龚氏生物反应堆_创建与应用

龚氏重组成的生物反应堆(以下简称为GRB)是用转交法将克隆成的供体DNA转入受体创建而成的.基因表达表明这一生物反应堆能耐高剂量盐(NaCl3.2M)、抗生素(四环素Te100μg/ml和三甲氧苄二氨嘧啶Trim 50μg/ml)以及毒素(铃兰氨酸Azet 100μg/ml).这一生物反应堆的后代对盐、抗生素和毒素保持同样高的耐力.这表明这一生物反应堆的耐力能代代相传.在波士顿、旧金山.深圳和青岛的海水加Te(100μg/ml)的条件下,它能生长;在深圳或青岛海水加Te(200μg/ml),矿物质和碳源的条件下,也能迅速增殖(干物质1.6mg/ml/24hrs);蛋白质产量为0.59mg/ml,胞外多糖为0.26mg/ml.     

双水相-超高效液相色谱串联质谱法测定猪肉中17种抗生素

为了解上海地区市售猪肉中抗生素残留水平，对猪肉中抗生素的分析方法进行了筛选与优化。选择双水相方法，对提取液和分相盐进行了筛选优化，建立了猪肉中5类17种典型抗生素的分析方法，并检测了上海地区市售猪肉中抗生素的残留水平。结果表明：采用双水相结合超高效液相色谱串联质谱法，选择质量分数为0.2%的甲酸-乙腈/乙二胺四乙酸二钠(Na₂-EDTA)作为提取溶剂，(NH₄)₂SO₄作为分相盐时，17种目标抗生素的加标回收率最佳，回收率为65.3%～129.7%,相对标准偏差小于12.6%,检出限和定量限分别为0.04～5.51μg/L和0.14～18.35μg/L;上海地区市售猪肉样品均未检出17种抗生素。研究表明，该分析方法能满足猪肉样品中痕量抗生素的检测残留要求，且具有选择性好、灵敏度高的优点，适合猪肉中17种抗生素的残留检测。     

示波极谱法测定黄芪中铜、锌和秦皮中铅、镉

用二阶导数极谱法测定黄芪中铜、锌和秦皮中铅、镉.在0.01 mol/LHCl、0.04%KSCN底液曾,铜、锌峰电位分别为-0.42 V、-1.03 V(Vs.SCE);在pH=4.5的HAc-NaAc缓冲溶液、氯化钾、酒石酸钠、三乙醇胺、明胶混合底液中,铅、镉峰电位分别为-0.46 V、-0.6 4 V(Vs.SCE).铜、锌、铅、镉的线性范围分别为0.01～8.00μg/ml、0.01～10.0 μg/ml、0.01～10μg/ml和0.05～6μg/ml,检出限分别为0.005 μg/ml、0.010μg/ml、0.020μg/ml和0.015 tμg/ml.该方法用于黄芪、秦皮中上述元素的测定,方法准确、简便、快速、灵敏度高.     

两种新型的生化保健制品

报道了两种新型生化保健制品的制备及其营养特性.881-制品(儿铁晶)是富含天然铁营养素和动物蛋白的保健食品.营养成分和氨基酸组成分析表明:该制品含有17种氨基酸(色氨酸未测)和7种人体必需氨基酸.总氮量27300μg/g,铁194.0μ/g,钙862.1μg/g,锌31.9μg/g,铜0.35μg/g,而铅含量<0.13ppm,砷<0.07ppm,汞<0.03ppm.90天动物喂养试验及骨髓染色体畸变检查均未见异常变化,表明881-制品是一种防治营养缺铁性贫血症的理想保健制品.882-健身宝制剂是含有新鲜猪脾脏的生物化学抽提物.生物化学分析表明总含氮量3300μg/ml,肽含量624μg/ml,RNA44μg/ml,DNA86μg/ml,铁1.35μg/ml,钙6.30μg/ml,锌1.55μg/ml,铜0.07μg/ml,含铅量<0.07ppm,砷<0.02ppm,汞<0.05ppm.结果提示,882制剂是一种增进机体免疫功能的保健食品.     

PRIME-HLB固相萃取/超高效液相色谱-串联质谱法同时快速检测粮食中4种真菌毒素的含量

建立了超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法同时快速检测粮食中呕吐毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素B_1的方法.样品经乙腈-水混合液(体积比84∶16)振荡提取20 min,乙腈饱和正己烷除脂,经PRIME-HLB小柱净化,氮吹浓缩后定容.质谱采用电喷雾正、负离子模式并选择多反应监测方式采集数据,外标法定量.方法的定量限(3S/N):呕吐毒素20.0μg/kg、赭曲霉毒素A 1.0μg/kg、玉米赤霉烯酮5.0μg/kg及黄曲霉毒素B_1 0.2μg/kg.用该方法检测小麦、玉米、大米和高粱等试样,4种真菌毒素的加标回收率介于75.5%～98.6%之间,相对标准偏差不大于6.6%(n=6).     

阿尔泰藜芦生物碱Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对癌细胞DNA合成的影响

用体外细胞培养~3H—TbR 参入法,培育12、24、36和48h,阿尔泰黎芦(Veratrum lodelianum Bernh)碱Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ能抑制小鼠 S180和腹水型肝癌细胞 DNA 的合成.三种生物碱对腹水型肝癌细胞DNA 合成的抑制均比 S180的高.对腹水型肝癌细胞 DNA 合成 ID50依次为66μg/ml,66μg/ml 和56μg/ml.它们对癌细胞 DNA 合成的抑制机理,似均为 DNA 模板损伤型.     

微囊藻毒素对澳洲水泡螺的毒性效应

用梯度浓度的微囊藻毒素(6.7μg/L、26.7μg/L、66.7μg/L、166.7μg/L、333.8μg/L、1 335.2μg/L)和人工培养的有毒铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa7806)对澳洲水泡螺(Bulinus australinanus)分别进行急性和亚慢性毒性暴露,观察对螺的毒性效应.急性毒性实验结果表明,澳洲水泡螺对微囊藻毒素有很强的耐受力,试验期间(5 d)未发现螺中毒死亡情况,甚至当微囊藻毒素高达1 335.2μg/L时,仍无死亡.亚慢性口服毒性实验结果发现,澳洲水泡螺可以取食微囊藻,但不能消化;微囊藻严重影响螺生长、繁殖等生理活动,微囊藻的长期喂食暴露会使螺因饥饿或染病而死亡.     

抗癌药物长春新碱的微核效应

测定了长春新碱对蚕豆根尖细胞微核千分率的影响,结果在25～50μg/ml浓度下未见增加,但在100～200μg/ml下微核千分率明显增加到14.4～16.4μg/ml(p＜0.05～0.01),这提示长春新碱对细胞有一定的诱变作用,有必要对其遗传毒性进行多角度的研究.     

轻度脑损伤早期S-100蛋白及S-100mRNA的水平变化

目的　探讨轻度脑损伤早期血清和脑脊液中S 100蛋白(S 100),脑组织中S 100mRNA水平的变化.方法采用雄性SD大鼠应用改良Feeney's方法制造模型,应用聚合酶链反应和酶免疫法动态观察S 100蛋白及其S 100mRNA的变化.结果　模型建立后血液中S 100蛋白12,48h分别为(0.825±0.171)μg/L和(1.43±0.082)μg/L,脑脊液中S 100蛋白12,48h分别为(1.21±0.175)μg/L和(1.43±0.082)μg/L,脑组织中S 100mRNA相对灰度值12,48h分别为(25.0±2.6)和(31.4±3.4),与对照组比较都有明显增加(P<0.05).结论　S 100能作为轻度脑损伤的标志物,在损伤后12～48h取样本比较合适.     

异三尖杉酯碱和天然高三尖杉酯碱对人体淋巴细胞染色体诱变作用的研究

本文用姊妹染色单体分化技术检测了合成的异三尖杉酯碱(IH)和天然高三尖杉酯碱(HHN)诱发人体淋巴细胞姊妹染色单体交换的能力,以及剂量与效应之间的关系.结果表明:IH 在0.02—10μg/ml 范围内,HIH 在0.02—10μg/ml 范围內,HHN 在2×10~(-4)—0.64μg/ml 范围内,均可诱发人体淋巴细胞姊妹染色单体交换增高.而且剂量与效应呈正相关.     

抗生素对小麦根际优势微生物生长的影响

研究了小麦根际6株优势菌,包括4株细菌(B1,B2,B3,B4)和2株放线菌(F1,F2)对常用饲料用抗生素金霉素(CTC)和青霉素(PNC)的敏感性.在两种抗生素浓度分别为0μg.L-1,10μg.L-1,100μg.L-1,500μg.L-1,1 000μg.L-1的液体培养基中,6株菌的生长情况有较大差异:其中B1和F1在1 000μg.L-1的金霉素浓度下能正常生长,而B4和F2分别在100μg.L-1和500μg.L-1的金霉素浓度下生长完全受到抑制;另外,B3在1 000μg.L-1青霉素浓度下生长情况良好,而F1,F2和B4在青霉素环境中的生长受到明显抑制.     

禽病消对禽多杀性巴氏杆菌的体外抑菌试验

本试验应用体外抑菌试验的试管法对复方敌菌净、喹乙醇单方和两药复方(禽病消)对禽多杀性巴氏杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)进行了测定.单方时复方敌菌净和喹乙醇的MIC分别为48μg/ml和6μg/ml,MBC分别为120μg/ml和15μg/ml,复方制剂(禽病消)中的复方敌菌净和喹乙醇的MIC分别为3.84μg/ml和0.84μg/ml,MBC分别为24μg/ml和3μg/ml,FIC指数为0.16,禽病消对禽多杀性巴氏杆菌的抗菌作用较复方敌菌净、喹乙醇两药单独应用时增强了12.5—32倍,结果说明:复方敌菌冷与喹乙醇联合应用具有明显的协同作用,禽病消组方合理,是防治禽巴氏杆菌病的有效复方新制剂.     

遗传毒物对秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)寿命的影响

研究了丝裂霉素C,噻替哌和环磷酰胺对秀丽隐杆线虫(C.elegans)温度敏感突变型DH26衰老的影响。结果表明,除极高浓度(100μg/ml)的丝裂霉素C能缩短线虫寿命外,其余对寿命均无影响。     

DAB389-Linker-LHRH重组毒素的构建及生物活性的初步测定

采用基因工程方法,将白喉毒素的毒性部分(DAB389)通过柔性连接肽(Linker)与促黄体激素释放素(LHRH)基因连接起来,克隆到高效表达载体pET28a( )中,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白(DAB389-Linker-LHRH).通过三步层析纯化目的蛋白,获得了纯度达95%的重组毒素DAB389-Linker-LHRH.用MTT法检测其对过度表达LHRH受体的人宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,探讨其对HeLa细胞的特异杀伤情况.实验结果显示DAB389-Linker-LHRH对HeLa细胞具有很强的生长抑制作用,其IC50为12.93μg/mL.表明该免疫重组毒素在体外对人宫颈癌HeLa细胞具有明显的杀伤作用,为进一步研制对宫颈癌有特异治疗作用的靶向抗癌药物奠定了基础.     

枯草杆菌启动基因在大肠杆菌中的克隆和表达

以大肠杆菌启动基因选择载体pHE5为载体,枯草杆菌染色体DNA为供体,克隆了一批启动基因功能片段,带克隆片段的重组质粒在大肠杆菌中表现不同的四环素抗性水平,其中50%在100μg/ml以上,12%达到200μg/ml。对其中一个转化子进行质粒检测和分析,获得一个重组质粒pHE273,经酶切分析证明,克隆的强启动基因位于2.2kb的EcoRI-HindⅢ片段上。     

光照对考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度影响的研究

通过考马斯亮蓝法测定在不同光照和孵育时间下对已知不同浓度的牛血清蛋白的影响.结果显示,在0~100μg/ml蛋白质浓度标准曲线测定范围内,黑暗环境测定蛋白质误差率最小.在黑暗和弱光条件下高浓度蛋白质组(50~75μg/ml)误差率最低显著低于低浓度蛋白质组(5~25μg/ml).在黑暗和弱光条件下浓度在50~75μg/ml范围内的蛋白质与染料孵育30 min以内时误差率较低且较稳定.因此,采用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度时,环境光照、待测样品浓度以及染料与蛋白质孵育时间等是决定实验结果准确性的重要因子.     

液相色谱-串联质谱法检测水中痕量微囊藻毒素-LR和微囊藻毒素-RR

建立直接进样测定饮用水和水源水中的微囊藻毒素(MC-RR、MC-LR)的液相色谱-质谱分析方法。水样过0.22,μm PTFE滤膜,用Waters Xevo TQD超高效液相色谱串联质谱仪分析检测,采用色谱柱Waters BEH C81.7,μm、2.1,mm×50,mm进行分离。采用电喷雾电离正离子模式(ESI+),以外标法定量分析。MC-RR的浓度在0.1~2.0,μg/L,MC-LR的浓度在0.5~10.0,μg/L范围时,它们的线性关系r≥0.999,0。微囊藻毒素-LR、微囊藻毒素-RR在水中进行高、中、低3个水平的添加,各组分相对标准偏差(RSD)为4.18%,~8.69%,,平均回收率在82%,~91%,之间,最低检测下限(LOD)MC-RR为0.04μg/L,MC-LR为0.09,μg/L。此方法简便、快捷、准确,具有较好的实用价值。     

高效液相色谱法计量奶山羊粪中的植物激素

建立了高效液相色谱法计量奶山羊粪便中赤霉酸(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)和玉米素(Z)4种植物激素的方法.运用Hypersil-ODS C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,计量GA3I,AA,ABA的流动相为乙腈+磷酸;计量Z的流动相为乙腈+三乙胺;柱温35℃,GA3和IAA计量波长为208 nm,ABA为262 nm,Z为270 nm,流速1ml/min.计量结果表明,在此实验条件下能使奶山羊粪中GA3I,AA,ABA和Z 4种植物激素得到较好的分离,含量分别为6.483624μg/g,1.404628μg/g,0.1692108μg/g,0.340468 ng/g.     

家蚕(Bombyx mori)基因文库的建立和鉴定

组建家蚕Bombyx mori品种754和东肥的基因文库.用cosmid 质粒pHC 79在BamH1和Pst1位点进行休外重组和包装,转导至E.coli 受体菌HB101中,获得10~7以上的重组体克隆,统计分析表明库内已包括了将近100%的家蚕基因组的遗传信息.试验分析了包装混合物BHB2688/BHB2690体外连接的家蚕/载体DNA 的比值以及家蚕总DNA 酶解程度对重组建库的影响,使建库效率达到10~6—10~7CFU/μg 载体DNA,双抗值低至5%以下.在对基因文库进行鉴定时发现了克隆的家蚕DNA 片段对HB101的leu pro 基因突变的互补(校正)效应,频率为10~(-5).     

固相萃取-液相色谱法分析环境水样中有机磷农药残留

提出环境水样中有机磷农药残留的固相萃取-液相色谱分析方法.水样用0.22μm水系膜过滤两次,C18固相萃取小柱分离富集,用乙腈洗脱目标物,洗脱液直接进行液相色谱分析.结果显示,工作曲线范围分别为甲基对硫磷2.0～80μg/L、杀螟硫磷3.0～80μg/L、对硫磷3.0～100μg/L、辛硫磷5.0～100μg/L、检测限(LOD)分别为甲基对硫磷0.11μg/L、杀螟硫磷0.52μg/L、对硫磷0.45μg/L、辛硫磷0.85μg/L.加标回收率在84.2％～102.2％范围内.该方法操作简单、快速、低成本、高回收率、富集效果好,适合于环境水样中有机磷农药残留的分析检测.