核酸酶P1的纯化和酶学性质研究

桔青霉发酵液通过硫酸铵分级沉淀、凝胶层析和离子交换纤维素层析等生化分离步骤，得到的核酸酶P1比活力为711U/mg，纯化倍数1500。纯化的酶蛋白纯品经SDS－聚丙烯酰胺电泳，呈现一条单带。该酶催化反应的最适pH范围为6－8，最适温度在70℃，在60℃以下时酶活较为稳定，锌离子对此酶有明显的激活作用，而铜离子具有明显的抑制作用。     

壳聚糖提取动物胰脏中胰酶的工艺研究

工业上生产胰酶主要采用乙醇沉淀法、丙酮沉淀法，这两种方法有很多缺点，如酶活低、生产成本高等。针对这些特点，设计出以壳聚糖为絮凝剂，沉淀分离动物胰脏中胰酶的新工艺。通过试验。确定了包括提取温度、时间、壳聚糖的浓度、溶液pH等工艺参数。结果表明，这种方法具有很高的实用价值。     

五种医用酶的硫酸按分级分离研究

采用硫酸铵分级沉淀法从一种兔肌匀浆上清中分步分离出醛缩酶、乳酸脱氢酶、丙酮酸激酶、肌酸激酶和磷酸甘油醛脱氢酶等五种医用酶。该法步骤简单、分离周期短、酶活回收率高、具有较大的实用价值。     

五种医用酶的硫酸铵分级分离研究

采用硫酸铵分级沉淀法从一种兔肌匀浆上清中分步分离出醛缩酶、乳酸脱氢酶、丙酮酸激酶、肌酸激酶和磷酸甘油醛脱氢酶等五种医用酶。该法步骤简单、分离周期短、酶活回收率高、具有较大的实用价值。     

猪心肌乳酸脱氢酶的提纯工艺及酶反应最适条件

研究了适合于工业化生产的猪心肌乳酸脱氢酶的初步提取工艺，经硫酸铵分级沉淀得到酶的比活为86．5U／mg，再经DEAE离子交换层析比活可达525．0U／mg，酶活总收率为54．5％．并对酶促反应的最适条件进行了研究，其最适反应pH为7．6～7．8，最适反应底物浓度分别为NADH5mg／mL和丙酮酸钠25mmol／L。     

川西獐牙菜有效成分的分离及其抑菌活性测定

用常规实验和层析方法从川西獐牙莱中提取分离得到1，8二羟基-3，7二甲氧基San酮。经对七种细菌进行抑菌实验，结果表明，该物质具有抑菌生物活性，尤其对大肠杆菌的抑菌作用较强。     

硅胶柱层析粗提尿激酶的方法与分析

采用40—60目氧化硅胶作吸附剂,通过色谱层析和硫酸铵盐析分离提取了尿激酶(UK),并对粗品中酶的活力进行了测定,为45IU/ml,同时对蛋白质组分进行了SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析。电泳结果显示11条区带,其中1～2条着色较深的区带与标准尿激酶(比活13万/mg蛋白)的区带的迁移率基本相同。表明选用40—60目硅胶粗提尿激酶具有较好的吸附和分离效果。     

诺卡氏菌株82β－淀粉酶的部分纯化及其性质研究

诺卡氏菌株８２（Ｎｏｃａｒｄｉａｓｐ．８２）可产生一种β一淀粉酶，经５０％硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ一纤维素离子交换层析，将其纯化２１倍。该酶在６０℃，ｐＨ７．０条件下酶活最高；１００℃处理３０ｍｉｎ仍具有４０％的最初酶活力。     

“绿叶中色素的提取和分离”探究教学案例

以人教版实验“绿叶中色素的提取和分离”为例,引导学生探究不同实验材料、不同提取方法和不同层析液对实验结果的影响. 结果表明：最佳的实验材料为菠菜和芹菜的搭配,最佳层析液为93#汽油,最佳提取方法是体积分数95%乙醇沸水浴提取. 本实验在注重培养学生实验操作技能的同时,也注重培养学生发现问题、解决问题的能力和探究意识.     

细胞用胰蛋白酶制备的新工艺研究

用新鲜牛胰脏,采用盐析、层析、超滤方法对胰蛋白酶的提取和纯化工艺进行优化,探索一套胰蛋白酶制备的新工艺.结果表明:此工艺比传统工艺的操作相对简单,周期短,只需一星期;酶比活和收率比传统工艺高,酶比活可达2 368.5 BAEE/mg,收率为0.48%.可为细胞用胰蛋白酶的产业化生产提供一定的理论和实验依据.     

猪肺血管紧张素转化酶分离纯化的工艺优化

血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme, ACE)存在于生物体组织和血液中,并在血压调控方面发挥着重要作用,高效分离纯化ACE对研究其结构和功能具有重要意义。文中将猪肺匀浆液进行酶解处理,优化浆液比、盐析初始蛋白浓度等条件,并经盐析、透析和离子交换层析等步骤,得到高活性的ACE。当猪肺以1：3浆液比匀浆并经胰蛋白酶处理1 h后,其总酶活可增加27.06%;匀浆后初始蛋白浓度为3%时进行盐析,同时将废弃的一级盐析沉淀蛋白再回收处理,盐析过程粗酶纯化倍数为3.94倍,总酶活回收率可达73.73%,较常规处理提高了24.33%以上,经离子交换层析后,ACE酶比活为0.1303 U/mg,总酶活回收率为59.14%。 ACE酶学性质研究表明,ACE的最佳反应温度为42℃,最适pH为8.3。由酶促反应动力学方程计算得到的猪肺ACE的米氏常数Km为1.521 mmol/L,最大反应速率Vmax为17.301 nmol/min。新分离纯化工艺可使ACE收率大大提高。     

分离浓缩的β-葡萄糖苷酶降低京尼平制备损失率的研究

为了减少京尼平在酶解制备过程中的损失,通过硫酸铵盐析及DEAESepharos52离子交换层析对黑曲霉发酵产生的β-葡萄糖苷酶进行分离浓缩,比活由1.09 U/mg提高到8.17 U/mg, 京尼平损失也从45.7%降低到7.7%左右,从而提高了京尼平的得率;另外,通过海藻酸钠固定β-葡萄糖苷酶,使酶的有效使用次数达到五次以上,提高了酶的使用效率,降低了成本.     

雅致放射毛霉AS3.2778碱性蛋白酶的制备及应用

毛酶蛋白酶对大豆蛋白具有较高的水解效率以及对蛋白水解物良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,采用离子交换,疏水层析及凝胶层析对其进行了分离纯化,从雅致放射毛霉As3.2778的发酵麸曲中分离纯化出一种蛋白酶,其纯度提高了22.7倍,酶活回收16.1%,最终比酶活可达到6094u/mg。电泳分析发现,该蛋白酶在还原及非还原条件下均显示出单一条带,表明该酶已达到电泳纯,并且是一单体蛋白,其分子量大约在32KDa。酶谱分析表明,纯化的蛋白酶仅为原发酵麸曲中三种蛋白酶组分中的一种。以大豆蛋白为底物,探讨了纯化后的蛋白酶对大豆蛋白的水解效果。结果显示,该蛋白酶在55℃,pH8.0～10.0的条件下对大豆蛋白显示出较强的水解能力。对比实验发现,纯化的毛酶蛋白酶对大豆蛋白的水解效果优于Papain、Alcalase及Protamex,表明该蛋白酶具有更为广泛的肽键选择性,对大豆蛋白亲和力更强,在大豆蛋白肽链上存在相对较多的酶切位点。     

纸质文物上的“寄居者”

为鉴定南京博物院馆藏书画覆背纸上的微生物种类,利用分子生物学方法,对污斑处进行分离及鉴定。为了验证实验获得的纯培养微生物是否具有降解和破坏纸张的能力,对分离微生物的纤维素酶酶活、木聚糖酶酶活及蛋白酶酶活进行了选择性测定。一共获得11株细菌和5株真菌,结果证实为9种细菌及2种真菌,它们主要属于芽孢杆菌属、链格孢属和木霉属。酶活测试显示,细菌中,泛菌属的纤维素酶酶活最高,短杆菌属的蛋白酶酶活最高,分别可达到1.76和6.57 U/mL。真菌的蛋白酶酶活普遍很低,木霉属的纤维素酶酶活和木聚糖酶酶活最高,分别是17.12和29.01 U/mL。实验结果有助于针对纸质文物的微生物侵蚀现象制定相关的保护措施。     

南日鲍β-葡萄糖苷酶分离纯化及表征

采用硫酸铵分段盐析、透析、DEAE-纤维素离子交换层析和葡聚糖Sephadex G-100凝胶层析,从南日鲍内脏中分离纯化得到一种β-葡萄糖苷酶.SDS-PAGE分析表明,所纯化的β-葡萄糖苷酶为单聚体,分子量约为90 kDa,N-端8个氨基酸残基序列为AGMLYPRV.β-葡萄糖苷酶的最适温度为50℃,最适pH值为5.0,Mn2+、Cu2+、Ba2+和Zn2+对酶活力有显著的促进作用,而Al3+对酶有明显的抑制作用,SDS则使酶变性失活;pNPG与β-葡萄糖苷酶之间的亲和程度最高,纤维二糖和京尼平苷次之,水杨苷最差.     

黄色短杆菌中谷氨酸脱氢酶的分离纯化及特性

经硫酸铵盐析、DEAE-纤维素层析、苯-琼脂糖CL-4B(Phenyl-SepharoseOL-4B)层析和交联葡聚糖G-200(Sephadex G-200)层析等步骤从谷氨酸产生菌——黄色短杆菌中分离纯化的谷氨酸脱氢酶,酶活提高了230倍。该酶的分子量约为30万,由六个分子量约为5万的亚基组成,最适pH为8.9,并对热较稳定。在pH8.2时,以谷氨酸和NADP+为底物时的米氏常数值分别为0.294mol/L和0.1mmol/L。     

蛋白质分离纯化与层析技术进展

蛋白质分离纯化是蛋白质产品工业化生产的关键之一。文中分析了蛋白质分离纯化的特点，指出了分离纯化蛋白质应解决的一些问题。层析技术是一种有效的蛋白质纯化方法，文中从层析方法、层析固定相、层析过程的数学模拟三方面评述了层析技术的新进展     

鲍鱼内脏β-葡萄糖苷酶中试规模制备研究

采用胶体磨匀浆、高速管式离心、陶瓷复合膜过滤、超滤、DEAE-琼脂糖离子交换层析和CM-琼脂糖离子交换层析的中试制备工艺,从鲍鱼内脏中分离纯化得到β-葡萄糖苷酶.研究发现:胶体磨匀浆所得匀浆液总酶活为12 174.21 U,比活力为0.158 U·mg~(-1);高速管式离心两次后得到粗酶液,酶比活力为0.247 U·mg~(-1);陶瓷复合膜过滤后所得清液的酶比活力为0.133 U·mg~(-1);超滤浓缩脱盐后所得浓缩液的酶比活力为0.249U·mg~(-1);DEAE-琼脂糖阴离子交换层析洗脱缓冲液的最佳pH值为7.5,CM-琼脂糖阳离子交换层析洗脱缓冲液的最佳pH值为6.0;DEAE-琼脂糖阴离子交换层析后收集酶活性组分的酶比活力为0.492 U·mg~(-1),CM-琼脂糖阳离子交换层析收集酶活性组分的酶比活力为1.709 U·mg~(-1),纯化倍数为10.78,收率为5.0%.     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺研究

以人工饲养的北星二号蚯蚓为材料,通过对14种进口和国产离子交换树脂和 DEAE-纤维素的筛选试验和比较研究,确定了蚯蚓纤溶酶的分离纯化的较佳工艺:组织匀浆或磷酸缓冲液保温提取→Amberlite IRA 904或 DEAE-纤维素离子交换柱层析分离→Sephadex G 100或 Sephadtx G 75凝胶层析纯化→真空冷冻干燥得蚯蚓纤溶酶冻干粉。该工艺所需设备简单,操作方便,适合中,小工厂生产     

赤枝栲(Castanopsis kawakamii)叶绿体DNA的提纯方法研究

建立了一个快速、简便的提取赤枝榜(Castanopsis kawakamii)叶绿体DNA的方法，该方法主要步骤包括：叶绿体分离、DNA酶处理、裂解、去蛋白和纯化．本方法具有高产率、高纯度、高质量和快速简便等优点，省去了传统的蔗糖密度梯度离心和氯化铯密度梯度离心等昂贵、耗时的步骤．对获得的叶绿体DNA进行了限制性内切酶消化、RAPD分析并摸索出其最适应条件．