一株新的毛螺旋菌Lachnospiraceae bacterium BTY6的分离与鉴定

窖泥微生物对浓香型白酒的品质、风味起着重要作用. 本研究从25年窖龄的成熟窖池中,分离得到54株功能微生物,并对其中一株新的产丁酸菌株BTY6进行了多相分类学研究. 该菌株为严格厌氧,革兰氏阳性,无芽孢形成,菌体呈短杆状. 该菌株可以利用的碳源有α-D-葡萄糖,蔗糖,麦芽糖,D-果糖,D-纤维二糖,α-D-乳糖,D-半乳糖,L-乳酸,等等. 该菌株主要的脂肪酸为C16 : 0 (54.85%),C16 : 0 N alcohol (9.61%),C17 : 0 10-methyl (7.06%) 和C18 : 0 (4.71%). 菌株BTY6的G+C (mol%)含量为48.52%. 16S rRNA基因序列显示,BTY6与GenBank数据库中一株未培养毛螺旋菌（uncultured Firmicutes bacterium; HBG_A4R5-4; DQ837628）有最高的的序列相似性（99.8%）,但与所有可培养模式菌株相似性均低于93%. 经形态学、生理生化特征和系统发育分析,该菌可能为毛螺旋菌科的一个新属.     

浓香型白酒窖泥中重要微生物的分析与研究

对白酒生产窖泥中重要微生物进行分析研究,揭示其生理特征及特殊功能,并根据这些微生物的特征进行纯茵培养,为多茵利的混合发酵培养液态窖泥提供技术依据,以培养出优质窖泥,提高浓香型白酒的产量和质量.表5,参4.     

高效石油降解菌株的筛选及菌群的构建

从海南澄迈油井周围污染的土壤中采集样品,以原油为唯一碳源,经初筛、复筛得到13株具降解石油性能的微生物,其中J-2、J-4、J-12、J-13菌株在培养10 d后,其石油降解率分别可达到27.92%、37.36%、30.98%和14.10%.选择这4株菌进行2株菌、3株菌、4株菌的混合培养,构建了11个降解石油的微生物体系,研究发现J-2与J-4混合菌群降解效果最好,高达71.58%,明显优于其他的混合菌群体系和单菌株的降解效果.根据形态学观察和生理生化特征对这4种菌株进行鉴定,初步确定为粉红头孢霉属(Cephaesosp),青霉属(Penicillium),链霉菌属(Streptomyces)和黄单胞菌属(Xanthomonas).     

浓香型白酒窖泥厌氧细菌的分离鉴定

浓香型白酒的生产依赖于窖池,窖池的好坏取决于窖泥微生物,其中厌氧微生物尤为重要。为了认识窖泥厌氧微生物,从浓香型白酒窖泥中分离纯化得到3株厌氧细菌,对其进行菌落观察、镜检和生理生化检测,参照《伯杰细菌鉴定手册》进行初步鉴定并确定其属名。3株厌氧细菌分别为:Lactobacillus(乳杆菌属)、Tsukamurella(束村氏菌属)、Sporolactobacillus(芽孢乳杆菌属)。     

浓香型白酒窖泥厌氧细菌的分离鉴定

浓香型白酒的生产依赖于窖池,窖池的好坏取决于窖泥微生物,其中厌氧微生物尤为重要。为了认识窖泥厌氧微生物,从浓香型白酒窖泥中分离纯化得到3株厌氧细菌,对其进行菌落观察、镜检和生理生化检测,参照《伯杰细菌鉴定手册》进行初步鉴定并确定其属名。3株厌氧细菌分别为:Lactobacillus(乳杆菌属)、Tsukamurella(束村氏菌属)、Sporolactobacillus(芽孢乳杆菌属)。     

浓香型白酒窖泥中一株细菌的分离鉴定

为了探讨Biolog微生物自动鉴定系统在窖泥微生物鉴定中的应用,试验从泸州老窖浓香型白酒发酵窖池窖泥中分离纯化得到1株细菌。经菌落特征观察和镜检后,由Biolog微生物自动鉴定系统鉴定为Bacillus cereus/thuringiensis B(蜡状芽孢杆菌/苏云金芽孢杆菌B)。     

青海茶卡盐湖嗜盐碱芽胞杆菌资源分析

采用3种不同的培养基,通过可培养法,从青海茶卡盐湖样品中共分离获得110株嗜盐碱芽胞杆菌.基于16S rRNA基因序列相似性鉴定及系统发育分析,得出这些菌株为芽胞杆菌10个属的41个种,它们与最近匹配模式菌株的16S rRNA基因序列相似性在96%~100%之间,以芽胞杆菌属为优势菌,共计25种83株;存在6个潜在新种.3种酶筛实验结果表明,87%的嗜盐碱芽胞杆菌菌株具有产酶能力,产蛋白酶70株,产纤维素酶81株,产木聚糖酶50株.青海茶卡盐湖中的芽胞杆菌种类丰富多样且能产多种酶,并且潜藏着新的微生物物种,研究结果可为嗜盐碱芽胞杆菌资源开发提供理论基础.     

一株聚丙烯酰胺降解菌株的分离培养及其系统发育分析

应用Hungate厌氧技术,从大庆油田聚合物配注站的母液罐中分离到一株水溶性超高分子量聚丙烯酰胺(HPAM)的降解菌株I8,该菌株为短杆状,G-,黑色圆形菌落,最适温度为38℃,最佳pH值为7.8,具有硫酸盐还原功能,产H2S气体,兼性厌氧.研究表明,该菌株能以HPAM为唯一碳源,降解侧链,部分官能团发生改变;浓度为600 mg/L时,20 d菌株生物降解率为63.17%,其溶液粘度下降效果显著.16S rDNA序列与Enterobacter cloacae(ECL251469)的相似性为98%,通过形态、生理生化、G C含量以及16S rDNA序列鉴定,初步鉴定可能为肠杆菌属的一个新种,暂时命名为Enterobacter HPAM Dcgraded Bacteria I8,I8菌株的分离为HPAM的生物降解提供了新的微生物资源.图4,参14.     

酒鬼酒制曲车间产淀粉酶细菌筛选和系统发育

采用平板水解圈法对酒鬼酒制曲车间空气的细菌进行产淀粉酶活性筛选,运用基于16SrRNA基因序列的分析法对高酶活菌株进行系统发育分析.研究结果表明,65株受试菌株中,有24.6%的菌株(16株)淀粉水解酶活性呈阳性,其中有4株(JSM 2145008,JSM 2155001,JSM 2155017,JSM 2175012)产淀粉水解酶能力较强.基于16SrRNA基因序列的系统发育分析表明,这4个菌株分别属于细菌域3个大的系统发育类群中3个科的3个属.菌株JSM 2145008属于放线菌门微球菌科,与节杆菌属(Arthrobacter)的氧化节杆菌的系统发育关系最为密切,它们之间的16SrRNA基因序列相似性高达99.8%,且在系统进化树上形成一个稳定的亚分支;菌株JSM 2155001和JSM 2175012属于异常球菌——栖热菌群异常球菌科的异常球菌属(Deinococcus),分别与该属的大琼异常球菌和云威异常球菌系统发育关系最为密切(序列相似性分别为99.6%和99.9%);菌株JSM 2155017属于厚壁菌门芽孢杆菌科,与芽孢杆菌属(Bacillus)的同温层芽孢杆菌系统发育关系最为密切(序列相似性为100%),它们以极高的自展值支持(boostrap value,100%)在系统进化树上聚在一起.上述实验结果表明,酒鬼酒制曲车间空气源细菌中存在较高比例的产淀粉酶菌株,且这些菌株具有较高的类群多样性.     

一株来源于深海热液区嗜热细菌的分离及鉴定

从西南印度洋热液区沉积物样品中分离纯化获得一株中度嗜热产芽孢杆菌,命名为M6.菌株M6为革兰氏阳性菌,短杆状,可成对.菌株M6的生长温度为35～65 ℃(最适生长温度60 ℃),生长pH为6.5～8.5(最适生长pH为7.0～8.0),生长NaCl质量分数为0～4%(最适NaCl质量分数为2%),生长盐度为0～80人工海水(最适盐度为40).16S rRNA基因相似性分析表明,菌株M6属于不产氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus),与Anoxybacillus rupiensis菌株同源性最高,达99%;但16S～23S rDNA 间隔区PCR扩增分析表明,该菌与同属菌株有较大差异.通过以上形态学、生理特征以及分子生物学鉴定,认为菌株M6为不产氧芽孢杆菌属的菌株.另外,菌株M6可分泌胞外高温淀粉酶.菌株M6胞内含有内生质粒,其大小约为10 kb,命名为pAB01.     

一株絮凝剂产生菌的筛选鉴定和培养条件优化

通过高岭土悬浊法考察微生物絮凝剂产生菌的絮凝活性,采用平板划线法从土壤样品中分离得到一株具有较高絮凝活性的菌株C412。根据菌落形态观察、生理生化实验和16S r DNA序列相似性比对,判定菌株C412为解淀粉芽孢杆菌。通过单因素法优化培养基,发现可溶性淀粉为最佳碳源;硫酸铵和牛肉膏复合为最佳氮源;添加适量的Na+和Mg2+有益菌株生长和絮凝活性提高。优化后的培养基组成为:15 g/L可溶性淀粉、1 g/L牛肉膏、3 g/L硫酸铵、1 g/L Na Cl、0.05 g/L Mg SO4·6H2O、5 g/L K2HPO4、2 g/L KH2PO4(p H=7)。菌株C412在此培养基中生长17 h后,菌体浓度(OD600)达到最大(3.18),其最大絮凝活性可达95.53%。从发酵上清液中提取的生物絮凝剂耐热区间(4~60℃)和体系工作p H范围(4~13)较为广泛。     

微生物絮凝剂产生菌的筛选及絮凝活性的研究

从土壤中筛选出8株具有絮凝活性的菌株,经复筛后得到1株絮凝活性较高的微生物絮凝剂产生菌C1,并以此为研究对象,分别考察了培养基中碳源、氮源、无机盐以及培养基初始pH值和培养温度等因素对絮凝活性的影响.研究表明,C1菌株在以葡萄糖为碳源、牛肉膏为氮源、初始pH6.0、培养温度30℃、培养时间为72h的条件下,所产絮凝剂对4%高岭土悬浊液的絮凝效率可达90.4%,显示出良好的应用前景.     

拮抗马铃薯干腐病病原菌活性菌株的筛选及鉴定

为寻找对马铃薯干腐病病原菌具有抑菌活性的菌株,本研究以4株马铃薯干腐病病原菌为靶标菌,采用平板对峙法分别测定了18株分离自青稞白酒糟醅菌株的抑菌活性。运用生理生化特征及分子生物学方法对活性菌株进行鉴定。结果表明:(1)筛选到活性菌株JZ1-4-10和JZ1-1-9,均对4株马铃薯干腐病病原菌有不同程度抑菌活性,且均对马铃薯干腐病病原菌青9A-2-6抑菌活性较高,抑制率分别为74. 12%和69. 22%。(2)经生理生化及分子生物学鉴定,确定菌株JZ1-4-10为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis),菌株JZ1-1-9为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。本试验研究表明菌株JZ1-4-10和JZ1-1-9对马铃薯干腐病具有较好的抑菌活性,有望开发为马铃薯新型微生物抑菌剂。     

青海固沙草根际微生态体系中微生物多样性分析

青海固沙草(Orinus kokonorica)是生长于干旱、高海拔极端环境,特产于青海的一种优势种禾本科植物。从青海固沙草根际采集土壤,对样品中的微生物进行了分离鉴定及微生物多样性分析。共分离得到纯培养菌株232株,隶属于15个属、23个种。数量和种类较多的是细菌,共112株,分别隶属于9个属的12个种,占可培养微生物的70%,单胞菌属占绝大部分;其次为放线菌43株,6个种,占总微生物量的27%;另含有1株酵母菌和4株真菌。该根际微生态体系中,可培养微生物Simpson多样性指数D=0.703,Shannon-Wiener指数H=13.877,Shannon-Wiener均匀度指数E=1.766,多样性等级为Ⅰ级以上。该研究结果表明:青海固沙草极端生境微生态中的可培养微生物,不仅丰富多样,而且具有对极端环境的应变机制为寻找和开发极端生境微生态的功能微生物资源提供了参考。     

复合异养脱氮菌群脱氮性能研究

采用传统微生物分离纯化方法,从焦化废水活性污泥中筛选得到4株高效去除氨氮(NH4+-N)和总氮(TN)的异养硝化细菌C16、C17、YX1、YX2。经96h培养,4株菌的氨氧化率均在90%左右,TN去除率也达到了68%以上。组合试验研究表明,4株菌组成的复合菌在降解NH4+-N和去除TN时均比单一菌株和其他组合菌的效果好。经24h培养,四株菌组成的复合菌群的氨氧化率可达95%,TN去除率也达到了91%。     

德夯嗜盐耐盐菌抗菌活性筛选和系统发育

以8个敏感菌株作为指示菌,采用琼脂扩散法,对分离自湖南省德夯峡谷(28°15′~28°43′ N,109°30′~109°45′ E)普通非盐环境土壤样品中的294株嗜盐及耐盐细菌进行抗菌活性筛选,并对其中具有较强抗菌活性的菌株进行基于16S rRNA基因序列的系统发育分析.受试菌株中有109株的发酵产物具有抗菌活性（阳性率37.1%）,其中5个菌株具有较强抗菌活性（JSM 102030,JSM 102052,JSM 102054,JSM 102066,JSM 102082）.基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,这5个菌株分别属于细菌域(Eubacteria)的3个门(Actinobacteria,Firmicutes,Proteobacteria)中的3个科(Bacillaceae,Halomonadaceae,Nocardiopsaceae)的4个属,菌株JSM 102030属于Halobacillus属,与该属已知种Halobacillus trueperi DSM 10404T的系统发育关系最为密切（序列相似性为99.1%）,JSM 102052和JSM 102054属于Halomonas属,与Halomonas alkaliphila 18bAGT的系统发育关系最为密切(序列相似性为98.3%),JSM 102066属于Nocardiopsis属,与其系统发育关系最为密切的是Nocardiopsis prasina DSM43845T (序列相似性为99.3%),JSM 102082与Oceanobacillus属的Oceanobacillus kimchii X50T以99.6%的16S rRNA基因序列相似性聚在一起.研究结果表明,分离自湖南省德夯峡谷普通非盐环境土样的嗜盐及耐盐细菌中存在较高比例的抗菌活性菌株,且这些细菌具有较为丰富的系统发育多样性.     

高产5-氨基乙酰丙酸光合细菌株hemA基因的克隆与序列分析

对从不同生态环境中分离得到的20株光合细菌,进行5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)的产量检测,结果显示一株分离自广州市云溪公园池塘底泥的菌株R5,其5-ALA 产量最高,达4.92 mg/L.根据GenBank上公布的5-氨基乙酰丙酸合成酶hemA基因序列,设计引物进行hemA基因的克隆.结果表明,菌株R5的hemA基因序列长1 230 bp, 不含HindⅢ酶切位点,G C为64.68%,编码一个409个氨基酸的酶蛋白,分子质量为44.9 ku,与Rhodopseudomonas palustris KUGB306菌株的hemA基因序列相似性为98.6%,氨基酸序列相似性为100%.系统发生树显示,菌株R5与Rhodopseudomonas palustris处在一个分支,显示菌株R5可能是Rhodopseudomonas palustris,这与微生物鉴定实验的结果一致.本研究克隆的高产5-氨基乙酰丙酸菌株的hemA基因,为后期获取高产5-ALA的基因工程菌打下基础.     

东太平洋结核区细菌调查及鉴定

对东太平洋结核区6个站点沉积物样品进行细菌培养和数量统计,发现各个站点间的细菌总量变化幅度较大,站点E2003-01的细菌量最多;细菌量纵向分布规律基本是从表层到深层逐渐递减.对所获得的菌株进一步用RFLP和16S rDNA 基因序列分析,发现所获得的菌株主要来自变形菌门(Proteobacteria)的α、β、γ亚群和放线菌门(Actinobacteria),厚壁菌门(Firmicutes) 等类群.此外还发现了与已知细菌菌种相似性在97%～95%之间的有12株,它们可能是新种;与已知细菌菌种相似性小于或等于95%的有4株,它们可能是新的属种.     

高活性微生物絮凝剂产生菌的筛选与培养条件优化

从郑州市五龙口污水处理厂活性污泥中分离出8株具有絮凝活性的微生物菌株,复筛得到1株高活性微生物絮凝剂产生菌,测定了该菌株不同培养条件下发酵液对高岭土悬浊液的絮凝率.结果显示, 蔗糖20 g/L,NaNO3 1.5 g/L,K2HPO4 1 g/L,KCl 0.5 g/L,MgSO4·7H2O 0.5 g/L,FeSO4 0.01 g/L,pH 12,温度35 ℃,摇床转速150 r/ min,培养时间74 h为该菌株的最适培养条件.在该培养条件下,该菌株对高岭土悬浊液的絮凝率达94.98%.     

焦炭固定溶藻细菌T5的溶藻效果初探

以水华爆发常见藻类栅藻、小球藻、铜绿微囊藻为实验藻类,将从活性污泥微生物系统中分离出的一株溶藻细菌T5作为实验菌株,并将该株溶藻细菌固定于以焦炭为填料的反应器内,对其溶藻效果进行了研究.结果表明:该株溶藻细菌7 d挂膜成功;最佳水力停留时间(HRT)为4 h;在HRT为4 h时,溶藻细菌对藻密度的平均去除率为83.11%,对藻类叶绿素a(Chla)的平均去除率为80.38%,对NH3-N平均去除率为63.05%,对CODMn平均去除率为39.03%.对溶藻细菌T5进行生理鉴定,16S rDNA序列分析结果表明:该菌株为芽孢杆菌属.