MS）方法检测牛奶中A1和A2 β-酪蛋白. 采用等电点沉淀法从牛奶中提取酪蛋白, 经胰蛋白酶酶解后, 将酶解产物进行LC-HRMS/MS分析, 选择含有差异氨基酸残基（第67位）的肽段作为特征肽段对A1和A2 β-酪蛋白进行区分. 采用Tris-HCl缓冲溶液充分溶解酪蛋白, 在酶解反应体系中添加乙腈以提高酶解效率. 采用高分辨质谱和串联质谱技术, 进一步排除杂质产生的干扰信号. 采用该方法对市售4种普通牛奶和2种A2牛奶进行检测, 结果表明， 普通牛奶中A1 β-酪蛋白的含量约为A2 β-酪蛋白含量的2~4倍, 个别A2牛奶样品含微量A1 β-酪蛋白. 该方法可检测牛奶中的A1和A2 β-酪蛋白, 具有高可靠性、 高灵敏度等优点, 为A2奶源筛选和质量控制提供支持.     

β──环糊精对酪蛋白乳化能力及乳化稳定性的影响

本文以β──环糊精与酪蛋白乳化能力及乳化稳定性的关系为研究内容，并且探讨了工艺操作条件的影响。在酪蛋白乳化体系中加入β──环糊精，可以使两者之间形成包接复合物。与未加入β──环糊精的酪蛋白乳化体系相比，在实验条件下，其乳化能力及乳化稳定性均表现出明显改善。实验结果显示，β──环糊精与酪蛋白浓度比１．０及ｐＨ９．０为较优工艺操作条件。这一结果为开拓β──环糊精在食品加工中的应用范围提供了实验依据，对改善某些种类产品的感官及质地具有应用价值。     

酶解制备牦牛乳酪蛋白降血压肽的初步研究

目的:牦牛乳富含酪蛋白,其经酶解制备的降血压肽以安全性高、无副作用等优点已成为乳品开发和高血压防治药物研究的新热点.方法:本实验对从牦牛乳中提取的酪蛋白,依据复合蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及胰蛋白酶各自的最适pH及温度采用酶解方法制备降血压肽,并且以ACE抑制活性为指标初步筛选最佳水解酶.结果:五种酶ACE抑制肽抑制率分别为:复合蛋白酶为39.02%,中性蛋白酶为67.48%,碱性蛋白酶为56.10%,木瓜蛋白酶为71.54%,胰蛋白酶为8.94%.结论:说明,在最适pH及温度条件下,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为制备降血压肽的最佳酶选,这为后续进一步的制备降血压肽实验提供依据.     

CPP生产副产物--CNPP酶膜耦合法 制备ACE抑制肽研究

采用酶解与膜分离耦合的方法,以酶膜耦合法生产酪蛋白非磷酸肽(CPP)得到的副产物——酪蛋白非磷酸肽(CNPP)为原料制备高活性ACE抑制肽.用Protease N、胰蛋白酶、Fla-vourzyme、AS1398、酸性蛋白酶等几种蛋白酶对经过酶膜耦合制备的酪蛋白非磷酸肽进行二次酶解,同时与1 K膜分离耦合,然后对二次酶膜耦合所得产物的ACE抑制活性进行比较.结果表明,Protease N比其他几种蛋白酶更适合用于酪蛋白非磷酸肽制备高活性的ACE抑制肽,其产物的蛋白质量浓度为1 g/L时的ACE抑制率达到55.60%.     

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长cDNA克隆pB_aS_1C184经Bgl Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,回收其中的酪蛋白基因编码片段,与经BamH Ⅰ、SmaⅠ双酶切的植物表达载体pBI121.2分两步连接:第一步载体的BamHⅠ末端与酪蛋白基因的BglⅠ粘性末端连接;第二步用T_4DNA多聚酶补平酪蛋白基因的EcoR Ⅰ末端,再与载体SmaⅠ进行平末端连接而环化,转化JM109菌株,从得到的33个转化子中,通过~(32)P标记的酪蛋白cDNA基因为探针,点杂交筛选到一个阳性克隆。经酶切鉴定,确认酪蛋白cDNA基因编码区已正确插入到pBI121.2中。     

酶水解法调整牛乳中清蛋白与酪蛋白的比例提高乳粉营养价值的研究

本研究采用固定化胰酶水解法，将牛乳中部分酪蛋白水解成小分子肽和氨基酸，降低酪蛋白的含量，调整清蛋白与酪蛋白的比例，再用此牛奶制成配方乳粉。通过６０例婴幼儿３个月的喂养试验结果表明，用改性后牛乳制成的乳粉营养价值明显高于普通乳粉，身高、胸围、腹壁皮脂厚度、血红蛋白、血清总蛋白、发锌和发铁的增长都显著大于普通对照乳粉喂养组。     

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长ｃＤＮＡ克隆ｐＢａＳ１ｃ１８４Ｘ ＧＬⅢ和ＣＯｒＩ双酶切，回收基中的酪蛋白基因编码片段，与经ＢａｍＨＩ，ＳｍａＩ双酶切的植物表达载体ｐＢＩ１２．１２分两步连接；第一步载体的ＢａｍＨＩ末端与酪蛋白基因的ＢｇｌⅡ粘性末端连接；第二步用Ｔ４ＤＮＡ多聚酶补平酪蛋白基因的ＥｃｏＴＲⅠ末端，再与载体ＳｍａⅠ进行平末端连接而环化。