抗紫杉醇抗体的制备方法

用化学方法将紫杉醇（Ｔａｘｏｌ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）偶联制成全抗原Ｔａｘｏｌ－ＢＳＡ．以Ｔａｘｏｌ－ＢＳＡ免疫家兔后收集抗血清，分离纯化抗体，经酶联免疫吸附法测定证实抗血清中有特异性抗紫杉醇抗体，将纯化的抗体进行免疫双扩散鉴定，结果表明其有较高滴度（３．２×１０２）．     

抗丁草胺多克隆抗体的制备及应用

以牛血清白蛋白-丁草胺免疫抗原免疫家兔获得了抗丁草胺多克隆抗体,并建立了竞争酶联免疫吸附检测丁草胺(除草剂中的一种主要成分)分析方法。该方法的检测范围在1×10^-9～100×10^-9mg/mL之间,且和化学结构相似的甲草胺和乙草胺无交叉反应。该方法也可用于检测稻田水样中丁草胺的含量。     

酶联免疫吸附法测定血清抗精子抗体

将酶联免疫吸附技术用于人血清抗精子抗体的检测,126例,临床检查结果所得,平均批内变异系数为6.5%,平均批间变异系数为7.1%,证实该法稳定性、重复性良好。44例正常供血者标本得正常值为 O.D(?)0.355。将其与目前临床上应用较广的精子浅盘凝集试验(TAT)结果比较,两者符合率达87.3%。     

一种适用于教学的酶联免疫吸附试验的抗原抗体系统制备

目的:探讨设计一种教学成本低、便于教学使用、有助于培养医学生综合实验设计能力和提高实验基本操作技能的酶联免疫吸附实验抗原抗体系统.方法:以提纯的人IgG免疫家兔获取兔抗人IgG抗体,再用其包被酶标反应板,以人血清(人IgG)作抗原,用酶标记羊抗人IgG抗体结合抗原及催化底物显色反应.结果:该双抗体夹心法,底物显色反应清楚肉眼即可作出判定,非特异干扰极小.结论:我们设计的酶联免疫吸附实验-双抗体夹心法原理清晰、便于理解和掌握、教学成本较低、结果易于观察、便于教学大量使用.     

四种赤潮藻多克隆抗体的制备及特异性分析

为了建立4种赤潮藻（赤潮异弯藻（Heterosigma akashiwo）、海洋褐胞藻（Chattonella,marina）、卵圆褐胞藻（Chattonella ovata）、具齿原甲藻（Prorocenlnmz dentatum））的免疫学检测方法,分别用4种赤潮藻免疫Balb／C小鼠,制备针对4种不同赤潮藻的抗血清,间接ELISA检测其亲和性和特异性．结果显示,4种赤潮藻的抗血清对各自藻体均有良好的亲和力和特异性,交叉反应结果显示,抗血清与同种藻之间有较强的反应而异种赤潮藻之间交又反应较弱．表明单种藻免疫获得的小鼠多克隆抗体可特异性地与相应赤潮藻作用,可用于赤潮藻的免疫学检测分析．     

氯霉素多克隆抗体的制备及特性分析

为了建立快速检测氯霉素(CAP)的免疫学方法,采用重氮法、混合酸酐法与碳二亚胺法(EDC)法分别合成氯霉素完全抗原,并通过稳定性比较实验确定采用混合酸酐法合成的氯霉素卵清蛋白(CAP-OVA)免疫BMb/C小鼠,制备抗血清,采用EDC法制备的氯霉素牛血清白蛋白(CAP-BSA)作为检测抗原,用ELISA方法进行鉴定与特性分析.结果显示该多抗与常见抗生素的交叉反应率均小于0.01%,IC50为18.53 ng/mL,灵敏度达到0.53ng/mL,该抗体可用于氯霉素的快速检测.     

甲磺隆人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

为了建立测定磺酰脲除草剂甲磺隆残留的酶联免疫吸附检测方法(ELISA),以邻甲酸甲酯苯磺酰胺与琥珀酸酐反应合成半抗原1[(2甲酸甲酯)苯磺酰]单胺琥珀酸.用活性酯化法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原.通过免疫抗原免疫新西兰大白兔获得甲磺隆的多克隆抗体,抗体效价达800 000.以此抗体建立的间接竞争ELISA法,检测甲磺隆的线性范围在0.7～40 mg/L,最低检测限为0.16 mg/L.与甲磺隆结构相似的磺酰脲类除草剂的交叉反应结果表明,氯嘧磺隆的交叉反应率为38.2%,其他4种除草剂的交叉反应率都小于1%.     

抗弓形虫IgY抗体在酶免疫试验中的应用

IgY是从鸡蛋黄中提取的免疫球蛋白,不但具有高免疫活性,而且不受类风湿因子、血清补体等干扰,在免疫学试验中具有优越性。用纯化的弓形虫虫体抗原免疫白菜杭鸡获得特异性的IgY抗体,用辣根过氧化物酶标记后与抗人IgM单抗配伍建立捕获法酶免疫试验,与同类试剂对照,平行检测192份临床血样,检测结果二者吻合,表明该IgY具有良好的特异性和敏感性。     

顶头孢霉cefG基因的表达及抗体制备的研究

通过PCR方法得到带酶切位点的cefG基因,用于构建表达质粒pET30-G,并在大肠杆菌里成功表达出乙酰转移酶的包涵体。将该重组蛋白的标准品作为抗原,免疫BALB/c小鼠得到多克隆抗体,酶联免疫吸附测定(ELISA)分析得抗体的效价满足实验需求。利用该抗体绘制出抗原浓度的标准曲线,确定待测抗原适合的检测浓度在0.16μg/mL以下。制得的抗体在重组大肠杆菌里检测到了乙酰转移酶,证明所得抗体具有实验价值。     

重组毕赤酵母AiiA蛋白表达量的双抗体夹心ELISA测定

利用双抗体夹心ELISA的方法,建立了能对重组毕赤酵母表达Aii A蛋白进行定量测定的方法.双抗体夹心ELISA方法建立的标准Aii A蛋白曲线显示,随着Aii A蛋白质量浓度增大,显色后A410值增大,在Aii A质量浓度为1.11~35.5μg·m L-1的范围内具有良好的线性关系.经方法学分析表明,该方法对含有Aii A蛋白的发酵样品的检测具有良好的特异性和精确度,Aii A的检测限为0.80μg·m L-1,批内差异系数和批间差异系数分别为5.22%和10.30%.测定8.86,2.22,1.11μg·m L-13个质量浓度回收率分别为104%、97.3%和102%,能够满足定量要求.     

红豆杉组织、细胞培养物紫杉醇快速检测

利用薄层层析，高效液相色谱，酶联免疫吸附等方法对国内4种1变种红豆杉及其组织，细胞培养物进行紫杉醇快速定性，定量检测，试验结果表明，国内4种1变种红豆杉及其组织，细胞培养物中都含有紫杉醇，其中东北红豆杉及其培养物中紫杉醇含量较高。     

献血员采血前后抗-HCV检出率的调查

近年来国内外许多资料认为HCV(丙型肝炎病毒)是输血后肝炎的重要病因,输血是丙型肝炎病毒传播的主要途径之一,输血后肝炎中60～90％为丙型肝炎。为了防止肝炎的血源性传播,减少输血后丙型肝炎的发生,有必要对献血员供血前、后两次筛检抗-HCV。我们采用ELISA法对献血员供血前、后两次筛检抗-HCV达3365人次,发现第二次复检仍有抗-HCV阳性者,也支持二次筛检这一观点。现将调查结果报道如下。     

松香人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

利用脱氢松香胺(DHAM)为半抗原合成了松香的完全抗原、并通过免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。首先DHAM与琥珀酸酐(SUC)反应合成琥珀酸单酰脱氢松香胺(DHAM-SUC),然后再与牛血清蛋白(BSA)和钥孔血蓝蛋白(KLH)进行偶联,合成了松香的完全抗原DHAM-SUC-BSA和DHAM-SUC-KLH,偶联比分别为12和35。以DHAM-SUC-KLH为免疫原对新西兰大白兔进行免疫,制备了抗血清,效价达1.28×10⁵,脱氢松香酸(DHA)和松香酸(AA)的50%抑制浓度(IC₅₀)分别为25.1μg/L和36.4μg/L。研究合成的松香人工抗原具有理想的免疫原性,获得的多克隆抗体具有较好的灵敏度,可为建立畜禽肉制品中松香残留的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法打下基础。     

以赭曲霉毒素A多克隆抗体建立直接竞争酶联免疫吸附分析方法研究

将赭曲霉毒素A(OA)抗原免疫大白兔制备多克隆抗体,建立直接竞争酶联免疫吸附分析方法(ELISA)。结果多克隆抗体的效价高达1∶21万。建立的直接竞争ELISA检测方法的下限为0.05ng/ml,线性范围0.05~51.2ng/ml,OA添加到玉米粉中的样品回收率达到94.8%。     

抗胸腺素α1(Tα1)多克隆抗体的纯化及转基因藻中Tα1的检测

采用不同浓度的硫酸铵分级盐析纯化抗Tα1多克隆抗体,然后用不同量的牛血清白蛋白(BSA)与兔抗Tα1抗体进行中和,以去除血清中的抗BSA抗体,并利用纯化后的抗Tα1多克隆抗体检测转基因藻中Tα1.结果表明:采用25%(NH4)2SO4进行分离纯化,并将BSA加入到血清中进行中和,37℃处理30min,BSA的量与血清的比例以1μL血清 15μgBSA可达到中和血清中的抗BSA抗体的目的.获得的抗Tα1抗体效价与未进行分离前基本相同,并且阴性本底低.采用ELISA方法检测野生藻和转基因藻中的Tα1,转基因藻的Tα1OD450值比野生藻的高2.1倍以上,提示Tα1在转基因藻中成功表达.实验证明,此方法能有效纯化抗胸腺素α1多克隆抗体,获得特异性强的抗胸腺素Tα1抗体,并且效价不受影响.     

抗体夹心酶联免疫吸附法测定鸡白细胞介素-2

利用抗鸡白细胞介素-2（ChIL-2）单克隆抗体作包被抗体、生物素标记的抗ChIL-2多克隆抗体作检测抗体建立了一个抗体夹心酶联免疫吸附测定系统．此系统对鸡白细胞介素乏的检测灵敏度为50pg／mL．两种抗体与鸡干扰素-α和人白细胞介素-2等细胞因子不产生任何非特异性反应．以不同种类的促有丝分裂剂或鸡病毒刺激鸡淋巴细胞，培养液中分泌产生的天然鸡白细胞介素-2的量用此系统检出．在促有丝分裂剂中，植物血凝素（PHA）导致ChIL-2的产生量最高；在病毒方面，传染性法氏囊病毒最能促使ChIL-2的分泌．本研究建立的抗体夹心酶联免疫吸附测定系统为我们以定量方式测定鸡白细胞介素-2提供了一个灵敏度高、特异性好的工具．     

单纯疱疹病毒抗体的酶联免疫吸附——单扫描示波极谱法测定

报道了用辣根过氧化物酶为标记酶的ELISA—LSP法测定单纯疱疹病毒抗体(HSV—Ab).研究了测定的最适条件;测定了型共同性单克隆抗体,其灵敏度为ELISA的2倍,线性范围比ELISA宽2个滴度;对40个杂交瘤细胞系进行单克隆筛选,测出的阳性克隆率(75%)高于ELISA所测值(72.5%);对阳性克隆的分型结果与ELISA一致,此法灵敏、可靠、易实现.     

ELISA检测姜片虫病患者抗体的研究

研究了姜片吸虫成虫冷浸抗原检测姜片吸虫病患者血清抗体的敏感性和特异性及其在流行病和临床上的应用价值．超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原．以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性．按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果．普查2189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与改良加藤法的阳性符合率98．21％;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4．08％;与血吸虫病交叉阳性为9．38％,肺吸虫病交叉阳性为5．36％．姜片吸虫成虫冷浸抗原1：3500工作浓度包被酶标板,检测姜片虫病血清抗体具有敏感性高、特异强和交叉反应率低的特点．     

鱼肉中LMG的分子印迹仿生ELISA检测方法

针对水产品中隐性孔雀石绿(leuco malachite green,LMG)残留的问题,建立了鱼肉中LMG的分子印迹仿生酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法。以LMG为模板分子,在p H=8. 5的Tris-HCl介质中,多巴胺(dopamine,DA)经氧化自聚合4 h即可在微孔板表面形成聚合物膜,经V(甲醇)∶V(乙酸)=9∶1混合溶液洗脱模板分子后,形成LMG分子印迹聚合物膜(membrane of molecularly imprinted polymer,MIP)。以LMG-MIP膜为仿生抗体,建立了鱼肉中LMG残留的仿生ELISA检测方法。该方法灵敏度为5. 18μg/L,检出限达0. 03μg/L。利用隐性结晶紫和孔雀石绿这2种LMG的结构类似物进行方法的特异性试验,交叉反应率为21. 3%。实际样品加标回收实验表明,方法的回收率为71. 8%～73. 5%,RSD≤4. 2%。结果表明,该检测方法可用于鱼肉中LMG残留的快速筛查。     

抗体交联脂质体的制备

采用超声波法制备包封色素脂质体，并使其能与乙肝抗体蛋白交联生成具有检测诊断功能的抗体交联脂质体．研究结果表明，用超声波法制备出来的脂质体包封色素效果较好，色素包封率为0．61％；以戊二醛为交联剂将脂质体与乙肝抗体蛋白交联后所制备的脂质体，采用ELISA法进行检测，有活性．