枯草杆菌BF7658高产菌株HIB22的选育

我们以枯草杆菌(Bacillus subtilis)BF—7658为出发菌株,通过自然分离,从1200株菌株中获得一株高产菌株HIB22,摇瓶酶活为440u/ml,经6次传代后仍保持原有性状。用7500立升和10000立升发酵罐进行21批扩大试验,平均酶活355u/ml,其中8批稳产试验平均酶活397u/ml。单罐最高酶活520u/ml。     

甘薯曲霉AS3.324在食醋酿造中的应用研究

采用甘薯曲霉AS3.324固态制麸曲、固态酒精发酵和固态醋酸发酵生产工艺,对在甘薯曲霉AS3.324食醋酿造中的应用进行了研究.结果表明:小试(曲盘曲)糖化酶活力达到897.1 u/g,生产用麸曲(发酵架曲)平均糖化力达到1 035.55 u/g,多批次食醋发酵结果其主料出醋率平均达到7.9 kg/kg(HAC 3.5%).     

产生淀粉糖化酶菌株的分离以及酶性质的初步研究

从霉变物、土壤、醋曲、醋醅等分离出四株产生淀粉糖化酶且酶活较高的菌株,选取酶活最高的菌株vin-1作为出发菌株,初步鉴定为Aspergillus niger,其生淀粉糖化酶活力达到342U/g(干曲),酶最适作用温度为55℃,酶在pH值3．5～4．5之间有较高的酶活,最适pH值为4．0,Ca~(2+)、Mg~(2+)对酶有一定的激活作用,而Fe~(2+)、K~+、Fe~(3+)、Cu~(2+)、Mn~(2+)都有较强的抑制作用,Mn~(2+)抑制作用最大,达到近50%。     

中性蛋白酶抗噬菌体生产菌株KRP406的选育

从中性蛋白酶产生菌枯草芽孢杆菌ys94菌株出发,用混合噬菌体选育出KRP406抗噬菌体变异株.在摇瓶条件下,结果表明,KRP406抗株抗多种噬菌体和不同的混合噬菌体,噬菌体从异常发酵液等获得与制备.在同时间的工业生产中,KRP406抗株的平均酶活力655lu/ml,此酶活超过原生产菌株ys94产生的酶活587u/ml.     

食品级α—淀粉酶清液发酵高活性菌株的选育

以枯草杆菌H_(19—7—34)为出发菌株,经紫外线诱变及热处理多次交替处理,获得高产稳定株43—9,该菌株在C/N为1.34,pH6.5～7.0,500ml的三角瓶装量30ml的清液发酵培养基中,用旋转式摇床,转速228r·p·m,37±1℃发酵64hrs,α—淀粉酶平均活性达到526u/ml,最高达550u/ml,比出发菌株提高53.3％,进一步降低了食品用酶的成本,有利于形成大规模工业化生产。     

食品用α—淀粉酶清液发酵新工艺的研究

从BF—7658α—淀粉酶生产用菌株出发。选育出的H19—7—34菌株能适应以淀粉的酶水解液、豆饼碱水解液和无机盐组成的清液发酵培养基和发酵过程中不补料的工艺。在5001罐二级发酵试验中,α—淀粉酶活力平均可达343u/ml。这种清液发酵新工艺所得发酵酶液具有杂质少,过滤速度快,便于精制,提取总收率高(68.8～83.8％),成本低等优点。     

福建红曲中的红曲霉的生理生化特性研究

从福建红曲中分离纯化出6株红曲霉,经菌落形态和生理生化实验,鉴定其为紫色红曲霉(Monascus purpu-reus Went).对6株红曲霉分别进行纯种制曲,跟踪其生物量、糖化酶活力和色价的变化,测定纯曲的酯化酶活力.结果表明:6株红曲霉制曲时,M-4生长最快,92h达到最大生物量,为0.098g(干菌体)·g-1(干曲);M-1糖化力最高,为4217U·g-1(干曲);M-4和M-6产糖化酶的活力分别为4201和4177U·g-1(干曲);M-5产色素能力最高,色价为435U·g-1(干曲).M-4纯曲中的酯化酶活力最大,达170U·g-1(干曲).     

菊粉酶高活力菌株的筛选和发酵条件的研究

从101林酵母中筛选出一株高菊粉酶活力的菌株克鲁维酵母(Kluyveromyces sp.)y-85,该菌株菊粉酶的合成受木糖或菊粉的诱导,产酶适宜的培养基组成(％)为:菊芋抽提液7.0,尿素2.0,玉米浆3.0,产酶的最适温度和pH分别为30℃和5～6,在这些条件下,摇瓶培养24h,该菌株产生的酶活力可达1403u/ml。     

红曲霉固态发酵产糖化酶及酸性蛋白酶条件的优化

从8株红曲霉中筛选出红曲霉MQ7作为高产糖化酶和酸性蛋白酶的供试菌株,采用固态发酵方法测定在不同发酵温度、底物料液比、大米和麸皮比例条件下的产酶情况.利用正交实验优化固态发酵产酶过程,确定该菌株产酶最佳发酵条件为:发酵温度30,℃,底物料液比(g∶mL)20∶25,大米麸皮比例(g∶g)17∶3.在此条件下,糖化酶活力达1,641.69,U/g,酸性蛋白酶活力达151.09,U/g.同时研究了NaCl含量对红曲霉酶活力的抑制作用,当NaCl质量分数达到18.92%时,红曲霉MQ7产糖化酶活力下降64.8%,酸性蛋白酶活力下降85.6%.     

饲用复合酶生产菌株的诱变选育

通过UV诱变复合酶产生菌黑曲霉筛选得到一突变株JW001,该菌株可同时发酵产生高活力的多酶系,其中纤维素酶和酸性蛋白酶活力分别为18 379 u/g和6 472 u/g,比出发菌株分别提高122%和92%.优化确定了曲盘固体发酵工艺,并进行了复合酶动物应用试验,试验表明黑曲霉JW001菌株发酵生产的饲用复合酶制剂对不同畜禽均有很好的饲喂效果.     

糖化酶静态固体发酵工艺研究

采用静态固体发酵工艺对糖化酶生产菌在固体基质中的发酶工艺进行了试验选择。结果表明,该工艺具有投资少、工艺和设备简单,节省能源等优点。工业化生产平均酶活力达30000单位/克左右.     

高糖化酶和高酯化能力的红曲霉菌株筛选

红曲霉除了药用价值外,其发酵产物还有糖化酶、酯化酶,在酿酒和酿醋生产中起到糖化和生香等有益作用。本实验从25株红曲霉菌种中筛选出了具有较高糖化酶、高酯化能力的红曲霉菌株f2,f7,f8,f13,f14,经过进一步筛选,确定f13的糖化酶活力和酯化能力都较高。高糖化酶、高酯化能力红曲霉菌株的获得可为今后人工强化产酯大曲的生产,提高原料的利用率,改进产品风味,提高产品品质提供菌种资源。     

茅台酒曲中产淀粉酶细菌分离及性质

从茅台酒曲中分离出产α淀粉酶优良菌株,经鉴定为芽孢杆菌属。在这些菌株中,所产α-淀粉酶以中温型为主,最适宜温度在50~60℃之间,也分离到一株最适宜温度为80℃高温型酶的菌株。同时研究了发酵培养基中碳氮源比对一株芽孢杆菌酶活力的影响及酶活力与培养时间的关系,结果表明,当碳氮比为9∶4 5时酶活力较高,酶活力在生长周期稳定期后期到死亡期达到最高。     

高温大曲中筛选产纤维素酶的耐高温芽孢杆菌

从高温大曲中筛选出产纤维素酶的芽孢杆菌1株,进行形态特征、生化鉴定和16S rDNA序列分子鉴定,该菌株鉴定为Bacillus cereusFrankland.对该菌株进行产酶摇瓶液体发酵,测定其内切纤维素酶活力和外切纤维素酶活力分别为260.32,87.22u.mL-1,对该菌株进行产酶固态发酵,测定其内切纤维素酶活力和外切纤维素酶活力分别为556.64,121.47u.mL-1.酶的稳定性实验显示该菌株产纤维素酶在60℃以下和在pH4～8范围内具有良好的热稳定性和pH稳定性,利用响应面法优化固态发酵产酶培养基,优化后测定纤维素酶活提高至1 643.27u.mL-1.     

高活力碱性蛋白酶产生菌的选育与发酵放大

为了选育高活力碱性蛋白酶产生菌株.采用复合诱变(紫外照射、NTG、离子注入)方法,结合平板初筛与摇瓶复筛.获得一株高产突变株HAPN-169,其酶活力为3.5×10 u/mL.高产菌株HAPN-169根据气液接触中体积传氧系数kLa相同的原则发酵放大(7L,30L,200L),其发酵参数为:温度34℃,装液系数0.7,接种量5%,使溶氧维持在20～30%,控制发酵过程pH不低于7.0.在7L发酵罐,发酵时间为54小时,酶活力为3.6×104u/mL;在30L发酵罐,发酵时间为50小时,酶活力为3.86×104u/mL;在200L发酵罐,发酵时间为36小时,酶活力为4.2×104u/mL.发酵液pH在7.5左右时,酶活力在峰值,发酵终点一到,必须马上下罐.该结果对为我围碱性蛋白酶工业发展提供一定的基础.     

糖化酶的分批发酵动力学研究

用国内常规糖化酶生产菌株黑曲霉ＵＶ－１１,利用５升全自动发酵罐培养,在以淀粉为碳源,ＮＨ４Ｃｌ为氮源的合成培养基中,３３℃,ｐＨ４．５条件下进行分批发酵,菌体比生长速率为０．０２～０．０３１／ｈ时,糖化酶的比生产速率可达最大,为１５００～１８００ｕ／ｇ．ｈ,酶活力为２１９０ｕ／ｍｌ。     

固定化糖化酶性质及其应用的研究

以聚乙烯醇复合凝胶作为载体固定化糖化酶,最终酶活力达到1558μ/g干胶,酶活回收率为30.2%.用该固定化酶在pH4.6,45℃下进行连续操作.实验结果表明,10%～15%的淀粉液经过水解后,DE值均高于95%,产物转化率最高可达到98.2%,生产强度最高为28.9g/L·h,可连续使用24～28d.研究表明该固定化酶反应体系在高底物浓度下的操作稳定性和重复使用性较好.     

产脂肪酶菌株Acinetobacter calcoaceticus UN9的诱变选育

本实验菌株醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)M1-7的最佳紫外诱变时间为60,s.利用紫外诱变后涂布到添加不同脂肪酶底物和分解产物的分离培养基,筛选出具有抗性的正突变株.其中柠檬酸钠抗性突变菌株UN9最高酶活力达15.960,U/mL,比出发菌株提高了130.97%,远远高于琥珀酸钠、正丁酸、正己酸、三丁酸甘油酯等抗性突变菌株.经5次传代后,菌株UN9遗传性能稳定,平均酶活力为15.866,U/mL.     

高活力碱性蛋白酶菌种的选育

以地衣芽孢杆菌XP2为出发菌株,通过采用60Coγ射线,NTG和热处理方法筛选得到碱性蛋白酶变异菌株H26。此菌株经过连续的传代保存,表现出良好的遗传稳定性。该菌株产酶达32000u/ml,比亲株提高68%。     

纳豆激酶产生菌的固体发酵参数优化

对影响纳豆激酶产生菌固体发酵时产酶影响因子如碳源/氮源、含水量、温度、pH和培养时间等进行了优化.实验结果表明,菌株1适宜的固体发酵产酶培养基豆粕:麸皮比为3∶1;菌株2适宜的固体发酵产酶培养基豆粕:麸皮比为1∶1时产酶活性最高;菌株1适宜的培养基含水以50%最好,菌株2以70%最好;培养基初始pH均在7.0时酶活最高;发酵温度均以25℃最好,不易超过30℃;两个菌株的适宜发酵时间分别为36 h(菌株1)和72 h(菌株2).在优化发酵条件下,两个菌株单位发酵物中纤溶酶平均酶活力可分别达到1 407.25 U/g(菌株1)和953 U/g(菌株2).