SINPV对斜纹夜蛾幼虫的侵染阈值

斜纹夜蛾核型多角体病毒（ＳＩＮＰＶ）对斜纹夜蛾幼虫的侵染阈值因温度和虫龄而异，虫龄愈大，温度愈高，则侵染阈值也愈大．在２０～４０℃内，３龄幼虫的侵染阈值为９０９０．９～６６６６６６．７ＰＩＢｓ／头，５龄幼虫为１３１５７８．９～７１４２８５．７ＰＩＢｓ／头．随温度升高，各龄幼虫的侵染阈值差异逐渐减少，接种量为２×１０６ＰＩＢｓ／头左右及高于２×１０７ＰＩＢｓ／头时，ＳＩＮＰＶ自身似有一定的协生作用和拮抗作用．作为病原体侵染阈值、致病性及寄主抗病性的指标，侵染阈值优于ＬＤ５０和ＬＣ５０，为解决病原体密度阈值的获取提供了一定的基础．     

单头饲养斜纹夜蛾增殖S1NPV病毒的研究

使用人工半合成饲料大规模单头饲养斜纹夜蛾幼虫，增殖核型多角体病毒，通过不同接种浓度、接种龄期、饲养温度以及不同饲料的比较，遴选出当３龄幼虫接种的病毒浓度为３．８５×１０＾５ＰＩＢｓ／ｍＬ，４龄幼虫接种的病毒浓度为３．８５×１０＾７ＰＩＢｓ／ｍＬ时，病毒产量最高，４龄幼虫接种增殖病毒的最适温度为２４－２７℃，人工半合成饲料饲养幼虫增殖病毒效果优于天然饲料，同时，罹病虫尸热处理瑟其病毒产量之间，有显     

斜纹夜蛾NPV染病幼虫发育与温度的关系

在不同温度下，以不同剂量的ＳｌＮＰＶ饲食斜纹夜蛾ＳｐｏｄｏｐｔｅｒａｌｉｔｕｒａＦ．幼虫．结果表明，１～６龄染病幼虫的发育起点温分别是１８．７９，１６．２９，１４．１９，１０．８７，８．３９，７．０３℃；１～４龄染病幼虫的发育最适温分别是３２．８５，３３．４８，３４．２２，３１．７５℃．１～６龄染病幼虫的取食最适温分别是２６．５，２５．５７，２７．９０，２７．８２，２９．０１，２８．８５℃．建立了１～６龄染病幼虫取食白菜量的温度依赖模型，死亡速率模型，以及依赖于温度和ＳｌＮＰＶ饲食量的发育速率模型     

重组斜纹夜蛾核型多角体病毒的构建和初步筛选

斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multinucleocapsid nucleopolyhedroviruse,SpltMNPV)日本株(C3)(又命名为SpltMNPV Ⅱ)是Kamiya等从日本全国各地野外感病幼虫收集、分离到189个SpltMNPV克隆中繁殖率和毒力极强的一种新型病毒株.本研究在SpltMNPV Ⅱ的基础上构建了egt缺失的,多角体启动子启动的,BmK ITa1成熟肽和增强型绿色荧光蛋白(egfp)融合表达的重组移载体psk-△egt-pph-BmK ITa1-egfp,并通过共转染初步筛选出重组病毒感染的荧光细胞.成果为进一步研制高效重组SpltMNPV生物杀虫剂提供了可行性.     

斜纹夜蛾传代细胞系的建立及病毒感染研究

以斜纹夜蛾卵建立ZSU-SL-1细胞株,细胞形态以球形及纺锤形为主,染色体数为56～260,多数细胞为多倍体,经20℃和27℃的生长曲线测定,细胞加倍时间为100～144小时.本细胞株对斜纹夜蛾和粉纹夜蛾两者的核型多角体病毒敏感.     

γ和e在斜纹夜蛾病毒中诱发的ESR谱

测量和研究了γ射线和电子束在斜纹夜蛾核型多角体病毒(NPV)中诱发的长寿命自由基的ESR谱。长寿命自由基的浓度与辐射剂量呈线性关系,而与NPV存活率的关系为“肩型”曲线。辐射在NPV中诱发的自由基的ESR谱明显不同于热能诱发的自由基的ESR谱,并且ESR谱具有超精细结构。本文还提出了DNA断链的一种可能方式。     

斜纹夜蛾核型多角体病毒单克隆抗体的制备和分析

用纯化的斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus)的病毒核衣壳免疫小鼠,取脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合,经筛选得到5株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。它们所分泌的单抗分属IgG1,IgG2a,IgG2b和IgG3等4种抗体亚类,其中1株单抗识别分子质量为41ku的病毒蛋白,其余4株单抗均识别31ku的病毒蛋白。胰蛋白酶部分酶解分析发现,31ku的蛋白的4株单抗分别识别至少3个不同的抗原决定簇。所有5株单抗均不与其他4种核型多角体病毒发生交叉反应。利用所制备的单抗进行了病毒在虫体中增殖动态的检测。这些单克隆抗体可用来深入研究病毒的流行规律和复制机制。     

斜纹夜蛾NPVp74基因的克隆及部分序列分析

以含ｐ７４基因的ＡｃＮＰＶＥｃｏＲⅠ－Ｐ片段作探针,与ＳｌＮＰＶ基因组在非严格条件下进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,将ＳｌＮＰＶｐ７４基因定位于４９００ｂｐ的ＳｌＮＰＶＸｈｏⅠ－Ｐ片段．对ＳｌＮＰＶＸｈｏⅠ－Ｐ片段中的一段９４０ｂｐ的ＤＮＡ片段进行序列测定,通过ｉｎｔｅｒｎｅｔ经ＢＬＡＳＴ与Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ中的ｄａｔａｂａｓｅ比较分析发现,序列中的一段２４３ｎｔ序列与ＡｃＮＰＶｐ７４基因有６０％的同源性,一段８１ｎｔ序列与ＡｃＮＰＶｐ７４基因的同源性高达７９％．与ＣｆＮＰＶｐ７４相比,２段２６４ｎｔ和１００ｎｔ序列分别有６０％和７１％的同源性．测得序列中的部分序列与ＢｍＮＰＶ、ＯｐＮＰＶｐ７４基因也有高达５８％～７８％的同源性．同时,这部分序列编码的氨基酸与ＡｃＮＰＶ及ＯｐＮＰＶＰ７４蛋白的氨基酸序列也有很高的同源性．结果表明所测序列的一部分为ＳｌＮＰＶＰ７４蛋白Ｃ－端的编码序列．     

斜纹夜蛾(Prodenia litura)NPV多角体蛋白的微量免疫测定的研究

用差速离心和庶糖梯度超速离心方法,分离提纯斜纹夜蛾核多角体病毒,碱解后经超速离心提取多角体蛋白,用以免疫家兔,采用对流免疫电泳和ELISA方法检测定量多角体中的多角体蛋白,结果表明:用对流免疫电泳方法检测的最低灵敏度是0.025mg多角体/ml,而用ELISA方法则可以测出10ng多角体/ml,其光吸收值(OD_(490))与多角体的浓度(mg/ml)的负对数值之间呈明显直线关系。回归方程为y=1.5335-0.2342x。     

斜纹夜蛾核多角体病毒诱导甜菜夜蛾细胞凋亡的研究

 斜纹夜蛾核多角体病毒（Spodoptera litura multiple nucleopolyhedrovirus, Splt MNPV）不能成功感染亲缘关系相近的甜菜夜蛾Spodoptera exigua,为了探究其中原因,取Splt MNPV感染甜菜夜蛾离体细胞Se301,利用光学显微镜,电子显微镜以及DAPI(4′,6-Diamidine 2′ phenylindole dihydrochloride)荧光染色等方法对其进行检测。结果显示Se301细胞被Splt MNPV感染后出现早期凋亡特征,但未进行至细胞凋亡晚期形成凋亡小体;病毒感染受到阻碍,始终没有病毒多角体和有感染性的芽生型子代病毒产生;综合以上结果说明早期细胞凋亡仍然是限制病毒完成复制周期的重要因素。     

斜纹夜蛾核多角体病毒感染甜菜夜蛾细胞的研究

 研究发现斜纹夜蛾核多角体病毒（Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus,SpltNPV）不能成功感染同属甜菜夜蛾（S. exigua,Se）昆虫,为深入研究SpltNPV在离体Se301细胞中的感染进程以及病毒感染失败的原因,对感染后Se301细胞进行DNA复制、病毒基因转录以及病毒蛋白表达等检测。结果显示被感染的Se301细胞中病毒完成了DNA的复制和病毒早、晚期基因转录,但检测不到极晚期基因多角体基因（polyhedrin）的表达,病毒的蛋白表达受阻从而影响了病毒完成复制周期。 研究发现病毒蛋白表达受阻是SpltNPV在Se301细胞中无法形成子代病毒,完成整个病毒复制的主要原因,这为深入研究其感染失败机理奠定了坚实基础。     

斜纹夜蛾核型多角体病毒多角体蛋白和病毒粒子的血清学研究

斜纹夜蛾核型多角体病毒多角体蛋白的抗血清与其同源抗原,在双向免疫扩散和免疫电泳中产生一条沉淀线和一条沉淀弧,病毒粒子的抗血清与其同源抗原,在双向免疫扩散和免疫电泳中形成两条沉淀线和三条沉淀弧。异源系统之间无交叉反应。凝胶内吸收试验表明多角体蛋白与病毒粒子之间不存在共同抗原,两种组分无血清学关系。     

斜纹夜蛾NPV多角体基因的克隆和部分测序

本文对ＳＩＮＰＶ基因组作了酶解分析，测得其基因组大小为１４５ｋｂ，并用双酶法确定了ＳＩＮＰＶ基因组的ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ物理图谱。以含ＡｃＮＰＶ多角体基因的质粒ｐＡＣ－Ⅰ的ＳａｌＩ－Ｃ片段为探针，对ＳＩＮＰＶＤＮＡ酶切片段ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交结果，初步判断多角体基因定位于ＰｓｔＩ－Ｂ／Ｃ／Ｄ片段、ＢｇｌⅡ－Ｃ／Ｄ片段、ＢａｍＨＩ－Ｂ／Ｃ片段和ＥｃｏＲＩ－Ａ／Ｂ片段上，且ＳＩＮＰＶ与ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因有６４％的同源性，而以大肠仟菌质粒ｐＵＣ１９为载体对ＳＩＮＰＶ的多角体基因试克隆，得到带有ＢｇｌⅡ－ＰｓｔⅠ双酶切片段的２个克隆子。对这两个杂交阳性克隆子之一的核苷酸序列测定，表明插入片段与ＢｍＮＰＶ多角体基因上游序列亦有一定同源性。     

甜菜夜蛾幼虫增殖GrNPV的研究

以甜菜夜蛾幼虫作为替代宿主增殖草原毛虫核型多角体病毒(GrNPV)的研究结果表明,GrNPV在甜菜夜蛾体内连续传代2次后得到了GrNPV-Se2,GrNPV-Se2切片电镜图具有典型的杆状病毒特征.分别提取GrNPV-Se2与GrNPV基因组,电泳结果表明GrNPV-Se2与GrNPV基因组大小相同.设计GrNPV多角体基因引物,对GrNPV-Se2与GrNPV基因组进行PCR验证,结果GrNPV与GrNPV-Se2基因组的多角体基因PCR产物带型相同,表明用甜菜夜蛾幼虫成功增殖了草原毛虫核型多角体病毒GrNPV.     

斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株(C3)p10基因的克隆及序列分析

从斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura mukieapsid nucleopolyhedrovirus，Splt MNPV)日本株(C3)基因组中克隆了p10基因．核苷酸序列分析表明，该克隆片断涵盖了318bp的读码框及5’端启动子区191bp和3’端终止区62bp的序列．在起始密码子ATG上游-63～-59bp处有一杆状病毒晚期和晚晚期启动子基序TAAG．联配分析表明，Splt MNPV日本株(C3)的核苷酸序列和氨基酸序列与其它9种核多角体病毒的同源性有较大差异．以p10基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒(Bombyx mori nuchopolyhedrovirus，BmNPV)与苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapcid nucleopolyhedrovirus，AcMNPV)归到同一分枝，这与以gp37基因和egt基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树结果一致．     

斜纹夜蛾核多角体病毒郴州株的大田示范效果

通过对斜纹夜蛾核多角体病毒（Spodoptera litura nuclear polyhedrosis virus）示范推广、施药方法改良、残毒检测的应用与研究,得到此病毒增效剂的平均防效为768％,其防效最优,且其使用浓度比广州病毒低2倍,天敌种类、数量都有增加,经济效益增效明显,其增净产值比清水对照、常规分别高2623．5、1014.0元／公顷,经捡测,其农药残毒量最低。     

斜纹夜蛾核多角体病毒egt基因的克隆和部分序列分析

用ＡｃＭＮＰＶｅｇｔ基因中的保守区部分片段为探针,通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交确定ＳｌＭＮ－ＰＶｅｇｔ基因的位置在ＰｓｔⅠ４９７０ｂｐ和ＸｂａⅠ２６００ｂｐ的片段上．采用双链ＤＮＡ序列分析方法测序,在２６００ｂｐ片段上的ＥｃｏＲⅠ位点两侧得到５９４ｂｐＤＮＡ碱基序列,用计算机ＤＮＡＳＩＳ和ＰＲＯＳＩＳ软件,将５９４ｂｐＤＮＡ碱基序列所推测的氨基酸序列与ＡｃＭＮＰＶ和ＳｌｉＭＮＰＶ的ｅｇｔ基因氨基酸序列进行同源比较,其同源性分别为４５％和８６．５％．     

芹菜夜蛾核型多角体病毒感染5种昆虫细胞系的研究

用０．５ＭＯＩ的ＳｆａＭＮＰＶ病毒感染液感染５种昆虫细胞系：Ｂｍｅ、Ｐｘ、Ｈｖ、Ｔｎ和ＬｅＨ。结果表明：这５种细胞系对ＳｆａＭＮＰＶ都敏感，感染１４４ｈ后，受染细胞百分率分别是２．８４％、１１．８３％、８％１、６．６５、６．２２和７．０２。电镜观察可见感染细胞核中出现病毒发生基质、病毒粒子和多角体，病毒形态大小分别是：多角体１．４５±０．１０μｍ，病毒粒子３８．１±２．０９×３０６±１４．５ｎｍ，