菊糖酶酵母去阻遏突变体的选育

一株萨地假丝酵母(Candida Salmenticensis B—102)能产生菊糖酶(Inulinase)。经研究发现,这株酵母酶系统合成菊糖酶时受右旋糖、果糖的抑制。因此,应用固定化酵母细胞进行菊糖连续水解制备高果糖浆时,将受到限制。使用甲基磺酸乙酯(EMS)处理菌体细胞后,通过脱氧葡萄糖选择淘汰,分离到稳定的菊糖酶合成去阻遇突变体。测定了突变体的一些特性,并探讨诱变处理对菌体酶系统的影响。     

利用牛蒡菊糖筛选产菊糖酶菌株的研究

筛选出一株能分解牛蒡菊糖并产生低聚糖的菌株，经鉴定为黑曲霉AC1．正交设计法优化摇瓶发酵产菊糖酶的条件，实验结果表明：最佳发酵条件为基质菊糖质量浓度为0．03g／mL，pH为6．0，磷酸氢二钾质量浓度为0．006g／mL，酶活力可达26．41U／mL．利用高效液相色谱检测AC1产生的菊糖酶粗酶液分解牛蒡菊糖后的产物，结果表明：经分解后检测出低聚糖的存在．对AC1产生的菊糖酶粗酶液的酶学性质分析，结果表明：pH5．5，50℃反应温度下表现出最大且稳定的酶活力．     

产菊糖酶菌株的选育及其营养需求的研究

从４７种真菌中筛选中２株能分解菊芋菊糖并产生低聚果糖的菌株,摇瓶发酵的适当条件为,基质含菊糖提取物４％,蛋白胨０．３％,尿素０．２％,温度３１℃,摇床转速２００ｒ／ｍｉｎ,培养时间４２ｈ,最高产菊糖酶达２４０．３ｕ／ｍＬ,颗糖相对于菊糖的转化率最高为８１．４％,直接用固体菊芋粉接种培养所选菌种,加水保温,分解菊芋粉中的菊糖生产低聚果糖,在适宜的营养条件下,低聚果糖相对于菊芋粉的最高转化率为１４％。     

超声波对菊糖酶催化作用的影响

频率为２０ｋＨｚ、功率为２０Ｗ的超声波可促进固定化菊糖酶的催化作用，对促进经超声波作用发酵后生产的菊糖酶的作用更为明显，以蔗糖为底物的酶活力提高了６０％。，在超声波作用下，研究固定化菊糖酶动力学结果表明：其酶反应最适ｐＨ和温度基本不变，但Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ＿Ｂｕｒｋ曲线产生偏移。在探讨超声波对促进固定化菊糖酶催化作用的机理时，初步探明超声波对促进反应体系的扩散和传输起主导作用。     

菊糖酶的膜滤式酶解反应动力学常数的测定

通过在动态膜滤式酶解反应装置上用团假丝酵母（Ｃａｎｄｉａｇｌａｅｂｏｓａ）产生的菊糖酶降解洋姜中菊糖实验，确定了间歇与连续操作的反应动力学常数，分别为１３．８９ｍＭ和９．３７ｍＭ，最适反应条件为温度在（５０±２）℃，ｐＨ值为５．５～６．     

真菌转化菊糖生产低聚果糖的研究

研究了真菌黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）Ａ９７转化菊糖生产果糖的适当条件,结果表明：发酵初始ｐＨ为５．５￣６．０,菊糖浓度为２％,接种量５％,控制前期发酵温度为２８￣３３℃,３６ｈ后发酵温度为３２￣３３℃,发酵周期为４２ｈ左右,最高产酶达２５４．７μ／ｍｌ,在１０Ｌ自控发酵罐中,产酶达到同样水平。产品总还原糖含量６８％,其中果糖９５％,葡萄糖５％。     

脉冲磁场对Kluyveromyces fragilis生长及菊糖酶合成的影响

研究了脉冲电磁场对Kluyveromycesfragilis细胞生长和菊糖酶生物合成的影响.结果发现:94Hz,14mT,脉宽为1300μs,间歇时间为8700μs,上升和下降时间为200μs的矩形脉冲磁场的作用使菊糖酶活力提高了23%.这种脉冲电磁场对酶的诱导合成作用使菊糖酶的合成总量是对照样的136%.同时发现这种作用使对应菊糖酶mRNA合成量增大,而且菊糖酶mRNA合成量增大与菊糖酶生成量的增加相关.可以认为脉冲电磁场促进了Kluyveromycesfragilis菊糖酶基因的转录与表达.     

衣康酸产生菌-土曲霉T-730原生质体的制备和再生

以衣康酸产生菌土曲霉T-730为供试菌株,研究了菌丝体培养方式、酶配比、菌丝的菌龄、酶解温度和时间、再生培养方法等因素对土曲霉原生质体形成和再生的影响．结果表明：采用液体静置培养12h～14h的菌丝体,在含有纤维素酶0．6％,蜗牛酶0．3%,溶菌酶0．1％的混合酶系统中,置35℃酶解3.5h,原生质体形成率最高;采用双层平板培养法于32℃再生,再生率达到70.6%     

脉冲磁场对Kluyveromces fragilis生长及菊糖酶合成的 …

研究了脉冲电磁场对ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ细胞生长和菊糖酶生物合成的影响,结果发现：９４Ｈｚ,１４ｍＴ,脉宽为１３００μｓ,间歇时间为８７００μｓ,上升和下降时间为２００μｓ的矩形脉冲磁场的作用使菊糖酶活力提高了２３％,这种脉冲电磁场对酶的诱导合成作用使菊糖酶的合成总量是对照样的１３６％,同时发现这种作用使对应菊糖酶ｍＲＮＡ合成量增大,而且菊糖酶ｍＲＮＡ合成量增大与菊糖酶生成量     

克鲁维酵母Y－85菊粉酶的研究

菊粉酶产生菌株─—克鲁维酵母Ｙ－８５在１５Ｌ罐中进行产酶发酵，培养２４ｈ，发酵液中菊粉酶的总活力可达１０３２ｕ／ｍｌ，其中胞壁酶活７６８ｕ／ｍｌ，占总酶活的７４％。用含半胱氨酸的缓冲液提取胞壁酶，酶的回收率达８８％，比活力可达１００８ｕ／ｍｇ．酶作用于菊糖的最适ｐＨ为４．５，最适温度为５０℃，在５０℃以下和ｐＨ４～８稳定，金属离子Ａｇ￣＋、Ｈｇ￣（２＋）对酶有强烈的抑制作用，ＰＣＭＢ对酶也有明显的抑制作用。该酶可水解菊糖，棉子糖和蔗糖等多种底物，能快速将菊芋抽提液中的菊糖水解成果糖，适合用于以菊芋为原料的高果糖浆生产。     

菊粉酶高活力菌株的筛选和发酵条件的研究

从101林酵母中筛选出一株高菊粉酶活力的菌株克鲁维酵母(Kluyveromyces sp.)y-85,该菌株菊粉酶的合成受木糖或菊粉的诱导,产酶适宜的培养基组成(％)为:菊芋抽提液7.0,尿素2.0,玉米浆3.0,产酶的最适温度和pH分别为30℃和5～6,在这些条件下,摇瓶培养24h,该菌株产生的酶活力可达1403u/ml。     

菊芋的酶降解及其综合利用

菊芋富含菊粉,菊粉经菊粉酶一步酶解,可生产高果糖浆．报道了菊芋发酵生产菊粉酶、高果糖浆、酒精等研究结果,国内外研究进展以及酶解产物的综合利用．经诱变选育出的高产突变株ＡＬ１５４ 菊粉酶的活力达１４６ ．３ μ／ｍＬ,比出发株提高近３ 倍,菊粉酶酶解菊芋提取液的最适工艺条件为：ｐＨ５ ．０ ,６０ ℃,底物总糖浓度１０％ ～２０ ％ ,酶用量３ ．０ μ／ｇ菊糖,酶解时间１０ ｈ ,底物降解率达９７ ．２ ％ ,酶解产物中果糖占总糖的８６ ．１ ％ ．     

一步酸法水解菊粉生产高果糖浆

用黑曲霉突变株AJ1958产生的菊粉酶，水解菊粉抽提液生产高果糖浆．以6O目菊芋粉在水料比为6：1，料液pH3．0~3．5，60℃条件下浸泡0·5h，过滤，其菊粉抽提率可达95％以上．在每克菊粉投酶量120μmol／min下，水解菊粉抽提液6h～7h，水解率达到95％以上．调nH至4．2～4．5，经活性炭脱色，减压浓缩，得可溶性固形物浓度为0·77g／g以上，果糖含量0．90g／g以上，具有果糖纯正香味的高果糖浆．     

葡萄糖异构酶的双层固定化及其在高果糖浆工业化生产中的应用

在对多孔三甲铵甲基聚苯乙烯(TMPS)载体的合成研究基础上，运用分子沉积技术，完成葡萄糖异构酶(GI)200ks双层固定化试验，并在万吨生产线上进行1700t果葡糖浆生产试验。结果表明，开发的双层固定化葡萄糖异构酶(IGI)活力可达到2200μmol/min·g于胶，活力回收率达68．5%。载体机械强度良好，双层IGI的活力比单层IGI活力提高114%，IGI的半衰期45d左右，3个半衰期的转化力为11840kg干基葡萄糖/kgIGI。这一结果与普通IGI相比，相同高果糖浆生产能力的异构化装置可缩小1倍，载体用量可减少1倍。     

克鲁维酵母y－85菊粉酶水解菊粉的研究及其中试

克鲁维酵母（Ｋｌｕｖｅｒｏｍｙｃｅｓｓｐ．）Ｙ－８５在菊粉提取液培养基中生长产菊粉酶，其细胞和胞外的菊粉酶活力分别约占菊粉酶总活力的７６％和２４％．试验中以酶发酵液作酶液．该酶的Ｓ／Ｉ值为１５．２．酶液在５０，５５和６０℃下保温１ｈ，活力分别残留１００％，９６％和６５％；在８℃下放置７ｄ，１４ｄ，酶活力分别残留９８％和９６％．在ｐＨ３．６～７．０内，酶活性十分稳定．５ｍｍｏｌＬ－半胱氨酸和Ｆｅ＋２分别可使酶活力提高１０．４％和４１．２％．ｙ－８５菊粉酶水解菊粉的适宜条件是：底物为总糖浓度１０％～１５％菊粉提取液，ｐＨ５．０，温度为５５℃，酶用量为底物每克糖加酶８００ｕ（以蔗糖为底物测酶活力）或２６．３ｕ（以菊糖为底物测酶活力）、搅拌酶解６ｈ．在上述条件上，底物降解率最高可达９８．５％．酶解液中，果糖占总还原糖量的８５％．用１１００Ｌ罐进行酶解中试，５批试验，底物降解率平均达９４．２％．     

南方红豆杉悬浮培养细胞中糖代谢的波动性及其与紫杉烷合成关系的研究

针对悬浮培养南方红豆杉细胞利用不同浓度的蔗糖进行了研究,通过检测细胞内外的蔗糖,果糖和葡萄糖以及胞内淀粉含量的变化,发现细胞团体系中碳素代谢是以胞内淀粉变化为核心的,蔗糖,葡萄和果糖的消耗和吸收呈现波动性,从而促进使细胞生物量的增国和紫杉烷类化合物的合成,同时研究发现细胞对蔗糖的消耗有一个临界点,即培养液中有1mg/mL的蔗糖不能被吸收,而培养液中浓度为3％的蔗糖对细胞攻产物合成最为有利,蔗糖大部分被降解成葡萄糖和果糖,其中葡萄糖有利于细胞的前期生长以获得大量的生物量,果糖在中期添加有利于细胞培养后期合成紫杉烷类化合物,其中紫杉醇并不是次生代谢途径的最终产物。     

一株有抗菌活性的云南重楼植物内生真菌的鉴定

首次从云南重楼植物中分离得到的1株内生真菌(编号c 196),发现它对多种病原菌有抗菌活性.通过进一步对其培养特征,显微形态特征,电镜扫描特征的观察以及ITS序列测定和系统发育树构建与分析,发现该菌与巴西青霉(P.brasilianum)的赫昆青霉(P.paraherquei)的亲缘关系最为接近,相似性为99.6%,但形态特征存在差别,c 196菌株的分生孢子小梗有1~3个分支,而巴西青霉和赫昆青霉[1,2]的分生孢子小梗都是4~7个分支.因此我们建议将其定为P.paraherquei的1个变种———赫昆青霉云南变种(Penicillium para-herqueivar.yunnanensisn.var Sun et Chen).     

应用响应面法优化武夷菌素发酵培养基

为了提高农用抗生素武夷菌素的效价,应用响应面法对武夷菌素发酵培养基进行了优化.首先应用部分因子设计法对武夷菌素发酵培养基中的淀粉、葡萄糖、玉米粉、豆饼粉、化合物A、化合物B、化合物C、MgSO_4、FeSO_4、NaCl共10种营养成分进行了分析,筛选出葡萄糖和豆饼粉为影响武夷菌素效价的关键因子,然后通过最陡爬坡实验逼进最大响应区域,应用中心组合设计法优化葡萄糖(X_2)和豆饼粉(X_4)的浓度,得到武夷菌素效价(Y)的二次多项式优化拟合模型,其为:Y=6 643.78 687.42 X_2 275.13 X_4-824.69 X_2~2-122.45 X_2X_4-620.94X_4~2由该模型求解可知,当葡萄糖27.2g/L、豆饼粉31.8g/L时武夷菌素效价有最大值。于是按这2种关键因子的用量获得优化的培养基,用菌株S-40(原始效价4443μg/mL)比较试验测定表明,在优化的培养基上武夷菌素的效价可提高到6643μg/mL.