猪肾溶菌酶的纯化和部分性质研究

猪肾溶菌酶提取液经过正丁醇脱脂,（NH4）2SO4沉淀,得到粗酶液,再经过CM—Sepharose FF阳离子层析柱和Sephacryl S-100凝胶过滤层析纯化得到电泳纯的溶菌酶．该酶的比活力为162．45,提纯倍数为113．6,回收率为16．89％．该酶对溶壁微球菌作用的最适温度为45℃,最适作用的pH为6．0,在50℃以下和pH4．5～9．0之间都有较好的稳定性．酶分子量约为15．0kd,其米氏常数为0．0135g／mL．     

猪脾血红素加氧酶的纯化和某些性质研究

通过DEAE——纤维素层析.羟基磷灰石层析及Sepharose CL-6B层析,从猪脾中获得了纯的血红素加氧酶。纯化的酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳及SDS-聚丙烯酰胺电泳中均呈现现单一条带。测得该酶分子量约为30500道尔顿,含272个氨基酸残基。氨基酸组成分析表明该酶中谷氨酸、谷氨酰胺含量丰富,而半胱氨酸和色氨酸含量低。在280nm处具有较低的消光系数(E1%1cm=8.12),而在406nm处具有强烈的光吸收。Triton×-100和EDTA对酶有稳定作用。     

黄鳝超氧化物歧化酶的纯化和部分性质研究

黄鳝超氧化物歧化酶粗酶液，经过正丁醇脱脂，丙酮分级沉淀，DEAE-琼脂糖离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤，从黄鳝中分离纯化获得铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)，并对其性质进行研究，最终该酶的比活力为1500U／mg，提纯倍数为368．5．回收率为24．7％．该酶对KCN不敏感．而对H2O2敏感，对热较稳定，对酸碱有较强的耐受性，抗胃蛋白酶的破坏，聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦电泳结果表明：纯化酶蛋白呈一条带，酶分子量约为85kD，亚基分子量约为16．5kD，等电点为7．15。     

热杆菌素YN8674的初步纯化和部分理化性质

采用离心、过滤、浓缩、葡聚糖凝胶柱层析等方法对热杆菌素ＹＮ８６７４进行了初步纯化,经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测初步纯化样品还有两条谱带。研究了初步纯化样品对热、４℃贮存期、ｐＨ和用五种酶处理后的剩余活性,结果表明,热杆菌素ＹＮ８６７４是一种极其稳定的抑菌物质,经１２１℃、１５磅高温高压处理３０ｍｉｎ后还残存３．１％的活力,抑菌圈仍清晰可见;４℃冰箱中贮存６０ｄ,其活性几乎不受损失;经核糖核酶、纤维素酶     

灵芝漆酶的分离纯化及其部分酶学性质研究

将灵芝（Ganoderma lucidum）漆酶经过Sephadex G-75和DEAE-Sepharose Fast Flow两步纯化,获得具有3个同工酶的组分,并且纯度提高了81倍,酶活回收率高达83.9%。以ABTS为底物,漆酶最适pH值是2.2～2.6,在pH值4.6～7.8范围内稳定;最适温度45℃,在低于45℃时较稳定。大部分金属离子、酸根离子对灵芝漆酶普遍有抑制作用,除盐可以提高漆酶活力。     

普鲁兰酶的纯化及其性质

采用ＤＥＡＥ—纤维素柱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱色谱对从土壤中筛选得到的普鲁兰杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓａｃｉｄｏｐｕｌｕｌｙｔｉｃｕｓ）菌株所产生的普鲁兰酶（丹麦ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ产品）进行分离纯化。酶活测定的结果表明,该酶的最适催化ｐＨ为４８,最适温度为３８℃,有相当高的热稳定性,米氏常数Ｋｍ为５２ｍｍｏｌ。     

甘薯多糖提取纯化及理化性质初步研究

通过正交实验,确立实验室小量、快速、高效提取甘薯多糖的最佳操作条件,建立了一种新的提取方法,即中性条件下,溶液与溶质体积比为2,乙醇与浓缩液体积比为3,浸提时间为2 h,浸提温度为65℃,甘薯多糖提取率大于90%.利用这种改进的提取方法,分离纯化得到一种甘薯多糖.经纸层析、Sephadex G-200柱层析、紫外扫描、红外光谱分析,确定该多糖为均一多糖,相对分子质量为4.6×104,单糖组成为β-葡萄糖.     

接骨草蔗糖酶同工酶的分离纯化及其部分性质研究

从接骨草幼叶中提取的蔗糖酶粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化，得到3种同工酶．对3种同工酶进行SDS-PAGE和IEF电泳均显示一条蛋白带，其亚基分子量分别为45．8KD，44．3KD，43．2KD；等电点分别为pH4．0，pH3．8，pH3．75．凝胶过滤测得3种同工酶全酶分子量分别为91．2KD，89．1KD，87．4KD，表明3种同工酶均由2个相同亚基组成，其表观Km分别为30mmol／L，57.1mmol／L，65mmol／L;Vmax分别为98μg／min，48μg／min，35μg／min．同工酶Ⅰ和同工酶Ⅲ在pH4．4～5．0时有最大活性，同工酶Ⅱ则在pH3．9～4．2时有最大活性．3种同工酶均在pH3-6范围内比较稳定．同工酶Ⅰ和同工酶Ⅱ在48～52℃有最大活性，同工酶Ⅲ在50～55℃有最大活性．3种同工酶均在50℃以下有较好的稳定性．     

核酸酶P1的纯化和酶学性质研究

桔青霉发酵液通过硫酸铵分级沉淀、凝胶层析和离子交换纤维素层析等生化分离步骤，得到的核酸酶P1比活力为711U/mg，纯化倍数1500。纯化的酶蛋白纯品经SDS－聚丙烯酰胺电泳，呈现一条单带。该酶催化反应的最适pH范围为6－8，最适温度在70℃，在60℃以下时酶活较为稳定，锌离子对此酶有明显的激活作用，而铜离子具有明显的抑制作用。     

罗氏沼虾肝胰腺几丁质酶分离纯化及部分性质

报道罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii)经抽提,再生几丁质亲和层析,Sephadex G-100凝胶过滤,CM－Sephadex C-25凝胶离子交换层析,获得了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品,SDS－聚丙酰胺凝胶电泳法测得其分子量约为38kDa,等电聚焦测得其等电点为5.7,该酶的最适pH值为4,在pH3.0-8.0间表现稳定。最适温度55℃,高于65℃稳定性降低。     

大肠杆菌谷氨酸脱羧酶的纯化及其性质的研究

大肠杆菌菌体经机械研磨,硫酸铵分级,sephadex G-100层析,再用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳进行纯化,得到电泳均一的 L-谷氨酸脱羧酶纯品.酶作用的最适pH 为4.4,在 pH3.6～5.8稳定;最适温度50℃,50℃以下稳定;于60℃保温30min,酶活力保留65%.此酶作用于 L-谷氨酸的 K_m 值为1.39×10~(-2)mol/L,金属离子 Zn~(2+),Cu~(2+),Mg~(2+),Fe~(2+)分别不同程度的抑制此酶,EDTA 无抑制作用.该酶在280nm 处有最大光吸收,与蛋白质在280nm 处有最大光吸收值的普遍性质相一致.     

天门冬多糖的分离纯化及其部分理化性质

中药天门冬冷水提取物，通过脱蛋白、丙酮分级及柱层析纯化，得到三种级份多糖：ＰＡ－Ｗ、ＰＡ－Ｉ和ＰＡ－Ⅱ，凝胶柱层析测定，它们的分子量分别是１５８万、２１９万和２１９万。三种多糖中均含有葡萄糖，甘露糖和半乳糖，但各自的摩尔比相差很大。此外，ＰＡ－Ⅱ中还含有一种未知的糖醛酸。高碘酸氧化、Ｓｍｉｔｈ降解、红外光谱和１３Ｃ核磁共振谱表明，ＰＡ－Ⅱ含α和β两种构型，具有１→４和１→６两种糖苷键，二者比例为５～６：１，是一种具有高度分枝结构的半乳甘露聚糖。     

家蚕碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质

经10％～50％硫酸铵分级沉淀分离，DEAE—Sepharose离子交换柱层析,Sephacryl S-200凝胶过滤纯化,从家蚕（Bombyx mori）肠液中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶、该酶提纯倍数为464倍，比活力为3936U／mg、酶学性质和动力学性质研究表明，该酶催化磷酸苯二钠的水解反应，最适pH值为10.5，pH小于7.5和大于11均不稳定；最适温度为40℃，温度高于50℃不稳定；米氏常数Km值为1．25mmo1／L.     

蚯蚓钙结合蛋白的分离纯化及性质的研究

以赤子爱胜蚓为材料分离纯化了钙调素，并得到一种新的钙结合蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳鉴定，这两种蛋白均表现为一。ＣａＭ分子量为１８．９ｋＤ，ＮＣＢＰ为１６ｋＤ，等电点分别为３．６和４．３，两种蛋白具有不同的肽谱。     

白芨多糖分离、纯化、组成及其性质

水提白芨多糖,用甲醇分级沉淀和 DEAE—纤维素柱层析得5个组分。B-1,B-2,B-3,B-4,B-5和 BS。经玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳和琼脂糖4B 凝胶柱层析鉴定,表明 B-1和 B-2两种组分均为单一物质。B-1和 B-2的比旋度均为负值。Dische 法测定麦明,白芨多糖不含糖醛酸。红外光谱和核磁共振测定分析显示,白芨多糖糖苷键型为β型。纸层析、薄板层析及气相色谱分析表明白芨多糖由甘露糖和葡萄糖两种单糖组成,相对 Rf 值之比约为1.11:1     

玉竹多糖的研究——分离纯化及其性质

从玉竹中分离得水溶性玉竹多糖PW—Ⅰ和PW—Ⅱ,初步结构测定表明多糖链的连接方式主要为β-(1→2)。     

壳聚糖与溶菌酶复配体系的杀菌性能研究

采用对倍稀释法测定壳聚糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并用定量法测定壳聚糖与溶菌酶复合体系的杀菌率,与单一成分的壳聚糖或溶菌酶进行对比,最后考察了壳聚糖和溶菌酶复合体系的稳定性,并对其抑菌机理进行初步研究。结果表明:2g/L壳聚糖虽然对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌有一定的杀菌率,但对白色念珠菌的杀菌率还不到50%,而溶菌酶质量浓度在5～20g/L对受试菌无明显抑菌作用。将2g/L壳聚糖和10g/L溶菌酶复配后,对受试菌的杀菌率优于单独使用壳聚糖或单独使用溶菌酶,尤其是对白色念珠菌的杀菌力明显提高;将复配液样品置于54℃恒温箱内14d,杀菌率略有降低,但仍然保持在90%以上,说明复配体系稳定性良好。     

芦荟超氧化物歧化酶的纯化与部分性质

芦荟粗提取液经丙酮沉淀、热处理、DEAE-琼脂糖柱层析和Sephacryl S-200凝胶过滤纯化后得到3种电泳纯的SOD组分,即SOD-Ⅰ、SOD-Ⅱ、SOD-Ⅲ.分子量分别为46000D,35000D,40000D;亚基分子量分别为23000D,17000D,20 000D,说明芦荟SOD三种组分均为二具体,其等电点分别为8.90,7.60,7.35。抑制剂敏感性实验和元素分析结果表明3种芦荟SOD组分均为Fe-SOD.