发酵罐高密度培养盘基网柄菌

利用SIH合成培养基,在7 L发酵罐培养盘基网柄菌.培养147 h后,细胞密度达到4.0×107 mL-1,为在复杂培养基上所能达到的细胞密度的2～4倍.培养过程中葡萄糖的消耗量为6.7 g/L,产氨浓度达0.88 g/L.对培养基中的氨基酸分析表明,赖氨酸、色氨酸、甲硫氨酸和苯丙氨酸消耗较快, 显示SIH培养基的氨基酸成分还可进一步优化.采用基于Monod生长动力学的半经验模型可很好模拟细胞生长和底物消耗,并估计出动力学参数μmax = 0.115 h-1, Nmax = 6.0×107 mL-1.本研究为进一步优化合成培养基和为利用这一新型真核表达系统大规模生产重组异源蛋白奠定了基础.     

盘基网柄菌RasD蛋白的生物信息学分析及趋电性研究

通过对盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)RasD蛋白进行生物信息学分析及趋电性研究,探究盘基网柄菌能否作为开发电激治疗肿瘤的生物模型.研究发现RasD蛋白含有187个氨基酸残基,是亲水性蛋白,二级结构主要以α螺旋和无规则卷曲为主,同源比较发现盘基网柄菌细胞中的RasD蛋白与人类的Ras蛋白相...     

盘基网柄菌发育期间蛞蝓体的形态学研究

用吖啶橙和Hoechst 33342两种活体荧光染料,通过荧光显微镜观察,来了解盘基网柄菌多细胞发育期间蛞蝓体阶段中出现的细胞分化及凋亡特点.结果发现:随着发育进程,将发育成柄细胞的前柄细胞先被染成蓝绿色,然后被染成绿色,再成橙色,最后为无色,这些分别表示了前柄细胞不同的凋亡阶段.在蛞蝓体后期其内部出现一条"通道".得出结论,蛞蝓体是盘基网柄菌细胞分化和衰退的起始阶段,其形态发生了巨大的变化.前柄细胞从蛞蝓体前期开始凋亡,但并不是马上死亡,而是一个渐进的凋亡过程.     

盘基网柄菌KAx-3中类免疫细胞的初步研究

以Ethidium bromide(EB)代替盘基网柄菌生长环境中所遇到的毒物,检测盘基网柄菌中是否存在能吞噬毒物的特定细胞.荧光显微镜下观察,细胞丘时期仅能看到EB加入后显现的暗红色轮廓;Hoechst33342定位细胞核,以确证EB被吞噬进细胞内;蛞蝓体时期少数细胞有明显的强荧光反应,随着蛞蝓体的爬行,含EB的细胞团被丢弃在遗弃的粘液鞘中.表明多细胞发育至蛞蝓体阶段存在一种能吞噬EB的细胞,最终将EB排出体外.流式细胞术检测发现,该类特殊的细胞主要来自于前柄细胞.结果显示,盘基网柄菌中存在简单的内在免疫细胞,为研究免疫系统在生物体的发生和发展提供了研究基础.     

活性氧指导盘基网柄菌细胞的趋电性研究

以模式生物盘基网柄菌为研究对象,通过药物(N-乙酰-L-半胱氨酸和L-单甲基精氨酸)抑制细胞内活性氧或者敲除活性氧结合位点基因(DdFHa和DdFHa/b),探讨在外源性电场作用下,活性氧的含量以及活性氧信号转导对细胞趋电性的影响.结果表明,活性氧被抑制的细胞和活性氧结合位点基因被敲除的细胞对电场的响应都降低了.这为电...     

盘基网柄菌allC的克隆、表达和多克隆抗体的制备

运用RT-PCR技术从盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)总mRNA中克隆到了尿囊酸酶基因(allC),该基因编码区开放读框长1 100bp,编码的蛋白约42kD.由于是在野生型和突变型细胞中差异表达的片段,表明该基因在盘基网柄菌多细胞发育中起到重要作用,因此将allC克隆入融合表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达带有6个组氨酸标签的尿囊酸酶(ALC)融合蛋白,经镍柱亲和层析,获得了电泳纯蛋白.用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.ELISA测得制备的抗ALC蛋白的多克隆抗体的效价可达1∶64 000,Western Blotting检测证明该抗体有较强的针对ALC蛋白的专一性.这些数据表明重组质粒表达的ALC融合蛋白具有良好的抗原性,制备ALC的多克隆抗体有良好特异性和效价,能够满足针对ALC免疫印迹和细胞内定位检测等实验要求,为深入研究ALC蛋白在盘基网柄菌多细胞发育的功能作用提供了有力工具.     

钙离子通道膜蛋白DdMCU的酵母表达

Mitochondrial Ca~(2+)Uniporter(MCU)作为细胞钙离子通道uniporter复合物的重要组分发挥了关键作用.近期研究发现将盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)DdMCU重构于酵母系统进一步证明了MCU是线粒体正常发挥uniporter性的最基本原件.为了深入研究DdMCU结构与功能,本研究通过合成盘基网柄菌的MCU基因,利用PCR得到目的DNA片段,克隆到表达载体pPICZX,构建DdMCU-GFP融合蛋白表达质粒pPICZX-DdMCU.重组质粒转化酵母X33,经博莱霉素梯度筛选,得到8个酵母重组子,且PCR检测目的基因已与酵母基因组整合成功.酵母重组子进行甲醇诱导表达,经激光共聚焦显微镜与western检测,均表明蛋白已成功表达.     

盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)KAX-3和AK127细胞形态发生和同工酶的比较研究

比较了盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)野生型细胞KAx-3和突变型细胞AK127在多细胞发育过程中的形态发生.两者有明显的区别;突变细胞的发育只能停留在细胞疏松聚集阶段,而野生型细胞能顺利完成整个发育过程.利用SDS-PAGE电泳比较分析了两者在重要发育阶段的三种同工酶:醋酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)和谷氨酸脱氢酶(GDH).结果发现AK127细胞发育阶段含有两种醋酶成分a和p,而KAX-3细胞中只有一种醋酶a;而且AK127细胞中苹果酸脱氢酶(MDH)含量在发育后14 h和16 h均高于KAX-3细胞;谷氨酸脱氢酶(GDH)同工酶在发育后14 h时相对含量高于KAX-3细胞,而在发育后16 h含量却低于KAX-3细胞.这些数据显示了两种类型细胞的同工酶有明显的差异;表明突变细胞基因的表达发生了一定的改变,由此说明了gp150分子在盘基网柄菌细胞发育中有重要作用.     

盘基网柄菌细胞发育中gp150分子与凋亡蛋白作用分析

用Percoll密度梯度技术分离和收集盘基网柄菌前柄和前孢子细胞,Western blot分析gp150分子和胱天蛋白酶在前孢子细胞和前柄细胞两种类型细胞中的表达情况.结果显示：只能在前柄细胞中检测到gp150蛋白条带,并随细胞发育蛋白的量逐渐增加,提示gp150蛋白的表达量与发育时间,前柄细胞分化有密切关系;在前柄细胞中能检测到31.5 kD和37.5 kD分子量大小的凋亡蛋白,且蛋白量也是随发育时间有所增加,在两种类型细胞中都可检测38.2 kD的凋亡蛋白.这些数据表明盘基网柄菌细胞凋亡过程中有类似Caspase-3的蛋白表达,它们的存在与细胞凋亡存在密切关系; gp150分子的表达与胱天蛋白酶的激活可能存在一定关系.     

盘基网柄菌细胞发育中gp150分子与凋亡蛋白作用分析

用Percoll密度梯度技术分离和收集盘基网柄菌前柄和前孢子细胞,Western blot分析gp150分子和胱天蛋白酶在前孢子细胞和前柄细胞两种类型细胞中的表达情况.结果显示：只能在前柄细胞中检测到gp150蛋白条带,并随细胞发育蛋白的量逐渐增加,提示gp150蛋白的表达量与发育时间,前柄细胞分化有密切关系;在前柄细胞中能检测到31.5kD和37.5kD分子量大小的凋亡蛋白,且蛋白量也是随发育时间有所增加,在两种类型细胞中都可检测38.2kD的凋亡蛋白.这些数据表明盘基网柄菌细胞凋亡过程中有类似Caspase-3的蛋白表达,它们的存在与细胞凋亡存在密切关系;gp150分子的表达与胱天蛋白酶的激活可能存在一定关系.     

猪粪废水用于三角褐指藻培养的研究

研究了以猪粪废水培养一株三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)的可行性.结果表明:猪粪废水经30g/L盐水适当稀释后可直接用于三角褐指藻的培养,无需添加其他营养物质.在污水稀释率为25倍时,藻细胞可良好地生长,最高密度为合成培养基的1.52倍.同时三角褐指藻有效去除了污水中的氮磷,总氮、氨氮和总磷的去除率分别为23%,93%和93%.与合成培养基养殖的藻相比,猪粪废水养殖的三角褐指藻的二十碳五烯酸和多不饱和脂肪酸的含量略有上升,实现了培养三角褐指藻转化废水为生物量并积累多不饱和脂肪酸的资源化.     

赖氨酸为限制性氨基酸的杂交骨髓瘤细胞生长动力学模型

影响动物细胞培养的因素众多,其中氨基酸的影响不可忽略.实验发现,在杂交骨髓瘤细胞培养过程中,赖氨酸是限制性氨基酸,故建立了考虑该限制性氨基酸的杂交骨髓瘤细胞非结构动力学模型.模型将赖氨酸区分为胞内赖氨酸及胞外赖氨酸,并且认为对细胞生长产生影响的是胞内赖氨酸的浓度.仿真结果表明,在此基础上完成的动力学模型能较好地描述动物细胞生长过程.     

菌草无粪栽培蘑菇营养成分分析

菌草无粪栽培白蘑菇和棕色蘑菇,按照营养成分的相关测定标准测定白蘑菇和棕色蘑菇的粗蛋白、氨基酸、多糖、脂肪酸等一般营养成分的含量,并与传统常规栽培蘑菇的营养成分含量进行比较。结果表明,菌草无粪栽培蘑菇的营养成分接近或略高于常规栽培蘑菇,其中菌草无粪栽培白蘑菇和棕色蘑菇的粗蛋白含量分别比常规栽培蘑菇高出28%和30%;氨基酸总量比常规栽培蘑菇分别高30.5%和20.13%,8种人体必需氨基酸含量比常规栽培蘑菇分别高16.0%和14.2%;菌草无粪栽培蘑菇油脂含量与常规栽培蘑菇的油脂含量相近,所含脂肪酸组分不同,但是其中不饱和脂肪酸的总量都占脂肪酸总量的80%以上。     

黄姑鱼仔稚鱼发育过程中氨基酸和脂肪酸的变化

分别测定1、5、10、20、45日龄黄姑鱼仔稚鱼中的氨基酸、游离氨基酸、脂肪酸组成。结果表明黄姑鱼仔稚鱼的氨基酸组型和游离氨基酸组型是不断变化的。必需氨基酸中的精氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸5种氨基酸占必需氨基酸总量的70%左右。非必需氨基酸中的天冬氨酸、谷氨酸和丙氨酸占非必需氨基酸总量的60%左右。随着仔稚鱼的生长,游离氨基酸含量呈显著降低的趋势。1日龄仔鱼的游离氨基酸含量最高,为12.134 g/100 g;45日龄稚鱼的游离氨基酸含量最低,为1.497 g/100 g。黄姑鱼仔稚鱼的主要脂肪酸为:16:0、18:0、16:1、18:1和DHA。各日龄黄姑鱼仔稚鱼体脂肪酸含量差异较大,但仔稚鱼的必需脂肪酸DHA、EPA和ARA始终保持较高的含量。     

L-谷氨酰胺发酵与分析

用钝齿棒状杆菌(Corynebacterium crenetum)Hu7251进行了L-谷氨酰胺发酵实验,探讨了一些影响L-谷氨酰胺生成的因素,并确定了发酵液中所含的氨基酸种类。该菌株在适宜的条件下,发酵72小时,生成L-谷氨酰胺达26.47mg/ml。     

蒽醌型负二向性液晶染料的研究Ⅰ 1,8-二氨基-4.5-二羟基蒽醌衍生物的合成

１，８－二氨基－４，５－二羟基蒽醌的酰化物具有负二向色性，可用于正型彩色液晶显 示．研究了１，８－二羟基葱醌的硝化、还原及酰化反应条件．在硼酸存在下用混酸硝化． 进一步用硫化碱还原制得１，８－二氨基－４，６－二羟基蒽醌，用Ｔ．Ｌ．Ｃ．分离硝化产物． 经质谱和核磁氢谱确证了主要副产物的结构是１，８－二羟基－２．５－二硝基蒽醌．１．８－二 氨基－４．５－二羟基蒽醌与对位取代的苯甲酰氯反应时，在氯苯介质中只发生氨基酰化， 而在吡啶介质中氨基和羟基同时被酰化．     

苏州河和黄浦江颗粒态氨基酸的季节变化简

于2007年1、4、7、10月在苏州河、黄浦江4个采样点采集表层水样,分析了颗粒态氨基酸（Particulate Amino Acids, PAA）的组成及含量;并对比分析了北新泾、河南路桥、十六铺和嫩江码头4个站点氨基酸的季节变化特征;结合颗粒有机碳（POC）、颗粒有机氮（PON）及颗粒态氨基酸的构型特征（D和L型）等参数,探讨了该区域颗粒有机氮的来源和降解情况.结果表明：苏州河氨基酸季节变化比黄浦江大;氨基酸降解系数(DI)分析表明研究区域的氨基酸主要来自现场过程和细菌贡献,其中7月份氨基酸最为新鲜;氨基酸降解系数DI和D构型氨基酸成负相关性关系,表明自然细菌来源的D-氨基酸在降解过程中的变化.     

复合菌群选择培养试验研究

分别采用不同的培养基对复合菌群进行了富集培养研究,试验结果表明：复合菌群富集培养的结果因富集所用的培养基和富集方法的不同而变化,其中采用复合菌培养基的培养效果优于其他培养基的培养效果;复合菌群原液中含有不同种类的微生物,通过选择培养基的定向富集培养,可以得到不同目标优势菌群;葡萄糖、蛋白胨、酵母膏是复合菌群富集培养合适的碳源和氮源．     

白灵菇的深层培养及菌丝体氨基酸组分分析

通过对白灵菇菌丝体进行深层培养的研究及其成分的分析，表明液体发酵白灵菇菌丝体的最佳碳源是玉米粉，白灵菇菌丝体的最佳培养条件是pH4．o～6．0，接种量为10％，装液量为70-80mL_探究了菌丝体所含的人体硌需氨基酸占总氨基酸的52．4％，当培养5d时发酵液中的还原糖含量达到最高峰，随后菌体质量浓度的最大值出现在第6天．氨基氮含量的最大值出现在第7天．     

基本培养基中芳香族氨基酸和维生素对D-核糖生产的影响

考察了芳香族氨基酸和维生素对转酮醇酶缺失的枯草芽孢杆菌生长以及D-核糖生产的影响.实验结果表明:L-酪氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、生物素、烟酸、吡哆醛的添加能改善菌体生长,提高D-核糖产量,特别是烟酸作用尤其明显.在单因素实验基础上,采用响应面分析方法对培养基中的维生素添加量进行了优化,确定最佳培养基组成.在此优化培养基中D-核糖质量浓度达到(23.4±0.39)g/L,与预测结果一致,是不添加维生素时核糖产量的2.31倍,D-核糖对葡萄糖的得率达到0.353 mol/mol.