人雄激素芳香化酶基因内含子中启动子的研究

利用核酸外切酶Ⅲ（ＥｘｏⅢ）对人雄激素芳香化酶基因的２４００ｂｐ片段的５’端进行系列缺失，并通过转染实验，分析了２４００ｂｐ片段３’端区域的功能作用，在雄激素芳香化酶基因第２外显子的下游区检测到１个具有启动子作用的功能元件，通过序列分析，发现该元件位于雄激素芳香化酶基因的第２内含子中。该启动子同样受到位于雄激素芳香化酶基因第１内含子中沉默因子的抑制作用。该启动子能够启动不同基因的表达，并且具有较强     

去势治疗对前列腺癌患者骨密度的影响

目的探讨去势治疗对前列腺癌患者骨密度（Bone mineral density,BMD）的影响。方法49例完成骨密度测定的前列腺癌患者分两组。拟去势组21例,在开始去势治疗前即已完成骨密度测定。去势组28例,均为去势治疗1年以上患者。所有患者骨密度测定均采用双能X线吸收法（DEXA法）,骨密度测定部位为腰椎（L2-4）、股骨颈。结果拟去势组62％、去势组82％均存在不同程度的BMD水平下降。拟去势组中,腰椎（L2-4）Z评分为-0．9±0．7,股骨颈Z评分为-0．6±0．5;而去势组中,腰椎（L2-4）Z评分为-1．8±1．1,股骨颈Z评分为-1．6±1．0。可见,与拟去势组相比,去势组患者BMD水平明显偏低,差异有统计学意义（腰椎BMD比较t=3．33,P〈0．01）。股骨颈BMD比较t=4．17,P〈0．01）。结论去势治疗与前列腺癌患者BMD水平下降明显相关。     

米非司酮对大鼠子宫内膜异位症芳香化酶表达的影响

目的探讨芳香化酶P450与子宫内膜异位症（内异症）的关系及米非司酮治疗内异症的机制。方法建立大鼠子宫内膜异位症动物模型，将大鼠随机分为3组，即空白组（未建立模型组）、对照组及米非司酮药物组。利用免疫组织化学方法，观察各组异位内膜中芳香化酶（P450arom）的表达。结果健康大鼠子宫内膜中无P450arom的表达，内异症模型鼠在位、异位内膜中均出现P450arom的异常表达；米非司酮药物治疗组异位内膜中P450arom的表达明显低于对照组异位内膜（P〈0．01）。结论大鼠子宫内膜异位症异位内膜中存在P450arom的异常表达，米非司酮治疗内异症的机制可能与抑制异位内膜中P450arom的表达。减少异位内膜局部雌激素产生有关。     

米非司酮对大鼠子宫内膜异位症芳香化酶表达的影响

目的探讨芳香化酶P450与子宫内膜异位症(内异症)的关系及米非司酮治疗内异症的机制。方法建立大鼠子宫内膜异位症动物模型,将大鼠随机分为3组,即空白组(未建立模型组)、对照组及米非司酮药物组。利用免疫组织化学方法,观察各组异位内膜中芳香化酶(P450 arom)的表达。结果健康大鼠子宫内膜中无P450 arom的表达,内异症模型鼠在位、异位内膜中均出现P450 arom的异常表达;米非司酮药物治疗组异位内膜中P450 arom的表达明显低于对照组异位内膜(P<0.01)。结论大鼠子宫内膜异位症异位内膜中存在P450 arom的异常表达,米非司酮治疗内异症的机制可能与抑制异位内膜中P450 arom的表达,减少异位内膜局部雌激素产生有关。     

米非司酮对大鼠子宫内膜异位症芳香化酶表达的影响

目的 探讨芳香化酶P450与子宫内膜异位症(内异症)的关系及米非司酮治疗内异症的机制.方法 建立大鼠子宫内膜异位症动物模型,将大鼠随机分为3组,即空白组(未建立模型组)、对照组及米非司酮药物组.利用免疫组织化学方法,观察各组异位内膜中芳香化酶(P450 arom)的表达.结果 健康大鼠子宫内膜中无P450 arom的表达,内异症模型鼠在位、异位内膜中均出现P450 arom的异常表达;米非司酮药物治疗组异位内膜中P450 arom的表达明显低于对照组异位内膜(P＜0.01).结论 大鼠子宫内膜异位症异位内膜中存在P450 arom的异常表达,米非司酮治疗内异症的机制可能与抑制异位内膜中P450 arom的表达,减少异位内膜局部雌激素产生有关.     

电针对去势雌性大鼠激素及受体表达变化的调整机制

探索电针对去势雌性大鼠体内雌激素水平及子宫组织内雌激素受体表达变化的调整机制 .选用 4 5月龄的雌性SD大鼠 2 6只 ,随机分成正常对照、病理对照和病理治疗三组 ,实验组动物手术行双侧卵巢切除术建立更年期病理模型 ,以电针动物“关元”、“中极”、双侧“子宫”、双侧“三阴交”穴为针刺部位 ,连续治疗 10天后用放射免疫分析(RIA)法测定血清雌二醇 (E2 )水平及SABC免疫组织化学染色法测定子宫内雌激素受体 (ER)表达量 .结果发现电针去势雌性大鼠可使其子宫组织内下降的雌激素受体表达量有所回升 ,并能够升高其血清雌二醇浓度 .表明电针作用对受试模型下的动物子宫雌激素受体表达以及血清雌二醇浓度的改变有着负反馈的作用 ,提供了电针疗法用于治疗更年期综合症的一些实验依据     

芳香化酶、雌激素、雌激素受体α和β在文昌鱼消化管上皮和肠神经元的免疫定位

用免疫组织化学技术和鼠抗人胎盘芳香化酶抗体、兔抗人雌二醇抗体及雌激素受体ER-α与ER-β多克隆抗体对文昌鱼消化管进行免疫组织化学定位.研究结果显示,芳香化酶、雌激素和雌激素受体α和β的免疫活性蛋白在肝盲囊、中肠前部和后部的上皮细胞及肠神经元表达,后肠显免疫阴性反应,表明文昌鱼肠道像哺乳类大鼠胃壁细胞和肠上皮细胞一样,能够合成雌激素并具有内分泌作用.提供了确凿的形态学证据,并对阐明雌激素在调节文昌鱼肠道消化功能及其作用机制以及雌激素功能的演化有十分重要的理论和学术意义.     

使用切片原位杂交定位定量BaP与EE2对卵形芳香化酶表达影响的探讨

通过对青鲻的染毒观测,使用组织切片技术与原位杂交相结合的方法,定位定量苯并（a）芘（BaP）与17α-乙炔基雌二醇（EE2）对初级卵母细胞中卵形芳香化酶表达影响的研究,来确定环境污染物质对生殖系统相关基因表达的影响．结果表明：BaP降低了卵形芳香化酶的表达强度（P〈0．05）,而EE2增强了卵形芳香化酶的表达强度（P〈0．05）．     

ApoE基因型对JAR细胞系芳香化酶mRNA转录的影响

载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)和雌激素之间的相互作用机理被认为与阿尔兹海默氏病(Alzheimers disease,AD)的病理过程密切相关.芳香化酶是体内雌二醇合成的限速酶.为了检测ApoE不同亚型对芳香化酶表达的影响,在JAR细胞系中转染不同ApoE基因型的质粒,在转染效率没有差异的情况下,利用RT-PCR技术检测芳香化酶的表达情况,结果发现E2组的芳香化酶mRNA表达(118.37±26.46%)显著高于E3(95.25±23.21%)和E4(92.20±14.69%)组(p<0.05),而E3组和E4组之间没有显著差异(p=0.771).该结果提示不同亚型的ApoE可能通过调节芳香化酶的表达来影响雌激素的分泌,从而参与AD的发病机制.     

雌激素受体辅助抑制因子REA对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响

雌激素在前列腺癌转移中的作用已有报道,但其作用机制尚不清楚.研究了雌激素受体辅助抑制因子REA在前列腺上皮细胞和前列腺组织中的表达及其对前列腺癌细胞生物学功能的影响.发现在前列腺癌细胞和组织中随恶性程度增加REA的表达逐渐增强.划痕愈合实验证实了REA能够明显促进前列腺癌细胞的迁移,而且其促进作用与雌激素和ER存在着协同作用.这些研究结果为揭示雌激素效应及其受体亚型的表达水平在前列腺癌转移中作用机制的探讨奠定了实验基础.     

雌激素剂量对动情周期大白鼠子宫及卵巢中明胶酶-A活性的影响

本实验采用ＳＤ大白鼠为实验材料,研究了雌激素与动情周期子宫和卵巢中明胶酶－Ａ活性变化的关系,结果显示：Ｅ２对动情后期子宫及卵巢中激活形式明胶酶－Ａ活性均有促进作用,明胶酶Ａ的活性变化与Ｅ２剂量变化呈正比关系,但卵巢中明胶酶－Ａ活性明显低于子宫。Ｐ４（孕酮）对处于动情前期大鼠子宫中明胶酶－Ａ活性没有显作用,在对动情前期卵巢的作用中虽能看出明显胶酶－Ａ活性随Ｐ４剂量的增加而逐渐下降的趋势,但没有显     

氯化钴对人eNOS基因启动子转录活性的影响

目的:建立氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12(HUVEC-12)缺氧模型,研究人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因的启动子活性变化.方法:用含不同浓度氯化钴的培养基培养细胞,检测细胞培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH)含量;将已构建的pGL2-eNOS-p质粒转染HUVEC-12细胞,利用双荧光素酶报告基因技术检测在不同浓度氯化钴和不同作用时间下的eNOS启动子转录活性.结果:氯化钴刺激下HUVEC-12细胞培养上清的LDH含量随氯化钴作用浓度增加而提高;氯化钴刺激后转染细胞的eNOS启动子活性呈现随氯化钴剂量增加而升高的趋势,随作用时间的延长而上升的趋势.结论:成功建立氯化钴诱导HUVEC-12细胞缺氧的体外模型.     

MGLL在前列腺癌组织中的表达及其对癌细胞生长的调控作用

目的:探索单酰甘油脂酶(MGLL)在前列腺癌(PCa)中的表达及其临床预后.方法:利用基因表达谱交互分析(GEPIA),Oncomine及人类蛋白质图谱(THPA)生物信息学工具,分析癌症公共数据库TCGA及GEO中PCa及对照样本中MGLL的mRNA及蛋白表达情况,基于TCGA数据库中的PCa病人样本信息进行生存分析...     

马克斯克鲁维酵母表达系统菊粉酶启动子的改造及活性研究

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)作为一种食品安全级酵母,具有生长快,生物量高等特点,是一种新型的重组蛋白表达的宿主系统.启动子是供RNA聚合酶识别和结合的DNA序列,调控着转录的起始过程,直接影响基因的表达水平.本文通过易错PCR技术对马克斯克鲁维酵母菊粉酶启动子Pinu进行两轮突变,以阿魏酸酯酶(Est1E)作为报告基因,经筛选、鉴定获得了5个可以显著提高外源蛋白表达量的突变型启动子Pm1D81、Pm1F138、Pm2Q89、Pm2M73、Pm2X47,报告蛋白Est1E的酶活性是启动子改造前的2.31,2.65,5.01,5.40,5.43倍.随后测试了启动子Pm2X47对外源蛋白甘露聚糖酶和赤霉烯酮降解酶表达的影响,结果显示这两种酶的表达量均有提高,分别是启动子改造前的3.57倍和4.13倍.上述结果提示,改造后的菊粉酶启动子在提高外源蛋白表达水平方面具有一定的通用性,可作为新型候选表达元件,以提升马克斯克鲁维酵母重组表达外源蛋白的能力.     

多能硫杆菌RubisCO基因的亚克隆及各种启动子对其表达的影响

将多能硫杆菌ＲｕｂｉｓＣＯ基因从两个方向亚克隆到ｐＢＲ３２２和ｐＫＫ２２３－３载体上，通过酶切的方法对各种质粒的插入方向进行了确证。并进一步对这两种插入方向的质粒在大肠杆菌中的表达情况进行了酶活性的测定，该基因片段在ｐＫＫ２２３－３载体的ｔａｃ启动子的启动下，表达活性比ｌａｃ妄动子以及ｐＢＲ３２２载体上的Ｐ１和Ｐ２启动子高。     

茴香霉素对镇痛耐受及脑线粒体钙的影响

本文研究了蛋白质合成抑制茴香霉素对吗啡、丁丙诺啡和电针耐受发展的影响,监用铽离子探针测定被处理动物不同脑区的线粒体一Ca~2+水平。结果表明,茴香霉素能抑制吗啡和电针的耐受,但不能抑制丁丙诺啡耐受发展。痛阈与下丘脑和导水管周固灰质区线粒体-Ca~(2+)水平有良好的平行关系。本文还对Tb~(3+)与线粒体上色氨酸和酪氨酸的结合及影响荧光测定的因素进行了探讨。     

启动子对外源基因在转基因植物中表达的影响

将来自ｐＢＩ１２１质粒的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子片段插入到ｐＢＩ１２１的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子与ＧＵＳ基因之间，构建了串联的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子载体ｐＬＢ３８．通过三亲交配，将ｐＢＩ１２１及ｐＬＢ３８分别转移到含ｐＧｖ３８５０的农杆菌中，成为适合本研究的双元载体。以叶圆盘转化法将外源基因转入烟草，获得了２种转基因植株。经ＤＮＡ分子杂交、ＮＰＴⅡ点分析、ＧＵＳ荧光定性及定量分析，证明外源基因已整合进烟草基因组并获得表达。ｐＬＢ３８的ＧＵＳ表达量为ｎＢｌ１２１的３～４倍，这表明启动子数目的不同会直接影响其启动基因的表达水平。     

性激素对大鼠前列腺腹叶酸性磷酸酶影响的组织化学研究

成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠８０只分为５组：即对照组（Ｎ组）、正常用雌激素处理组（Ｎ＋Ｅ２）、阉割组（Ｃ组）、阉割后用雌激素处理组（Ｃ＋Ｅ２组）和阉割后用雄激素处理组（Ｃ＋Ｔ组）。于处理后第１、２、３、６和１２周分５批取材。用酶组化方法显示大鼠前列腺腹叶（ＲＶＰ）酸性磷酸酶（ＡＣＰ）的活性变化。结果表明：Ｎ＋Ｅ２组酶活性明显增强，Ｃ组酶活性逐渐减弱，直到消失，Ｃ＋Ｅ２组和Ｃ组结果相似，仅第２周稍有增加，Ｃ＋Ｔ组酶活性变化不明显，提示ＲＶＰ上皮细胞内ＡＣＰ的活性变化与大鼠体内性激素的含量和平衡状态密切相关。     

雪芙蓉胶囊对大运动量训练大鼠运动能力及下丘脑室旁核一氧化氮合酶表达的影响

目的：观察中药雪芙蓉胶囊对雄性大鼠力竭游泳时间、血清雄激素水平及下丘脑室旁核神经元型一氧化氮合酶（nNOS）表达的影响。方法：将30只雄性成年大鼠随机分为3组,即安静对照组、游泳组、中药游泳组。中药游泳组每天灌服雪芙蓉胶囊,28天后测试大鼠力竭游泳时间,检测血清睾酮含量,用免疫组织化学方法结合图像半定量方法对nNOS神经元的数量、面积及灰度进行测量和分析。结果：与游泳组比较,中药游泳组大鼠力竭游泳时间延长、血清睾酮增高（P〈0.01,P〈0.05）;nNOS免疫阳性细胞数量和阳性产物面积表达均增加（P〈0.05）,灰度增加（P〈0.05）。结论：中药雪芙蓉胶囊可提高大鼠的运动能力,延缓中枢疲劳,机理可能与此中药提高力竭游泳大鼠血清睾酮水平,同时增强下丘脑室旁核nNOS的表达有关。     

温度对中华倒刺鲃静止代谢及低氧耐受的影响

为考查温度对鱼类静止代谢率及低氧耐受能力的影响,本研究以中华倒刺鲃（Spinibarbus sinensis）幼鱼为对象,分别在10、20和30℃条件下驯化2周,随后将实验鱼置于密闭呼吸室中测定静止代谢率,并通过“双线法”推出临界氧压（Pcrit）等相关参数。实验结果显示：随着温度的上升,中华倒刺鲃幼鱼静止代谢率（MO2rest）、Pcrit点所对应代谢率（MO2pcrit）以及临界代谢范围（MMS）均显著上升（p〈0.05）;MO2rest的温度系数（Q10）在10-20 ℃和20-30 ℃间分别为2.54和1.27。而中华倒刺鲃幼鱼Pcrit却不受温度变化的显著影响,表现出一定的保守性。研究表明,中华倒刺鲃幼鱼Pcrit随温度的变化趋势并不与 MO2rest的变化趋势相吻合,这提示随温度的改变中华倒刺鲃可能还启用了其他生理、生化和（或）行为学机制。