苏云金芽孢杆菌噬菌体在电镜下的形态学研究

借用电子显微镜，对分离得到的８株苏云金芽孢杆菌噬菌体进行了形态学研究．发现这８株噬菌体的形态初步可分为５类，它们是“椭头长尾”型、“２０面体头长尾”型、“绣球状头长尾”型、“椭头短尾”型和“２０面体头钢尾”型．其中“绣球状头”型形态是不多见的一类结构，而“椭头短尾”型中尾部的穗状形态尚未见有报道     

苏云金杆菌噬菌体的形态及感染特性

从苏云金杆菌厂发酵裂解液中分离得到一株苏云金杆菌噬菌体ＫＰ－１．电镜观察表明，该噬菌体结构较为复杂，头部呈多面体，衣壳里六角形，在见并具有收缩性尾鞘，尾部末端呈扁平膨大基片．其寄生范围与其它“ＢＴ”噬菌体不同，具有非常广泛的寄主，专一性不明显，同时对噬菌体ＫＰ－１感染敏感菌株１８７的特性作了具体分析．     

氢氧化钠对苏云金芽孢杆菌芽孢及其萌发的影响

【目的】了解碱对细菌芽孢及萌发的影响及机制,进一步认识芽孢的抗性,为寻找更好的杀灭芽孢的方法提供理论参考。【方法】应用单细胞拉曼光谱采集经NaOH处理后的单个苏云金芽孢杆菌(Bt)芽孢的拉曼光谱,并应用微分干涉差显微镜成像术分析其萌发动态。【结果】1.0mol/L NaOH处理30min、45min和60min后,Bt芽孢的存活率分别为25.0%、3.6%和1.8%左右;芽孢吡啶二羧酸(DPA)和蛋白质的特征峰有微弱的降低,蛋白质二级结构α螺旋特征峰(1 280/1 652cm~(–1))的位置和信号强度与对照没有明显的差异。在10mmol/L丙氨酸下,单个芽胞开始大量释放CaDPA的时间(Tlag)、快速释放CaDPA所需的时间(ΔT_(release))和芽胞皮层水解所需的时间(ΔT_(lys))分别是对照的3.5~5倍、12~13倍和1.5~2倍;在月桂胺触发下,T_(lag)值和ΔT_(release)值分别是对照的4倍和11倍左右。外源CaDPA无法触发处理30 min后的芽孢的萌发,而对照则萌发极快。【结论】NaOH处理没有破坏Bt芽孢的内膜,也没有引起成孢内CaDPA泄漏,但令与芽孢萌发相关的蛋白质受损,受损最严重的是皮层水解酶,对芽胞萌发产生严重的影响。     

苏云金杆菌噬菌体的形态及感染特性

从苏云金杆菌厂发酵裂解液中分离得到一株苏云金杆菌噬菌体ＫＰ－１．电镜观察表明，该噬菌体结构较为复杂，善呈多面体，衣壳呈六角形，直尾并具有收缩性尾鞘，尾部末端呈扁平膨大基片。其寄主范围与其它“ＢＴ”噬菌体不同，具有非常广泛的寄主，专一性不明显，同时对噬菌体ＫＰ－１感染敏感菌株１８７的特性作了具体分析。     

苏云金芽孢杆菌发酵技术研究进展

苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis简称Bt）是目前产销量最大的生物农药，其发酵过程是工业生产的关键步骤，本文对培养基成份，pH值、氧气、温度、发酵时间等发酵条件进行了综述，参考文献28篇。     

苏云金芽孢杆菌资源的收集与鉴定

苏云金芽孢杆菌是一种在芽孢形成的同时能形成杀虫晶体蛋白的细菌。自石渡从家蚕中分离出第一株Bt以后，人们发现它广泛存在于土壤、昆虫、贮藏物、仓库尘埃、植被等昆虫接触物上，并从中分离出大量菌株。本文就Bt资源收集的研究情况进行阐述。     

用PCR法检测苏云金杆菌的溶原性噬菌体

根据苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)溶原性噬菌体G IL01(GenBank Accession Number:AJ536703)的同源序列设计一对引物,用35株B.t标准菌株和生产菌株MZ1(血清型H3 a3b)的过夜培养物作模板,结果有16株菌株包括MZ1能扩增出大小约为750 bp的预期产物,推测这16株菌为溶原菌。MZ1菌株的过夜培养液与指示菌ZK1(血清型H25)混匀并在双层琼脂上培养12 h后出现了滴度为2×107pfu的噬菌斑,从而证明生产菌株MZ1确为溶原菌;又以G IL01同源性较高的其它四个基因设计引物,分别以MZ1的培养物及其溶原性噬菌体基因组为模板进行PCR扩增,结果两者得到几乎一致的带型,进一步证明了生产菌株MZ1为溶原菌,说明利用PCR法检测鉴定苏云金杆菌的溶原性是可行的。比较指示菌方法、直接电镜法和DNA鉴定法,PCR法快速简便,对B.t生产上快速检测其溶原性噬菌体有实用意义。     

提高苏云金芽孢杆菌制剂杀虫效果的策略

苏云金芽孢杆菌制剂是一种主要的生物杀虫剂 ,本文从培育高效菌株、增加昆虫对 Bt的摄入量、化学杀虫剂促进 Bt的杀虫作用、植物次生物质的增效作用、Bt与其杀虫微生物及其代谢产物的协同作用、简单化合物提高 Bt的毒力以及保护 Bt免受紫外光的损伤等方面提高 Bt制剂的杀虫活性进行了论述。     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因在枯草芽孢杆菌中的表达

根据NCBI上已公布的枯草芽孢杆菌BS168菌株的β-1,4-glucanase(eglS)基因以及苏云金芽孢杆菌的aiiA基因序列,设计引物并扩增得到eglS基因的启动子、信号肽序列和aiiA基因.构建重组表达载体Ps4-eaiiA,转化枯草芽孢杆菌BS168,得到枯草芽孢杆菌工程菌BS168/Ps4-eaiiA.该工程菌诱导发酵后经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:aiiA基因实现了在枯草芽孢杆菌中的表达.对胡萝卜软腐欧文氏菌进行马铃薯的抗病性实验,结果表明aiiA基因在枯草芽孢杆菌中表达的AiiA蛋白对胡萝卜欧文氏杆菌表现出一定的抗病性.     

苏云金芽孢杆菌8010安全性测定及影响发酵因子研究

以8010菌剂对试验动物家兔、小白鼠进行了口服、肌注、滴眼的急性感染和拌食饲喂的亚急性感染试验。血液检验、体重变化及内脏解剖等观察分析表明该菌剂未显示毒性。此外,对培养基发酵液浓度、搅拌转速、原料的不同加工处理及通气量等几种影响菌数的关键因子进行分析,探讨了菌的发酵及工业化生产条。     

一株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的分离与鉴定

利用醋酸盐对苏云金芽孢杆菌芽孢萌发的选择性抑制特性，采用选择性培养基从土壤中分离苏云金芽孢杆菌，对分离菌株的个体形态，生理生化特点进行了分类研究，确定该菌株即为苏云金杆菌，采用改进的培养基培养伴胞晶体，证明该培养基可在48h内产生大量的伴胞晶体。     

对烟草粉螟高毒力Bt菌的伴孢晶体研究

采用液体双向分离法提纯对烟草粉螟高毒力苏云金杆菌B t33,B t53,B tHB伴孢晶体,其纯度分别达99.93%,99.9%,99.8%.扫描电镜和透射电镜观察发现,不同菌株的晶体形状和数量组成各不相同.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAFE)发现3个菌株的电泳图谱不同,烟草粉螟二龄幼虫室内生物毒力测定,9天后B t33,B t53菌株100,300倍防治效果超过80%,B tHB菌株100,300,600倍对烟草粉螟二龄幼虫防治效果超过80%.     

苏云金芽孢杆菌MS7培养条件的优化

通过单因子试验对苏云金芽孢杆菌MS7菌株的培养条件进行优化．研究表明,该菌株的最佳培养基组成和发酵条件为：蔗糖10．0g／L、牛肉膏10．0g／L、K2HPO42．0g／L,初始发酵pH7．0,装液量25mL,培养温度35℃,培养时间36h,优化后细菌总数可达1．2×10^8CFU／mL．     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因的克隆与结构分析

分别克隆了叶片、苔藓和土壤中分离的Bacillus thuringiensis的aiiA基因,并对其编码的蛋白AiiA-P28、AiiA-B19和AiiA-S2进行了理化特征分析、进化树分析和空间结构的研究.结果表明AiiA-P28、 AiiA-B19和AiiA-S2分子质量均为28 ku ;等电点分别为4.77、4.77、4.93;三者均为亲水性蛋白,具有很高的同源性.进化树分析结果表明叶片中分离的AiiA-P28与苔藓中分离的AiiA-B19进化距离较近, 而土壤中分离的AiiA-S2则与它们的进化距离较远.三维结构分析表明,AiiA蛋白具有典型的αβ/βα折叠的空间结构.     

苏云金杆菌发酵培养基的研究

采用正交实验法研究了不同培养基对 Bt- HD1产毒能力的影响。优选出的培养基为 :发酵液芽孢数达 5.1× 1 0 9· m L-1,2 %发酵液 2 4 h致死 3龄小菜蛾幼虫 65% ,48h 达 89% ,72 h达1 0 0 %。普通培养基对应值分别为 6.0× 1 0 8· m L-1和 35% ,83% ,1 0 0 %。优选出培养基最佳碳氮比( C/N)为 2 .0 ,最佳含固量为 8%     

酸碱度对温和噬菌体存活与吸附效率的影响

实验测定了ｐＨ对Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｖａｒ．ｅｎｔｏｍｏｃｉｄｕｓ温和噬菌体ＴＰ３存活与吸附效率的影响作用。结果表明：在不同ｐＨ的介质中,ＴＰ３存活的能力相差很大;酸性介质及高碱性介质对ＴＰ３都有不同程度的瞬间灭活作用;ＴＰ３存活的最适ｐＨ为７．７,且适宜其存活的ｐＨ范围很窄;ｐＨ不同,ＴＰ３吸附到苏云金芽孢杆菌表面上的效率也不同,在ｐＨ≥９范围内,ｐＨ升高,吸附效率降低。     

透明颤菌血红蛋白基因在苏云金杆菌中的表达

采用大肠杆菌与枯草杆菌的穿梭质粒pMK4作为载体,构建了含有果聚糖酶基因(sacB)启动子和vgb基因的重组质粒pMK-SV.通过原生质体和电转化,将pMK-SV转入苏云金杆菌中,经影印筛选得到转化子Bt4.对Bt4诱导表达,与原菌株相比Bt4的生长量增加了20.2%.     

粉被马利娅霉(Marianaea pruinosa)对苏云金杆菌抗紫外线辐射的保护效应

本文首次报道了粉被虫草的无性型粉被马利娅霉(Marianaea pruinosa Liang)对苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis subsp. galleria Hermpel)的抗紫外辐射的保护作用,建立了粉被马利娅霉抗紫外辐射物质的苏云金杆菌检测法。用粉被马利娅霉的培养液,菌丝体浸提液及孢梗束浸提液所培养的苏云金杆菌经紫外辐射后,活菌数依次比对照提高26.3％,138.6％和187.8％,揭示了抗辐射物质的含量是梗孢束高,菌丝体次之。培养液最低的趋势,主要为胞内产物。不同来源的粉被马利娅霉菌株抗紫外辐射物质的含量是有差异的。