小菜蛾成虫蛋白质组双向电泳图谱的建立及条件优化

通过选择合适的pH范围及长度的胶条,并对蛋白样品上样量、等电聚焦伏小时数、银染时间及样品前处理等进行优化,建立了以双向电泳技术为基础的小菜蛾成虫蛋白质组学研究方法.优化结果表明使用17 cm、pH3～pH10的非线性胶条可以得到分辨率较高的胶图.该方法的建立为小菜蛾抗药性差异蛋白质组学研究奠定了基础.     

人骨骼肌双向电泳条件优化及部分蛋白质鉴定

目的建立和优化人骨骼肌组织双向电泳模型,为深入探讨骨骼肌萎缩的分子机制提供方法上的保障。方法使用两性离子去垢剂CHAPS和SB3-10,并配合不同浓度的离液剂抽提骨骼肌蛋白质,并通过双向电泳对蛋白质进行分离,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)对选取的蛋白质进行鉴定。结果优化过的双向电泳模型可在一张凝胶上分离800多个蛋白质点,通过MALDI-TOF鉴定出HUMANserine/threonine protein kinase KKIALRE等4种低丰度蛋白质。结论多种去垢剂和离液剂的组合使用才能获得对组织中蛋白质较好的抽提效果。获得的人骨骼肌双向电泳图谱是对人类骨骼肌蛋白质组学数据库的有益补充,为使用比较蛋白质组学方法筛选人肌病关键蛋白质提供了实践和理论基础。     

金钗石斛花芽蛋白质提取及其双向电泳体系优化

通过对蛋白质提取方法、水化方式、等点聚焦程序、IPG胶条选择等方面的优化,建立金钗石斛花芽蛋白质双向电泳体系.结果表明,采用酚抽提法提取蛋白,样品与水化液1∶〖KG-*2/3〗40复溶;被动水化,等点聚焦程序B2;选用24 cm pH 3～10NL 胶条和12% 的凝胶;采用考马斯亮蓝G-250染色,获得了可识别1 422个蛋白质斑点的双向电泳图谱,且重复性好、分辨率高,为进一步开展金钗石斛花芽在蛋白质组学水平上的分析提供了技术支持.     

日本囊对虾性腺蛋白质双向电泳的样品制备方法的改进

采用一种能同时提取RNA、DNA和Protein的试剂(RDP试剂)进行日本囊对虾性腺总蛋白质的制备,并通过双向电泳(2 - DE)技术与传统的裂解液法比较提取效果.RDP法所得2- DE图谱清晰,条纹少,蛋白质点数多,而裂解液法存在横向和纵向拖尾,其碱性端蛋白质点大量缺失,说明RDP法能有效去除蛋白质样品中盐离子、脂...     

甘蔗叶片蛋白质组双向电泳技术优化

为了建立适合甘蔗叶片蛋白质组研究的双向电泳技术,对甘蔗叶蛋白质的溶解方法、IEF电泳、上样量等关键步骤进行了优化.结果表明:裂解液中有2 mmol/L的硫脲才能更充分地溶解蛋白;上样量1.0 mg时得到质量较好的凝胶图谱;甘蔗叶片蛋白质主要分布在pH4～7范围.通过对甘蔗叶片蛋白双向电泳技术的优化,提高了双向电泳图谱分...     

实验室稀土合金样品制备的探索与实践

合金制备是一项科学的工作,对研究合金的物理性质具有直接影响．以Ce1-xLaxRu4Sn6系列样品制备为例介绍合金样品制备的规范操作过程,其中包括样品元素选择、样品准备、样品合成、样品切割以及样品的热处理等;同时,介绍常规仪器的使用和规范的制备操作．就实验物理学而言,该方法具有一定借鉴意义,值得推广．     

扫描电镜粉末样品的制备

扫描电镜粉末样品制备的好坏，直接关系样品表面微观形貌的观察。样品在样品台上固定和样品表面镀膜，则是制备的关键。本实验使用火棉胶溶液做分散剂和粘接剂，对不同材料样品进行了固定，并对空气溅射的镀膜条件进行了选择。     

胃癌细胞SGC-7901双向电泳系统的建立及优化

文蛤抗癌活性多肽对多种癌细胞有抑制效应，具有良好的药物开发前景．双向电泳技术的进步为药物的开发提供了理想的技术平台，我们通过对胃癌细胞SGC-7901总蛋白双向电泳技术的建立以及初步优化对一些环节如样品处理的方法、上样量的选择、电泳参数的设置、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行了优化得到了分辨率较好的胃癌细胞的蛋白图谱，为进一步的文蛤抗癌多肽抑制胃癌细胞作用的蛋白组学研究提供实验工作的基础．     

化学分析样品的加工制备

化学分析样品是为了测定岩石的化学成份及其含量而采取的样品,通过样品的化学分析,确定矿石中主要有用组分及伴生有益、有害组分的含量,用以确定矿体与围岩的边界,圈定矿体,为计算资源储量提供资料依据。取得准确的样品化学分析结果,规范的样品加工制备是保证化学分析结果的质量关键。     

蛋白质双向电泳实验课的建设与实践

蛋白质组学作为功能基因组学研究的重要支柱应运而生。双向电泳是蛋白组学研究中最常用的蛋白质分离技术,为了让生物信息专业的学生了解和掌握这项技术,通过实验教学加强学生科研素质和实验技能的培养,华中科技大学生命科学与技术学院在生物信息专业本科生的系统生物学实验教学中开设了“蛋白质双向电泳”的实验内容。由于该项技术操作复杂,对于本科生来说实验难度较大,经过两年的教学实践,我们在实验课教学模式、教学方法和实验器材上进行了创新与探索,在教学效果和学生的实验结果方面均取得了较好的成绩。     

运动发酵单胞杆菌蛋白质双向电泳技术的建立

运动发酵单胞杆菌(Zymomonas mobilis)具有高乙醇耐受力和高乙醇转化率,产醇率也较高,是一种很好的生物能源.运用双向电泳技术对运动发酵单胞杆菌蛋白质组进行了一系列单因子实验,经过验证获得了重复性好、分辨率高的双向电泳图谱,为该菌的比较蛋白质组学的研究,发现并克隆产乙醇率高的基因奠定了基础.     

用蛋白质组学技术分析家兔MODS血清蛋白质组的方法初探

应用蛋白质组学技术比较家兔肠源性多器官功能障碍综合征(MODS)模型复制前后的血清蛋白质组表达差异,探索该技术在家兔肠源性MODS研究中应用的可能性.取家兔肠源性MODS模型复制前后血清各50 μL,去除高丰度蛋白后用丙酮将洗脱液中的蛋白沉淀,加入水化液使沉淀中的蛋白充分裂解,离心后取上清液上样.双向电泳后银染,用PDQuest7.4软件进行胶图分析,比较两组血清双向电泳图谱中的差异蛋白点.家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好,可以满足进一步研究的需要.其中11个点在复制MODS后表达上调,8个点下调.复制家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱存在显著差异;初步建立的家兔血清蛋白质双向凝胶电泳技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

一种优化的双向凝胶电泳方法

双向凝胶电泳技术是蛋白质组学研究的基础性技术平台 ,如何得到一张高质量的双向凝胶电泳图谱是进一步深化研究的关键 .该文利用人永生化食管上皮细胞系SHEE为材料 ,采用IPG DALT系统双向凝胶电泳技术 ,通过对样品的制备及预处理、第一向等电聚焦、平衡和两向间的转移等关键步骤进行改进和优化 ,获得了高分辨率、高重复性的双向凝胶电泳图谱     

肝癌细胞株HepG-2的G1期细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

采用双向电泳分离肝癌细胞株 HepG2 的 G1 期细胞的蛋白质,经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析显示:在 pH3-10,13 cm 的 IPG 胶条上,可分离到 227 个重复性及分辨率均较好的蛋白斑点,蛋白斑点的匹配率为 84%.建立了 HepG2 的G1 期细胞蛋白质组双向电泳图谱,为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础.     

结核分枝杆菌H37Rv株与耐异烟肼菌株间细胞壁蛋白质组双向电泳图谱比较

利用双向电泳技术可以对体外培养的结核分枝杆菌非耐药型菌株和耐药型菌株进行细胞壁蛋白质组学比较,寻找与耐药相关的蛋白质．结核分枝杆菌H37Rv株与耐异烟肼菌株在Middlebrook 7H9 Broth培养基中37℃摇床培养1个月后,从培养物中提取结核分枝杆菌细胞壁蛋白．以pH4～7的IPG预制胶条为第一向等电聚焦,以SDS-PAGE为双向电泳第二向,经过银氨染色,图像扫描后,利用软件分析处理图像．在结核分枝杆菌H37Rv株和耐异烟肼菌株的细胞壁蛋白质凝胶图谱中分别检测出499和582个蛋白质斑点．它们的蛋白质分子质量分布基本相似,其中有102个斑点差异显著．这为研究耐异烟肼菌株的耐药机制提供了蛋白质组学方面的信息．     

棉花根总蛋白双向电泳方法的优化

以陆地棉(Gossypium hirsutumL.)根为材料,比较分析了三种总蛋白提取方法及电泳参数和上样量等因素对双向电泳结果的影响.结果表明:选择pH 4⁷IPG胶条,采用丙酮沉淀/2-D Clean-up Kit法提取总蛋白,电泳时设置合适的电压,上样量为250μg蛋白进行双向电泳能够检测到1 000多个清晰的蛋白点,适合做质谱分析.     

双向凝胶电泳分析动脉粥样硬化大鼠心肌蛋白表达图谱

采用双相凝胶电泳分离大鼠冠状动脉总蛋白，胶态考马斯亮蓝G-250染色，GS-800凝胶扫描仪获取凝胶图像，并用PDQUEST软件分析，检测出2626个蛋白质斑点，并且得到不同条件下的蛋白质组的差异图谱，在相同的参数设置下，不同谱图间的匹配斑点数为1841，匹配率达70．1％以上，测量了凝胶蛋白斑点的在IEF、和SDS—PAGE方向上的位置偏差；对比分析了两种心肌组织的差异蛋白，发现33个蛋白质斑点只在正常大鼠心肌蛋白检测到表达；46个蛋白点在两种细胞中表达量上有显著变化，为从分子水平上理解心血管类疾病的发病机制，寻找防治药物和药物的构效关系的进一步研究开拓了新的途径，同时为深入研究AS的发病机制和药效研究提供参考数据。