纤维堆囊菌发酵产生埃博霉素条件的优化

埃博霉素是纤维堆囊菌产生的一种具有抗肿瘤活性的次级代谢产物．文中研究了纤维堆囊菌DSM11999发酵合成埃博霉素的条件．结果表明：采用对数生长期后期的菌种在25℃进行发酵，将马铃薯淀粉和胰蛋白胨分别作为碳源和氮源，添加少量的无机盐MnCl4，EDTA—Fe—Na，K2HPO4，ZnCl2，CuSO4和生长促进因子丙氨酸，可使埃博霉素的产量提高22．5％．     

石油高效降解细菌的筛选及其降解特性研究

以山东省东营市胜利油田附近被石油污染的土壤作为分离样品,连续富集筛选出以原油为唯一碳源、能源进行生长繁殖的石油高效降解菌株X_P和X_B.经菌落形态、生理生化反应,初步鉴定2株菌分属为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)和假单胞菌属(Pseudomonas sp.);通过生物表面活性剂活性试验,分析了2株菌的油降解能力.结果表明:2株菌均具溶血和排油特性,溶血圈直径高达3.6 cm、排油圈直径高达4.9 cm,可以产生生物表面活性剂,并且溶血圈和排油圈直径与生物表面活性剂的产生呈正相关.室内培养箱实验测定,2株菌对石油的降解率分别为72.3%(X_P)和61.2%(X_B)(原油含量/土壤总量×100%=10%),在此过程中2株菌对石油降解的速度、能力有显著效果.室外堆制试验中,60 d处理后,锯末、小麦秸秆、菌剂及N、P营养物协同处理组降解效果明显,降解率高达54.0%-68.2%,说明外源添加物能提高微生物的降解能力.结论:筛选得到的菌株X_P和X_B是两株高效降解石油的菌株,在土壤中能很好地利用石油进行生长代谢,可应用于石油污染实际生物修复工程.     

溶纤粘细菌NUST06的系统发育学研究

从中国山东东营的一个盐土样品中分离到一株溶纤性粘细菌NUST06,能在pH9.5和7%NaCl的环境中生长.革兰氏染色阴性.营养体细胞长杆状,大小为(5～8)μm×(0.6～1)μm.子实体是由分散的大小为100～200μm细胞聚集体构成.粘孢子为短杆状细胞,大小为(2～3)μm×(0.8～1.2)μm.DNA中(G+C)%为69.1%.根据这些特征,此菌株可定为纤维堆囊菌SorangiumcellulosumNUST06.对菌株NUST06进行了基于16SrDNA序列比较的系统学分析,表明该菌株与Sorangiumcellulosum的相似性仅为82.7%.提示在粘细菌Sorangiumcellulosum分类上存在着形态结构与系统发育的不相关性.     

孔雀石绿脱色菌的分离鉴定及降解特性研究

文章从印染厂污水处理系统的活性污泥中筛选分离3株对孔雀石绿有脱色能力的菌株,编号分别为MG-2、MG-6和MG-7.根据其形态学特征以及16S rDNA序列分析,初步鉴定为肠杆菌属(Enterobactersp.)和埃希氏菌属(Escherichia sp.).3株菌的最适脱色条件为:pH=7.0,温度为30℃,厌氧和兼氧.在最适脱色条件下,3株菌对质量浓度为60 mg/L的孔雀石绿脱色率都在94％以上,其中菌株MG-2所需脱色时间最短,菌株MG-6次之,菌株MG-7脱色时间最长;3株菌对盐度有一定的耐适性,属于耐盐菌;3株菌的脱色都是因为胞外酶的作用.     

博宁霉素产生菌-轮枝链霉菌高产株筛选与应用

采用微波辐射7 min与丁胺菌素30μg/mL抗性复合诱变技术,选育博宁霉素产生菌-轮枝链霉菌B03菌株,结果获得一株高产量诱变株HB42,通过生产罐放大应用后,发酵效价与发酵指数均较出发菌株提高95%;经提纯精制后,博霉宁霉素总收率提高5.3%,成品有效组分含量提高4.7%,生产水平与精品质量得到较大幅度提高.该方法操作简便,筛选效果佳,在微生物育种工程中,具有推广应用价值.     

枯草杆菌JAS株α—淀粉酶的产生与其抗衣霉素的关系

为了研究Bacillus subtilis的产α-淀粉酶性状与其抗衣霉素性状之间的关系,进一步选择在诱变育种时能有效地筛选淀粉酶基因突变株的方法,我们对此作了初步探索.衣霉素敏感型的α-淀粉酶工业生产菌B.subtilis JAS经过紫外线诱变后,选得9株抗衣霉素突变株.通过对它们进行的多次发酵酶活力测定,发现其中3株是α-淀粉酶缺陷型、3株酶活力基本不变或降低,另外3株酶活力明显提高,其中1株酶活力是出发菌株的114%—123%.试验表明B.subtilis α-淀粉酶的产生与其抗衣霉素基因的表达有着密切关系.因此,在对该菌的诱变育种时,可以采用衣霉素为粗筛选择压力.     

粘细菌的分离鉴定及活性检测

近年来,粘细菌由于其次级代谢产物结构新颖、生物活性多样而备受关注,成为发展新药的重要来源.利用已灭活酵母菌或大肠杆菌(Escherichia coli)诱导法和滤纸片诱导法等方法进行粘细菌的分离,并采取多种方法对所分离出菌株进行纯化,从95份土样中共分离出118株粘细菌,纯化出54株.根据16S rDNA进行菌株鉴定,主要的粘细菌为粘球菌属(Myxococcus)、珊瑚菌属(Corallococcus)、多囊菌属(Polyangium)和堆囊菌属(Sorangium).对获得纯化的菌株进行了抗菌抗肿瘤活性测定,结果显示有46.3％的菌株具有抗菌作用,有66.7％的菌株具有抗肿瘤作用,表明粘细菌是抗菌抗肿瘤活性物质的重要来源.     

高能电子诱变选育雷帕霉素产生菌

利用高能电子束对雷帕霉素产生菌进行诱变处理。照射时间分别选用10s、20s、30s,在诱变株中筛选高产突变株。最终获得一株高产菌株NP09-62#,其效价比出发菌株提高了33.3%,且遗传性能稳定。     

苦木注射液联用影响阿奇霉素细菌耐药的体外研究

本实验旨在研究阿奇霉素联合苦木注射液对临床常见耐药菌的体外抑菌效果.体外抑菌实验采用96孔微量肉汤稀释法测定标准菌株金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、痢疾志贺菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)及部分抑菌指数(FIC);采用体外药物浓度递增法对联合用药后具协同作用的标准菌株进行诱导耐药,测定两药联合后对高度耐药菌株的MIC及FIC值.结果表明,阿奇霉素联合苦木注射液对标准菌株金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌痢疾志贺菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌具协同抑菌作用,对系列阿奇霉素高度耐药菌均具协同抑菌作用.综上,阿奇霉素联合苦木注射液对临床常见耐药菌有较好的抑菌作用.     

降解PVA混合菌系的筛选及菌株的分离纯化

从4个样品中筛选出一能够高效降解聚乙烯醇(PVA)的混合菌系,并对其驯化培养及分离纯化,得到了7株菌株,均能够降解聚乙烯醇.通过菌落形态和生理生化实验对这些菌株进行了初步鉴定.同时考察了混合菌系与单菌株降解效果的比较.结果说明混合菌系的降解效率远远大于单菌株,48h降解率可达90%以上.     

蓝色凝胶平板法筛选生物表面活性剂产生菌

从某炼油厂废水和油泥样中经富集培养、蓝色凝胶平板和发酵液表面张力的测定筛选出生物表面活性剂产生菌8株。选择其中2株BS-03和BS-01作进一步研究。经初步鉴定2株菌均属于假单胞菌属。菌株BS-03和BS-01的发酵液表面张力由56．8mN／m分别降至25．6mN／m和27．4mN／m。电喷雾质谱检测得到菌株BS-03的代谢产物鼠李糖脂主要成分是RhaC10C10，而茵株BS-01则为Rha2C10和Rha2C10C10，其临界胶束浓度CMC值分别为326mg／L和58mg／L。菌株BS-03发酵液对苯、正己烷、正十八烷、柴油和原油的乳化性能都大于70％，而菌株BS-01发酵液则对这些物质的乳化性能不超过60％。     

草地早熟禾ISSR-PCR反应体系优化

采用正交设计和单因子试验结合的方法,优化适合于草地早熟禾的ISSR体系。对影响ISSR-PCR的多个因素,包括MgCl2、dNTP、Primer、TaqE的浓度和用量进行优化,同时,对DNA模板浓度、引物退火温度进行筛选。确定草地早熟禾的最佳ISSR-PCR反应体系为：94℃预变性5min,94℃变性30 s,Tm值退火45 s,72℃延伸90 s,35个循环,最后72℃延伸10 min,4℃保存;20μL反应体系包括2μL10×Buffer,0.96μL dNTP（2.5×10^-3mol.L^-1）,1μL Primer（1.0×10^-5mol.L^-1）,0.2μL Taq酶（5 U.μL^-1）,1μL Template DNA,14.84μL H2O。     

Enhancement and selective production of avermectin B by recombinants of Streptomyces avermitilis via intraspecific protoplast fusion

Among eight components of avermectin, B1 fractions have the most effective antiparasitic activities and the lowest level of toxic side-effects and are used widely in veterinary and agricultural fields. In-traspecific protoplast fusion between two strains of Streptomyces avermitilis, one an avermectin high producer (strain 76-05) and the other a genetically engineered strain containing the mutations aveDˉ and olmAˉ (strain 73-12) was performed for enhancement and selective production of avermectin B in the absence of oligomycin. Two recombinant strains (F23 and F29) were isolated and characterized with regards to the parental merits. F23 and F29 produced only the four avermectin B components with high yield and produced no oligomycin. The avermectin production of F23 and F29 was about 84.20% and 103.45% of the parental strain 76-05, respectively, and increased about 2.66-fold and 3.50-fold, re-spectively, compared to that of parental strain 73-12. F23 and F29 were genetically stable prototrophic recombinants and F29 was quite tolerant of fermentation conditions compared to avermectin high producer parental strain 76-05. The ability to produce avermectin B with high yield without the produc-tion of other avermectin components and oligomycin will make F23 and F29 useful strains for aver-mectin production. Strain F29's tolerance of fermentation conditions will also make it suitable for in-dustrial applications.     

短小芽孢杆菌sRNA Bpsr112的鉴定及功能研究

为了给短小芽孢杆菌的改造提供新思路,提高碱性蛋白酶产量,实验室前期对短小芽孢杆菌进行了转录组测序,预测了短小芽孢杆菌的sRNA.本研究通过生物信息学方法和Northern杂交鉴定了一个新的sRNA Bpsr112.然后构建了Bpsr112的敲除型菌株和过表达菌株,利用相关菌株进行了生长曲线、盐胁迫和蛋白酶活等实验,再利用SDS-PAGE检测胞外蛋白酶AprE的表达水平.结果表明,在发酵至60 h和72 h时,与对照菌株相比,敲除型菌株酶活显著降低（P<0.01）,过表达菌株酶活显著提高（P<0.01）;同时SDS-PAGE结果表明,AprE蛋白含量在敲除菌株中降低,在过表达菌株中提高,说明sRNA Bpsr112对短小芽孢杆菌蛋白酶活具有正调控.本研究鉴定了短小芽孢杆菌中的sRNA,并发现Bpsr112对蛋白酶活具有促进作用.     

抗黄瓜灰霉病的枯草芽孢杆菌筛选及其抑菌活性的初步研究

结合涂布平板法和温室盆栽植株法,测定了41株枯草芽孢杆菌发酵液对灰霉病病原菌及黄瓜灰霉病的抑制效果,以此筛选出针对灰霉病的生防菌株.结果表明,抑菌效果最好的枯草芽孢杆菌为BS01和BS03.采用涂布平板法研究了菌株BS01和BS03抑菌活性,结果表明,抑菌效果均为50%时,BS03比BS01的菌体浓度低,得到抑菌效果最好的菌株BS03.采用温室盆栽植株法测试了菌株BS03的抑菌活性,结果表明,菌悬液比发酵滤液的抑菌效果好,并且在菌悬液处理黄瓜苗后的第3天抑菌活性最高.     

平板影印与AHBA合成酶基因筛选用于安莎类抗生素产生菌的分离

基因筛选是筛选具有抗生素产生潜力微生物的新方法.针对筛选中单菌落分离纯化不仅工作量大,而且耗费时间,采用一种将平板影印技术与PCR扩增技术相结合从土壤中快速获得具有安莎类抗生素产生潜力的放线菌的方法.根据安莎类抗生素合成途径中的3-氨基-5-羟基苯甲酸合成酶(AH BAs)基因的保守性,通过放线菌的培养、影印、AH-BAs基因的PCR扩增,已从33份土样中获得8株AHBAs阳性菌株.结果表明:该方法是一种非常有效的能够快速获得AHBAs基因阳性菌株的方法,并且该方法可扩展用于从土壤中分离其他有价值的抗生素产生菌.     

产木聚糖酶海洋微生物的筛选与诱变育种

以自制木聚糖为初筛培养基的唯一碳源,从多个海洋来源样品中一共筛到60株有透明圈且形态各异的菌株,摇瓶发酵结果显示,38株具有产木聚糖酶能力,其中B659菌株产酶能力最高,酶活力为525.3 U·m L-1.结合B659菌株的形态特征和16S r DNA序列分析鉴定该菌株属于Bacillus属.对B659菌株进行紫外诱变,筛选得到酶活提高13.9%且稳定遗传的突变菌株G3-17;对G3-17菌株进一步进行微波诱变得到酶活较G3-17菌株高出11.6%且稳定遗传的突变菌株W1-40.对B659菌株和W1-40突变菌株进行发酵试验,72 h时W1-40菌株的酶活力达到645.2 U·m L-1,比B659菌株(517.9 U·m L-1)提高24.6%.     

微小病毒TLMV的检测研究

目的 TLMV是一种新型与输血性肝炎相关的人类DNA病毒,检测中国慢性乙型肝炎患者体内是否存在TLMV感染.方法根据日本学者Shunji Mishiro提供的序列选择TLMV-CBD279和CBD231最保守区设计引物,用慢性乙型肝炎且TTV阳性患者血清制备DNA模板,进行PCR扩增;将阳性PCR产物连接至pGEM(r)T质粒,碱裂解法提取质粒DNA并纯化.以T7引物为起始全自动荧光测序仪测序.结果获得了162bp基因序列,该序列与日本株CBD231,CBD279同源性为72%.结论说明在中国慢性乙型肝炎患者体内存在TLMV感染.     

应用地高辛标记的PCR-ELISA技术快速检测转基因水稻

应用地高辛标记的PcR—ELISA(Dig-PcR—ELISA)技术进行转基因水稻检测研究。针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子(p35S)、胭脂碱合成酶(NOS)终止子(Thos)，筛选标记潮霉素磷酸转移酶基因(hpt,hph)、β—葡萄糖苷酸酶基因(gus)、抗草丁膦除草剂基因(bar)，建立Dig—PcR—ELISA检测方法；能进行半定量检测，敏感性试验表明，Dig—ELISA检测比常规电泳检测可提高敏感性达1000倍，可检测含量达0．1％的GM0样品。全过程可在24h内完成。