烟草和元麦叶肉原生质体吸收尼古丁机制的研究

用 EA_3-867纤维素酶分离的烟草(Nicotiana tabacum)和元麦(Hordeum distichon)叶肉原生质体,分别保温在尼古丁溶液中,用紫外分光光度计测定它们对尼古丁的吸收。结果表明,这两种原生质体能迅速地吸收尼古丁;原生质体吸收尼古丁的量,随介质尼古丁浓度的升高而增多;在生理学pH范围内,介质的pH对原生质体吸收尼古丁没有多大的影响。初步认为,这两种原生质体对尼古丁的吸收是一种简单的扩散机制。     

烟草和元麦叶肉原生质体吸收尼古丁机制的研究

用EA_3-867纤维素酶分离的烟草(Nicotianatabacum)和元麦(Hordeumdistichon)叶肉原生质体,分别保温在尼古丁溶液中,用紫外分光光度计测定它们对尼古丁的吸收。结果表明,这两种原生质体能迅速地吸收尼古丁;原生质体吸收尼古丁的量,随介质尼古丁浓度的升高而增多;在生理学pH范围内,介质的pH对原生质体吸收尼古丁没有多大的影响。初步认为,这两种原生质体对尼古丁的吸收是一种简单的扩散机制。     

高山被孢霉原生质体转化及延长酶基因同源表达的研究

为了有效提高高山被孢霉(Mortierella alpina)产花生四烯酸的能力,采用聚乙二醇介导的原生质体转化法将重组pD4质粒(含高山被孢霉合成花生四烯酸的延长酶基因GLELO)转入高山被孢霉中,对其转化条件和同源表达进行了研究.结果表明,原生质体最佳转化条件为:以山梨醇作为稳定剂,50mmol/L的Ca2+和聚乙二醇4000作为转化介质,于25℃转化15min后温育,原生质体转化率最高为1.8μg-1.该转化子的摇瓶实验结果显示重组菌中花生四烯酸的产量比原始菌株的产量最高提高了近30%.该研究结果为高山被孢霉的性状改进及其他真菌的的遗传转化提供参考.     

产黄青霉菌原生质体形成、再生和融合

采用0.5％的纤维素酶和0.5％的蜗牛酶的混合液在33°c分别酶解产黄青霉菌的两株营养缺陷型突变体的菌丝体以制备原生质体,并以0.6MNaCl为渗透压稳定剂使原生质体在再生培养基上再生成菌落,以30％的聚乙二醇(分子量6,000)和0.01MCaCl_2作助融剂,获得了两株营养缺陷型突变株原生质体营养互补的融合子,融合率为0.011％     

拟南芥叶肉细胞原生质体分离及影响因素

通过对拟南芥(Arabidopsis thaliana)叶肉细胞原生质体分离条件的研究,探讨了酶解法制备拟南芥叶肉细胞原生质体的分离条件和影响因素.在不同纤维素酶质量浓度、山梨醇质量浓度、酶解液pH值、酶解时间下,测定了拟南芥叶肉细胞原生质体的产量.结果表明,在20 g/L纤维素酶、140 g/L山梨醇、pH=5.8的酶解液中,酶解时间为1.5 h,原生质体产量最高.同时,在相同分离条件下测定了拟南芥幼叶和老叶的原生质体产量,结果表明,幼叶原生质体产量显著高于老叶.     

烟草种间叶肉原生质体融合方法的研究

利用PEG法、高Ca2 高pH法和PEG-高Ca2 高pH法等三种原生质体融合方法,对普通烟草K326和黄花烟草叶肉原生质体进行融合,结果表明,PEG-高Ca2 高pH法的有效融合率最高,融合效果最好.并同时对影响烟草叶肉原生质体融合的其它因素进行了研究和探讨.     

固定化酵母原生质体的研究

本文在固定酵母细胞的基础上,进一步对固定化酵母原生质体进行了初步研究.结果使产酯能力比固定化完整细跑高0.6倍.固定化原生质体经5次重复利用后其产酯性能仍为起始产酯能力的96％.     

钙信使调节脱落酸提高柑桔原生质体抗冻性的研究

脱落酸可以提高柑桔原生质体抗冻力，而钙离子专一性螯合剂ＥＧＴＡ（乙二醇双乙胺醚－Ｎ，Ｎ‘－四乙酸）和钙调素拮抗剂ＴＦＰ（三氟拉嗪）则抑制低温锻炼过程中柑桔原生质体抗冻力的发展。ＡＢＡ提高柑桔原生质体抗冻力的作用被ＥＧＴＡ和ＴＦＰ所抑制，结果表明ＡＢＡ提高原生质体抗体力的作用受钙信使系统的调节。     

核酶转基因载体的构建及在烟草原生质体中对TMV感染的抑制作用

设计切割烟草花叶病毒RNA的锤头型核酸Rz－2，分别以pKyLx7和pBin19为载体，构建含Rz－2基因及核酸和底物连接的RzSb－2基因的重组质粒，通过三亲交配将目的基因转入土壤农杆菌中的Ti质粒．重组Ti质粒通过PEG法转化烟草原生质体，同时对转化的原生质体接种TMVc一定时间后以半叶法检测原生质体中病毒的侵染性．结果表明转基因原生质体中TMV侵染性明显低于未转基因的对照，推测病毒在转基因的原生质体中复制受到干扰；且核酸Rz－2（正向）表达后作用最为明显，核酸连底物RzSb－2（正向）与RzSb～2（反向）之间有明显差别．     

Studies on introduction of arrowhead proteinase inhibitor gene intoN. tobacco protoplasts

The Arrowhead Proteinase Inhibitor (API) gene was introduced into the protoplasts of mesophyll cells ofN. tobacco by PEG-mediated. The transformed protoplasts underging differentiation of callus and regeneration of plantlet have been growing into transgenic plants. Restriction endonuclease analysis of products amplificated by PCR indicates the existence of the API gene in the transformed plantlet. The extract of the leaves from the transformed plants shows trypsin inhibitory activity, which indicates the expression on the introduced API gene and the transformed plants can accumulate the inhibitor. However, the variation of the inhibitory activity of the transformed plants reveals the importance of the integration site of the API gene in the genome. Wang Xin: born in Dec. 1965. Master of science. Present address     

烟草原生质体的分离纯化

研究从烟草叶片分离原生质体的若干影响因素.通过酶解法降解细胞壁释放出原生质体,利用离心和蔗糖漂浮法从粗提取液中纯化出原生质体,并通过血球计数板计数来比较制备的效果.结果表明:酶的种类、质膜稳定剂、渗透压稳定剂、pH及酶解时间是影响原生质体制备的重要因素.纤维素酶含量2%,果胶酶含量1%,2-N-吗啉乙烷磺酸(MES)浓度50mmol/L,Ca2+与甘露醇作为渗透压稳定剂,pH6左右,温度28℃,酶解时间4h时原生质体的分离效果最佳.     

用原生质体融合法优化啤酒酵母的凝絮性和发酵性能

以发酵度较高、凝絮性较差的啤酒酵母菌株H38的原生质体为受体,以凝絮性较强、发酵度较低的啤酒酵母菌株N1热灭活的原生质体为供体进行融合.用正交试验法分别优化两亲株的原生质体制备和再生的条件以及原生质体融合的条件.用制霉菌素抗性为遗传标记选择融合子.融合子初筛时以凝絮性为指标,复筛时以发酵度和发酵液中的主要风味物质的含量为指标.对得到的融合子进行了异核体和遗传稳定性的检验,结果得到两株凝絮性以及发酵特性较好的菌株HN31和HN40.     

水稻叶肉原生质体的分离与培养

研究了秧龄、纤维素酶浓度、纤维素酶 纤维素酶和果胶酶的比例等因素对分离水稻叶肉原生质体的影响,建立了培养水稻无菌苗、用叶鞘分离水稻叶肉原生质体的方法,该方法解决了愈伤组织诱导困难,分离水稻原生质体的分离期长、费时、费力的问题,大大缩短了分离原生质体的时间,对水稻叶肉原生质体的培养条件也进行了初步的研究。     

Rice protoplasts isolated directly from mature-embryo-derived calli

Mature-embryo-derived calli of japonica rice (Oryza sativa L) Taipei 309 were used for replicated protoplast isolation experiments. Six out of nine callus lines produced protoplasts with satisfactory yield of 5.20×10⁶–8.96×10⁶ protoplasts/g FW (fresh weight). The remaining three callus lines initiated from seeds of cryopreserved-callus-derived plants had rooty calli, resulting in low yield of protoplasts and a large number of isolated banana-shape intact cells. Viability of protoplasts ranged 87.46%–94.15%. The average size of protoplasts was 207.49–379.04 μm² in different callus lines. Comparitive experiments were also carried out using both calli and suspension culture cells for protoplast isolation. The results demonstrated that protoplast isolation of calli was a substantially simplified and reliable method for preparing rice protoplasts. Jin Deming: born in Jan. 1959, Associated Professor     

性激素对大鼠前列腺腹叶酸性磷酸酶影响的组织化学研究

成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠８０只分为５组：即对照组（Ｎ组）、正常用雌激素处理组（Ｎ＋Ｅ２）、阉割组（Ｃ组）、阉割后用雌激素处理组（Ｃ＋Ｅ２组）和阉割后用雄激素处理组（Ｃ＋Ｔ组）。于处理后第１、２、３、６和１２周分５批取材。用酶组化方法显示大鼠前列腺腹叶（ＲＶＰ）酸性磷酸酶（ＡＣＰ）的活性变化。结果表明：Ｎ＋Ｅ２组酶活性明显增强，Ｃ组酶活性逐渐减弱，直到消失，Ｃ＋Ｅ２组和Ｃ组结果相似，仅第２周稍有增加，Ｃ＋Ｔ组酶活性变化不明显，提示ＲＶＰ上皮细胞内ＡＣＰ的活性变化与大鼠体内性激素的含量和平衡状态密切相关。     

用膜片钳技术测定植物原生质体膜电位

使用膜片钳测量了石防风、烟草及小麦原生质体的膜电位，并与常规膜电位方法做了比较．结果表明，膜片钳法测得的原生质体膜电位为内负外正，低于－５０ｍＶ；常规的插入法测得的为内正外负，大于＋１０ｍＶ．与插入法测得的完整细胞膜电位（低于－１００ｍＶ）相比，膜片钳法测得的原生质体膜电位更为接近．两种方法在原生质体膜电位测量上的差别，可能与原生质体受损的程度不同有关．     

黄瓜子叶原生质体的培养与分化

从黄瓜无菌苗子叶游离原生质体,培养在含NAA1mgL~(-1)+2,4-D0.5mgL~(-1)+6-BA0.5mgL~(-1)的MS(大量元素减半)和DPD液体培养基中,3d后开始第1次分裂。10d后形成细胞团,在2种培养基中均形成愈伤组织,转入含IAA3mgL~(-1)+6-AB1mgL~(-1)的MS固体培养基后分化出苗。实验对黄瓜无菌苗子叶游离原生质体的光照和温度条件进行了研究,从1500Lux至25000Lux的光照强度对原生质体的游离没有明显的影响昼夜温差是一个重要的影响因子,恒温下生长的无菌苗,原生质体游离较困难同时讨论了子叶及叶片的细胞形态与原生质体游离的关系。     

微生物原生质体辐射诱变及其红外吸收特征的研究

本文测出两种微生物原生质体(黑曲霉和阿氏假囊酵母)和DNA分子红外吸收光谱的几个主要吸收峰位置是极为一致的,两种原生质体和DNA分子经过辐照后对红外吸收均表现出不同程度的变化,这些变化可能是由于细胞内DNA分子经辐射后发生了一定变化,相应地导致了菌体的变异。上述两种微生物经辐射诱变后,比较诱变株及亲株红外吸收光谱,结果表明,尽管经过若干传代,诱变林和亲株红外吸收仍保持了某些一致性,同时又因经过诱变表现了某些变化,由此表明,微生物的原生质体和DNA分子的红外吸收与辐射诱变之间具有一定程度的相关性。     

烟草叶肉原生质体分离和纯化研究

实验比较了从烟草K326叶片分离叶肉原生质体的若干影响因素.结果表明,质壁分离的时间、酶液浓度、渗透压及酶解时间是影响原生质体产量和质量的决定性因素.研究结果对建立高效的烟草原生质体再生系统及其遗传操作有参考价值.     

Aspergillus oryzae与Aspergillus niger原生质体的制备、再生与非对称灭活工艺研究

为提高菌丝原生质体的释放量和活力,分别考查了培养基碳源、菌龄、酶浓度、酶解时间及再生培养基种类对Aspergillus oryzae和Aspergillus niger 原生质体释放和再生的影响,并研究了两亲本原生质体的非对称灭活参数。结果表明:（1）以MPY液体培养基为菌丝培养基,按105个孢子/ml培养基的接种量接入新鲜孢子悬液,30 ℃/100 rpm分别振荡培养18和21 h,总浓度15 mg/ml的复合酶液（溶壁酶：蜗牛酶：纤维素酶＝1:1:1）按1 g湿菌丝球/10 mL酶液的比例,于30 ℃/70 rpm条件下酶解2.5 h,然后以高渗豆汁固体培养基为再生培养基,在上述制备工艺参数下两亲本原生质体的释放量和再生率均可达到107个/ml和30％以上;（2）通过灭活曲线确定A. oryzae HN3042原生质体于15 W紫光灯垂直距离13 cm处照射15 min,A. niger CICC2377原生质体于65 ℃水浴10 min,此灭活剂量可使99％以上双亲原生质体非对称失活。