根癌农杆菌介导的盐生杜氏藻DsNRT2基因转化紫花苜蓿的初步研究

利用根癌农杆菌介导法进行紫花苜蓿遗传转化研究.将从抗逆生物盐生杜氏藻中克隆得到的DsNRT2(码硝酸盐转运蛋白)导入紫花苜蓿"中苜一号"中,在含50 mg/L的卡那霉素的培养基上获得再生苗35株,经PCR和Southern杂交鉴定,得到7株阳性苗,表明DsNRT2基因已整合到苜蓿的基因组中.     

根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化小麦

利用根癌农杆菌对 3种基因型小麦进行了转化研究 .发现基因型对转化有明显影响 .将小麦品种烟优 36 1、烟 10 3、核生 3号的胚性愈伤组织用含报告基因NPTⅡ和抗盐基因Na H 反向转运AtNHX1的农杆菌菌株pROK2AT GV310 1感染和共培养后 ,用巴龙霉素 5 0 - 15 0mg L筛选抗性愈伤组织及转化植株 .对抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异引物进行PCR检测 ,目的基因的PCR阳性频率为 1.3(烟 10 3)和 2 .9% (核生 3号 ) .Southern杂交证实外源基因已经整合到小麦的基因组中     

农杆菌介导的Bt基因转化马铃薯的研究

马铃薯块茎蛾的危害极为严重,通过植物基因工程将Bt基因的Cry1Ab类型导入马铃薯,以期获得抗虫性提高的马铃薯基因工程植株.以马铃薯品种‘会-2’为受体材料,对影响转化效率的因素进行了优化,结果表明:3号(1/2MSO+50μLAs+2 mL农杆菌悬浮液)浸染液有利于抗性芽的分化,乙酰丁香酮可以提高叶片的转化率,共培养3 d的分化率较高.共获得经过卡那霉素筛选的114个转化植株,对初筛株系进行PCR分子鉴定,结果有55%的植株扩增出目的条带,初步证明Cry1Ab基因已整合到马铃薯的基因组中.转化植株的抗虫性鉴定正在进行中.     

根癌农杆菌介导大麦Mlo反义基因转化小麦

应用含有大麦Mlo反义基因表达载体的根癌农杆菌菌株Agl Ⅰ，对3种基因型小麦(核生3号、烟优361、扬麦158)的愈伤组织进行了转化．从其中2种基因型获得23株转基因植株，有2株是白化苗，转化频率分别为1．9％(核生3号)和2．8％(扬麦158)．PCR及Southem分析表明，外源基因已整合进植物基因组．实验结果表明，筛选压力的存在对转基因植株的获得至关重要，在无筛选压力下未获得转基因植株．7棵转基因植株移栽至大田后正常结实．     

影响农杆菌介导的辣椒基因转化因素的研究

试验设置农杆菌类型、辣椒基因型、外植体、vir基因活化培养基、方法5个因素，研究了利用根癌农杆菌介导法辣椒遗传转化的效果。以获得Km抗性芽外植体频率为指标，发现农杆菌菌株类型和辣椒基因型对转化效率都有较大影响，直接影响着转化效率。采用预培养2d的子叶外植体，用农杆菌侵染5～7min，可获得最高的转化效率。     

影响根癌农杆菌介导的香蕉基因转化早期的主要因素

用含质粒载体pCAMBIA2301的根癌农杆菌（Agrobacterium inoculation）转化“641”香蕉（Musa AAA Cavendish subgroup cv.64-1）的薄片外植体，通过测定GUS基因瞬时表达率，对转化早期的主要影响因素进行了研究。结果表明：农杆菌EHA105较适合于介导转化，将薄片置于固体高渗培养基上培养4h后，通过真空减压法使农杆菌接种于其上，获得了较高的瞬时表达率（41.67%），是对照（8.33%）的5倍，农杆菌悬液稀释5倍用于转化较好，共培养3d为宜，薄片外植体越靠近根部，瞬时表达率越高。而外植体预培养会降低瞬时表达率。     

农杆菌介导的白芥防御素基因对甘蓝型油菜的转化

通过根癌农杆菌介导将正向和反向插入白芥防御素基因的pBI121重组质粒转入甘蓝型油菜的下胚轴,经组织培养和抗性筛选获得再生植株. PCR检测后,初步鉴定为阳性植株.     

利用农杆菌介导法将抗虫基因导入油菜的研究

以油菜的子叶柄作为转化的受体材料,经农杆菌感染和共培养,在含卡那霉素的筛选培养上诱导产了大量的不定芽,经生根培养,获得了再生植株,通过PCR扩增和基因组Southern杂交分析,证明其中5株为转基因植株,对转基因植株进行抗虫性检测,有2株表现出较好的抗虫性。     

农杆菌介导Barnase基因转化番茄

以雄性不育基因barnase作为目的的基因、抗除草剂溴苯腈的bxn基因作为选择标记基因，利用下胚轴和子叶做外植体与农杆菌共培养方法，在番茄的两个品种佳粉1号和佳粉15号中，分别获得38和15株溴苯腈的抗性株，PCR检测结果表明，抗生株含barnase基因，且抗性株的花粉完全丧失活力，证实所得的溴苯腈抗性株为转Barnase基因番茄。     

农杆菌介导的中国水仙遗传转化体系的建立

利用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入中国水仙,组织化学法检测转化后共培养3d的水仙鳞茎盘组织块,GUS基因瞬时表达很好,90％以上的材料呈现大面积的蓝色斑块,取筛选培养20d的材料检测GUS基因的稳定表达,约1％的组织块有蓝色反应。水仙预培养10d后转化,转化前在菌液中加入60μmol/L AS活化2－3h,转化率提高了两倍以上。转化材料在MS＋BA10＋NAA0．2＋Cef300＋Gyg30培养基上培养20d左右分化出小鳞芽,频率约为60％,组织块平均出芽5．7个,最多可达14个,小鳞芽10d后长成小鳞茎。     

根癌农杆菌介导苜蓿体胚转化及转基因植株再生

用含质粒载体pCAMBIA2301(带有受CaMV35S启动子调控的GUS基因和nptⅡ基因)的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens转化晋南苜蓿Medicago sativa L.cv.Jinnan的体胚组织,发现负压处理有利于提高转化频率(可达35%),3批共158个体胚切块的转化实验共获得具有卡那霉素抗性的再生植株15株,经组织化学染色和分子检测,证实GUS基因已整合到转化植株基因组中,在芽、叶片、叶柄和根等组织中均有表达,并在土壤栽培过程中保持稳定的表达.     

农杆菌介导AtPCS1基因转化苜蓿

利用RT—PCR扩增拟南芥螯合肽合成酶（AtPCS1）基因全序列．进一步构建AtPCS1的植物表达载体pBI121-AtPCS1,转化农杆菌EHA105;然后用转化的农杆菌EHA105以叶盘法侵染苜蓿甘农一号叶片,在50mg／LKan的筛选压下,经过约80-100d的筛选,获得57棵再生苗．随机取其中9棵再生苗进行PCR检测,其中6棵为阳性．初步鉴定表明AtPCS1基因已整合到苜蓿基因组中．     

农杆菌介导的AtPCS1基因转化陇东苜蓿的初步研究

利用植物表达载体pBI121-AtPCS1转化农杆菌LBA4404,经菌落PCR鉴定获得阳性菌,利用叶盘法以重组的农杆菌侵染陇东苜蓿的子叶.采用GUS组织化学染色和对部分转基因再生植株进行PCR鉴定,初步结果表明AtPCS1基因已成功整合到苜蓿基因组.     

苜蓿乙硫氨酸抗性变异细胞系的筛选

用经返地卫星搭载诱变处理的豆科牧草紫花苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）干种子种植后长出的花序为外植体诱导愈伤组织,以Ｌ－乙硫氨酸为筛选剂,通过多步正筛选途径获得了苜蓿乙硫氨酸抗性细胞系ＭＥ＾ｒＢ,ＭＥ＾ｒＢ在脱离选择压力９个月后,其对Ｌ－乙硫氨酸的抗性Ｉ＾５０（生长量半抑制时的Ｌ－乙硫氨酸浓度）比野生型高１４．２倍,表明抗性系抗性表达稳定。抗性系还表现出对ＤＬ－甲硫氨酸的交叉抗性和对天     

苜蓿乙硫氨酸抗性变异细胞系的筛选及特性分析

用经返地卫星搭载诱变处理豆科牧草紫花苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）干种子种植后长出的花序为外植体诱导愈伤组织,以Ｌ－乙硫氨酸为筛选剂,通过多步正筛选途径获得了苜蓿乙硫氨酸抗性细胞系ＭＥ＾ｒＢ．ＭＥ＾ｒＢ在脱离选择压９个月后,其对Ｌ－乙硫氨酸的抗性Ｉ５０（生长量半抑制时的Ｌ－乙硫氨酸浓度）比野生型高１４．２倍,表明抗性系抗笥表达稳定。抗性系还表现出对ＤＬ－甲硫氨酸的交叉抗性和对于冬氨酸     

苜蓿不同品种愈伤组织诱导、分化和再生能力的比较研究

以新疆大叶、甘农1号、甘农3号和陇东4个苜蓿品种的下胚轴、子叶和子叶节为外植体,比较了不同苜蓿品种及外植体愈伤组织诱导、分化及再生能力的差异,研究了不同浓度及配比的植物生长调节物质对愈伤组织诱导和芽分化再生的影响。结果表明,4个苜蓿品种再生能力依次为新疆大叶>甘农3号>甘农1号>陇东苜蓿,下胚轴外植体在愈伤诱导培养基(MS 2mg/L2,4-D 0.2mg/LZT)上出愈率分别为94%,83%,71%和58%,胚性愈伤组织在分化培养基(MS 0.2mg/LZT 50mg/L谷氨酰胺)上分化率分别为15.8%,9.2%,7.1%和4.5%;下胚轴再生能力优于子叶节和子叶;丛生芽在生根培养基(1/2MS)上生成完整的根;各品种的再生苜蓿植株均成功移栽到土壤中,成活率100%。上述4个苜蓿品种分化再生能力的阶段性研究结果为今后通过基因工程方法改良苜蓿奠定了基础。     

影响根癌农杆菌转化水稻频率的因素研究

根癌农杆菌与来自水稻成熟种子的愈伤组织共培养,将外源基因导入水稻愈伤组织,并获得了转基因植株．通过比较影响根癌农杆菌转化频率的各种因素,表明在转化过程中酚类化合物和单糖的加入使农杆菌的转化频率提高了０．９％～１７．４％．在共培养时农杆菌的稀释方式也是影响农杆菌转化频率的重要因素     

不同紫花苜蓿栽培品种生物能源性状评价

选取了54个苜蓿品种,采用温室盆栽方法进行两次刈割,对产草量、细胞壁成分(纤维素、半纤维素和木质素)质量分数、株高、分枝数和叶茎比等生物学性状进行了方差分析和聚类分析.结果表明:苜蓿品种间产草量和细胞壁各成分质量分数存在显著差异(P＜0.01),且品种内变异大于品种间变异;产草量和细胞壁成分变异系数由大到小的顺序为:产草量(42.42％)＞木质素质量分数(17.22％)＞纤维素质量分数(12.74％)＞半纤维素质量分数(10.04％);刈割处理显著降低了半纤维素质量分数(P ＜0.01),但产草量、纤维素和木质素没有显著变化;根据产量、株高、细胞壁成分等性状将供试苜蓿品种分为五个大类,其中第Ⅱ类群和第V类群生产性能最高,且第Ⅴ类群表现出良好的再生性能;综合评价提出甘农3号、黄羊镇、和阗、WL903、三得利、大郁山、平凉和意大利作为进一步开展生物质能源性状选育的优良种质材料.