AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录活性

AWP1含有A20样锌指蛋白结构域。在人乳腺文库中克隆了AWP1 cDNA序列。双荧光报告基因检测系统证明过表达AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录激活,并且AWP1与TNFα受体复合物中的TRAF2、IKKγ存在外源相互作用,为AWP1抑制TNFα信号通路的机制研究提供线索。     

野生型及突变型HIV-1 LTR驱动的荧光素酶稳定表达细胞株的建立

HIV潜伏感染是造成抗病毒疗法无法根除病人体内病毒的主要原因.建立有效的药物筛选模型,是成功筛选高效、低毒性HIV潜伏激活剂的关键.本研究中,我们构建了野生型及κB和TAR顺式元件突变型HIV-1LTR驱动的荧光素酶表达载体,并通过质粒转染人胚肾293细胞,通过G418筛选,获得了稳定表达的细胞克隆.从每个克隆中抽提基因组DNA,进行PCR扩增和序列分析,结果显示:报告载体稳定整合在细胞基因组中.进一步通过TNF-α去处理这些细胞模型,结果显示:10ng/mL TNF-α可以有效地激活野生型LTR和ΔTARLTR细胞,对ΔκB LTR细胞中荧光素酶表达水平没有影响.激活效果还在同一细胞的不同细胞克隆中得到了重复验证.     

ICAM-1在NF-κB通路中表达的研究进展

细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1),属于免疫球蛋白超家族中的一员,其主要功能是参与白细胞的迁移,来作为T淋巴细胞活化信号和调节炎性因子的表达.因此,ICAM-1表达量的变化与机体多种疾病相关.ICAM-1启动子区域含有大量能与转录因子及协同刺激物结合的基因位点,因而多种信号通路及转录因子参与调节ICAM-1的转录表达.NF-κB通路作为重要的炎症信号通路,同样也是调控ICAM-1表达的一条关键性转录通路.在炎症、病毒及肿瘤等疾病条件下,多种细胞因子能够通过激活NF-κB通路,从而改变ICAM-1的基因及蛋白表达水平.同时,ICAM-1作为疾病治疗中重要的靶点,为疾病的治疗开辟了新的道路.     

参附注射液通过调节核内HMGB1和NF-κB结合发挥抗炎活性的机制

探讨参附注射液（Shenfu injection,SFI）对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的RAW264.7细胞的抑炎作用及其潜在机制。采用LPS诱导野生型RAW264.7细胞制作炎症细胞模型,经参附注射液不同剂量进行干预,RT-qPCR、WB和ELISA检测细胞内促炎因子,包括诱导型一氧化氮合酶（induced nitric oxide synthase,iNOS）、白介素?1β（interleukin-1β,IL-1β）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）的转录、翻译和分泌水平,评价参附注射液的抗炎作用;构建高迁移率组蛋白B1（high mobility group protein B1,HMGB1）过表达RAW264.7细胞（HMGB1+-RAW264.7）和HMGB1点突变RAW264.7细胞（HMGB1m-RAW264.7）,通过免疫荧光检测野生型、HMGB1+和HMGB1m-RAW264.7细胞中HMGB1的核移位情况,采用哺乳动物双杂交法和免疫共沉淀法检测HMGB1、P65和P50的结合率,以探讨核内HMGB1在炎症反应中的作用及SFI抗炎的潜在分子机制。结果表明：SFI可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS、IL-1β和TNF-α的转录、表达和分泌（P＜0.01）。SFI能抑制HMGB1向核外迁移,使其高表达于核内。核内高表达HMGB1可使RAW264.7细胞对LPS的耐受度增加。在1μg/mL浓度LPS诱导下,HMGB1+-RAW264.7细胞中TNFα和IL-1β的转录和表达水平均升高,且SFI能逆转这一现象。HMGB1m-RAW264.7细胞中TNFα和IL-1β与对照组无差异。SFI可增加核内HMGB1与P65、HMGB1与P50的结合率（P＜0.01）,减少P50与P65的结合率。试验结果表明：SFI可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应;其作用途径可能是通过抑制HMGB1出核,竞争性结合P65和P50合,减少P65-P50二聚体的形成,进而抑制核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路的激活。     

人参皂苷Rg1对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的保护作用及其机制

本研究旨在探讨人参皂苷Rg1对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的保护作用及其机制.雄性ApoE-/-小鼠给予高脂饲料饲喂,建立动脉粥样硬化模型,造模结束后随机分组并给药.给药结束后,通过油红O染色观察小鼠主动脉动脉粥样硬化病变,并检测血清中TC、TG水平.免疫荧光检测主动脉斑块处促炎型巨噬细胞,We...     

核转录因子Relish的结构与功能研究进展

核转录因子Relish是NF-κBs超家族中的一员,是重要的免疫信号传导效应物.Relish的N端有保守的Rel同源结构域,C端有锚蛋白重复结构域.受到外界各种刺激时由Imd通路传导信号,诱导Relish发生磷酸化、切割和其他翻译后修饰.活化的Relish进入细胞核与DNA结合调控靶基因表达,帮助生物体适应各种生理环境和刺激,抵御外来病原体入侵和感染.本文对Relish的结构与功能作了简要综述.Relish的结构主要包括Rel同源结构域、锚蛋白重复结构域、核定位序列、caspase靶位点、富含丝氨酸区域、富含脯氨酸-谷氨酸-丝氨酸结构域;Relish的功能主要有参与先天免疫、调节神经发育和寿命、调控肠道稳态和形态、参与压力调节及调节其他生理活动.     

NF-κB与疾病的关系

随着分子生物学技术和生物信息学的发展 ,生命科学进入了后基因组时代 ,对转录因子NF κB的研究越来越受到重视 ,尤其是NF κB的活性与细胞的生长分化、炎症、免疫应答、肿瘤生长及病毒繁殖等生物学过程的关系 ,以及NF κB的活化过程与某些老年性和顽固性疾病的发生关系     

黑番茄冻干粉对小鼠辐射防护作用的研究

对黑番茄冻干粉的辐射防护作用进行探讨,同时对于其调控机制进行研究。60Coγ射线对ICR小鼠进行一次性全身照射5 Gy,黑番茄冻干粉1.5,3.0,4.5 g/(kg·d)-1干预14 d。对于胸腺指数、脾脏指数、WBC、骨髓有核细胞计数、脾淋巴细胞、细胞因子水平和I-κB和NF-κB表达情况进行测定。4.5 g/kg组胸腺指数有明显升高(P<0.05)。3.0 g/kg组的骨髓有核细胞数与辐射对照组相比具显著性升高(P<0.05),1.5 g/kg组的脾淋巴细胞转化与辐射对照组相比,有显著差异(P<0.01)。4.5 g/kg组能够减缓辐射诱导的血清IL-1α和IL-10的增高趋势(P<0.05)。肝脏MDA水平在辐照后表现出明显的升高(P<0.05),4.5 g/kg组,肝脏和血清GSH-Px水平均有显著的增高(P<0.05)。3.0 g/kg组与辐射对照组相比表现出明显的增高。而其他两组并没有表现出显著的变化(P>0.05)。黑番茄冻干粉有一定的辐射防护功效,其机制可能通过对于NF-κB与I-κB两个基因表达情况的调节,进而对于炎性因子的分泌和免疫器官产生调节作用。     

TRAF6表达与乳腺癌侵袭能力的关系

目的:探讨TRAF6在不同侵袭能力的乳腺癌组织及细胞系中的表达.方法:(1)应用免疫组化方法检测TRAF6在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达.(2)应用Western blotting方法检测TRAF6在高、低侵袭能力癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7及正常乳腺细胞系MCF-10A中的表达.结果:(1)正常乳腺组织中TRAF6的阳性表达率低于乳腺癌组织(P0.05),在导管原位癌的阳性表达率显著低于浸润性导管癌中(P0.01).(2)TRAF6蛋白在MCF-10A中的表达低于乳腺癌细胞系中的表达,MCF-7中的表达量低于MDA-MB-231中的表达量.结论:TRAF6蛋白表达量随着乳腺癌的侵袭能力的增加而增加,说明TRAF6可能与乳腺癌侵袭能力有关.     

氨磷汀对急性放射性肠炎小鼠NF-κB 通路和VCAM-1、ICAM-1基因表达的影响

目的:研究氨磷汀对急性放射性肠炎小鼠小肠组织中核转录因子kappaB(NF-κB)通路和血管间粘附分子-1(VCAM-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因表达的影响和意义.方法:将小鼠分成对照组、实验组、氨磷汀腹腔注射干预组,采用6Gy 60Coγ-射线全身辐射,于第1、7、14天分批处死小鼠观察病理改变.实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测不同时间点对照组、实验组和氨磷汀干预组NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA表达水平的变化.结果:辐射后实验组、干预组均可见明显黏膜下层微血管损伤,干预组损伤较实验组轻.辐射后第1天实验组、干预组小鼠小肠组织中NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA表达水平均显著升高(P0.05),干预组升高水平显著低于实验组(P0.05);第7天实验组各基因mRNA水平均呈下降趋势但仍高于对照组(P0.05),干预组达到或接近对照组水平;第14天实验组、干预组各基因mRNA表达水平与对照组比较无统计学差异(P0.05).结论:急性放射性肠炎早期即发生NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA的表达上调,可能在辐射后微血管损伤中发挥作用,氨磷汀可能通过下调上述基因表达对微血管起到保护作用.     

山香圆总黄酮对慢性咽炎模型大鼠 NF-κB、IκBα表达的影响

以2.5%氨水喷咽部建立大鼠慢性咽炎模型,用HE染色法观察咽部病理形态学改变,用ELISA法检测血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6,用RT-qPCR测定咽部组织NF-κBp65mRNA的表达,用Western blot检测咽部组织NF-κBp65和IκBα蛋白的表达,探讨山香圆总黄酮对慢性咽炎模型大鼠 NF-κB、IκBα表达的影响.结果显示:山香圆总黄酮能明显改善模型大鼠咽部病理形态学; 与模型组比较,山香圆总黄酮各组能不同程度地下调TNF-α、IL-1β、IL-6和NF-κBp65的表达并上调IκBα的表达,其中高剂量组最显著.这表明山香圆总黄酮能通过抑制NF-κB的表达和IκBα的解离下调炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,从而减轻炎症,发挥抗慢性咽炎作用.     

CXCL1在子宫内膜样腺癌中的表达及其对Ishikawa细胞增殖侵袭的影响

目的:研究趋化因子配体1 (CXCL1)在子宫内膜样腺癌中的表达及其对人子宫内膜高分化腺癌细胞株Ishikawa细胞增殖、凋亡、迁移能力及侵袭能力的影响,以及CXCL1因子与子宫内膜样腺癌的发生及浸润转移的关系.方法:免疫组化法检测CXCL1在子宫内膜样腺癌患者的子宫内膜组织子宫内膜非典型增生患者的子宫内膜组织及正常增生期子宫内膜组织中的表达,QRT-PCR法检测子宫内膜样腺癌组织与癌旁组织中CXCL1 mRNA的相对表达;体外运用siRNA沉默Ishikawa细胞中CXCL1的基因表达,分别通过CCK8法及流式细胞仪法检测沉默CXCL1对细胞增殖及凋亡的影响,划痕实验及transwell法检测对细胞迁移能力与侵袭能力的影响,Western Blot检测pNF-κB,MMP9及Caspase-3的蛋白表达.结果:免疫组化及QRT-PCR结果显示,子宫内膜样腺癌组织中CXCL1表达升高,有淋巴结转移、分期较晚及肿瘤直径较大的患者的子宫内膜组织中表达显著升高;在CXCL1沉默组中,细胞增殖、迁移能力及侵袭能力下降,凋亡率增加,凋亡蛋白Caspase-3表达升高,pNF-κB,MMP9蛋白表达降低(P0.05).结论:CXCL1在子宫内膜样腺癌组织中高表达,沉默CXCL1可能通过下调磷酸化NF-κB抑制Ishikawa细胞的增殖、迁移能力及侵袭能力,促进细胞凋亡.     

中等强度有氧运动通过抑制NF-κB通路过度激活影响4 T1乳腺癌小鼠肿瘤生长研究

观察中等强度有氧运动对原位移植4T1乳腺癌小鼠模型肿瘤生长的影响,并探讨其相关机制.40只雌性6周龄Balb/C小鼠被随机分为正常对照组(NC,n=10)和运动对照组(NCE,n=10),肿瘤模型组(TC,n=10)及模型运动组(TCE,n=10).TC,TCE组小鼠接种4T1细胞.其中NCE,TCE组以10 m/mi...     

NF-κB相互作用多肽原核表达载体的构建、表达与纯化

为了获得高纯度的可溶性NF-κB相互作用多肽,首先以酵母双杂交技术筛选获得的NF-κB相互作用多肽的酵母表达质粒pGAD GH/pp10为模板,扩增多肽基因片段,后经BglⅡ,StuⅠ双酶切后连接到pET-42a(+)载体中,构建GST/多肽融合蛋白的原核表达载体,并将GST/多肽融合蛋白的原核表达载体转化入BL-21菌株,用0.4 mmol/L IPTG于30 ℃诱导表达4 h,后经GST亲和纯化GST/多肽融合蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定融合蛋白的表达和纯度.实验结果表明,成功地构建了NF-κB相互作用多肽的GST/多肽融合蛋白原核表达载体,进行了GST/多肽融合蛋白的诱导表达,融合蛋白的表达为可溶性表达,最终纯化获得纯度约为80%的可溶性GST/多肽融合蛋白,这将为后继利用GST pull-down,Bio-sensor,EMSA等实验进一步验证NF-κB相互作用多肽的功能提供可靠的材料来源奠定基础.     

FFA对巨噬细胞UCP2蛋白的影响

为检测游离脂肪酸对巨噬细胞解耦连蛋白2的影响,探讨肥胖与巨噬细胞解耦连的关系。采用培养RAW264.7巨噬细胞,分为空白对照组(基础培养液)、FFA组(基础培养液中加入FFA,终浓度为100μmol/L)和京尼平组(基础培养液中加入京尼平,终浓度为10μmol/L)。用Western blot的方法检测药物干预后UCP2与NF-κB磷酸化的表达水平。结果显示,与空白对照组相比,FFA作用于巨噬细胞24h后细胞内UCP2与NF-κB磷酸化水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);而京尼平作用于巨噬细胞24h后细胞内UCP2与NF-κB磷酸化水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。由此可知,FFA能诱导巨噬细胞的线粒体发生解耦连,NF-κB磷酸化水平升高。     

NF-κB信号通路研究进展

转录因子NF-κB作为一个标准的可诱导的转录因子已经超过20年了。众多的可激活NF-κB的刺激,以及大量的受NF-κB调节的基因,确保了这一转录因子仍然是研究热点。在这里,我试图总结一下从这些NF-κB的研究中所浮现出的一些基本规律,并希望能找出一个较统一的关于NF-κB调节的观点。     

细胞凋亡与NF-κB激活的信号传导研究

细胞凋亡是细胞受基因调控的主动死亡方式,对于生物体的正常发育及生理功能的维持具有重要意义。NF-κB是一类在动物细胞中广泛表达的转录因子,其主要生理功能之一是通过诱导凋亡抑制基因的转录,拮抗细胞凋亡的发生。NF-κB的活化调控是细胞生死抉择过程的关键机制之一。现已证明细胞凋亡及NF-κB活化的异常会导致多种人类疾病。本项目从凋亡的执行机制和调控机制两方面入手,对细胞凋亡的机理进行了研究。建立了基于爪蟾卵细胞提取物的非细胞凋亡诱导体系,并利用这一体系,发现爪蟾细胞凋亡特异核酸酶XAD及其特异性的抑制因子IXAD;首次证明磷酸肌酸和核质素在凋亡过程中的作用。克隆了3个新的凋亡诱导基因。在细胞凋亡的调节机制方面,克隆了7个分别作用于NF-κB活化信号通路不同步骤的新的调节基因,发现5个已知蛋白调节不同NF-κB活化途径的新功能。此外,在国际上较早开展了植物细胞凋亡的研究,首次报道体外培养植物细胞凋亡过程中有细胞色素C的释放。     

UBE2W抑制TNFα诱导的NF-κB转录活性

UBE2W(ubiquitin-conjugating enzyme E2W)是一新的泛素结合酶,关于其功能研究甚少。采用双荧光报告系统和Western blot等方法,分别干涉和过表达UBE2W,分析UBE2W对TNF(刺激下NF-(B转录活性的影响。结果显示UBE2W能够显著抑制TNFα诱导的NF-κB的转录活性,提示该基因可能参与NF-κB相关功能的调控。     

吸烟对大鼠心脏组织中PKC-α和NF-κB表达的影响

目的:研究吸烟对大鼠心脏组织中PKC-α和NF-κB表达的影响.方法:用Western blot检测对照组和吸烟大鼠心脏组织中PKC-α和NF-κB表达水平.结果:吸烟1、2、3个月后大鼠心脏组织中PKC-α和NF-κB的表达与对照组比较差异有统计学意义,而且表达水平逐渐增高(P<0.05).结论:吸烟可能通过增加PKC-α和NF-κB的表达参与对心脏的损害.