鳗弧菌和副溶血弧菌对短蛸感染的病理学研究

为了今后养殖病害的防治,了解病原微生物在养殖过程中对头足类动物产生的影响,选择在海水养殖中发病频率较高的弧菌,包括鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和副溶血弧菌(Vibrio Parahemolyticus),研究它们对短蛸的毒力水平。通过将稀释菌液直接注射短蛸腕部的方式,观察感染后短蛸的致死率、半致死时间,以及各菌对短蛸肝脏、鳃、鳃心、白体等器官结构的影响。结果显示:鳗弧菌和副溶血弧菌均对短蛸有较强的致病性,分别在60、48 h时达到半致死,且发病的短蛸活性减退,虚弱无力,腹部肿大,解剖可见部分内脏肿胀明显,如肝脏;通过对病变组织和健康组织的石蜡切片和HE染色,以及超显微结构的观察,发现患病短蛸的肝脏、鳃、鳃心和白体均出现不同程度组织、细胞结构上的破坏。以上结果表明这两种弧菌对短蛸均具有明显的致病性,副溶血弧菌更强一些,合适条件下将会成为短蛸规模化养殖的重要威胁之一。     

霍乱弧菌及副溶血弧菌复合PCR检测方法的建立

根据已发表的副溶血弧菌和霍乱弧菌的基因组序列,设计合成了三对引物,用于同时检测这两种弧菌。扩增片段长度分别为285 bp、450 bp、643 bp。经实验验证建立的PCR检测方法特异性较好,三对引物间无互相干扰;同时对建立的PCR检测体系进行了敏感性测定,结果最低检测下限为2.1×103cfu/mL。     

磁珠提取技术在副溶血弧菌检测中的应用

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,为解决副溶血弧菌检测步骤复杂且周期长的问题,研究开发了一种磁珠提取与PCR联用技术快速检测食品中的副溶血弧菌。首先通过碱性共沉淀法完成Fe₃O₄磁珠的制备,随后在室温条件下通过水解正硅酸乙酯完成Fe₃O₄@SiO₂磁珠制备。探讨了正硅酸乙酯添加量对Fe₃O₄@SiO₂磁珠粒径和磁性的影响。以DNA提取能力为目标,已知浓度DNA为提取对象,分析了Fe₃O₄@SiO₂磁珠粒径和提取体系pH值对Fe₃O₄@SiO₂磁珠与DNA结合能力的影响。结果表明,Fe₃O₄@SiO₂磁珠结合副溶血弧菌DNA的较佳粒径为105.89nm、Fe₃O₄@SiO₂磁珠的SiO₂层为25nm,此条件下Fe₃O₄@SiO₂磁珠表面光滑、分散性良好、饱和磁化强度高,在磁场的作用下10s即可完成副溶血弧菌DNA与杂质的分离,副溶血弧菌DNA的提取率高达80%(提取体系pH值为5.0)。采用优化后的Fe₃O₄@SiO₂磁珠进行DNA提取,结合PCR联用技术,对92份市售水产样品(32份对虾、25份牡蛎、35份贻贝)进行副溶血弧菌筛查。结果表明,Fe₃O₄@SiO₂磁珠提取的DNA均可直接用于PCR检测,被测水产样品中有17份样本的副溶血弧菌检测结果为阳性。此技术与国标检测方法(GB 4789.7—2013)相比,检测时间由一周缩短至4h,提高了副溶血弧菌的检测效率。磁珠提取结合PCR联用技术可检测不同食品中的多种微生物菌种,此研究为食品中的微生物快速检测提供了一种实用新方法。     

免疫金层析技术快速检测副溶血弧菌方法的初步研究

本研究应用兔抗V.parahaemolyticus IgG-2包被硝酸纤维素膜检测线,·羊抗兔IgG包被对照线,胶体金标记免抗V.parahaemolyticus IgG-1,建立了检测副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的免疫金层析试纸条法(IGCA).结果表明,阳性者试纸条检测线和对照线均出现红色线,实验过程仅需5～15min即可判断结果,该法对V.parahaemolyticus的最低检测量为3.60× 104cfu/mL,与溶藻弧菌、霍乱弧菌、美人鱼弧菌、麦氏弧菌、弗氏枸橼酸杆菌和沙门菌等常见肠道菌不发生交叉反应.将试纸条4℃存放6个月、常温存放3个月,37℃存放1个月,检测结果无差异.说明建立的试纸条检测方法操作简便快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好,结果容易观察和判断,非常适于基层养殖部门应用.     

舍曲林对副溶血弧菌的抑制作用

近年来关于副溶血弧菌环境和海产品分离株出现抗生素耐药性的报道日益增多,亟需寻找替代传统抗菌剂抗菌的策略以控制副溶血弧菌的污染和感染。本研究通过最小抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）的测定、生长曲线的绘制,以及运动性实验和结晶紫染色实验,并利用透射电镜观察副溶血弧菌形态的变化,来评估以舍曲林为代表的5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRIs）类药物对副溶血弧菌的抑制活性及抗生物被膜形成能力。同时,通过检测与分析舍曲林对副溶血弧菌毒力基因转录的影响,探究舍曲林对副溶血弧菌的减毒作用。结果显示,舍曲林对副溶血弧菌的MIC为32μg/mL,MBC为64μg/mL,能够损伤其细胞膜和细胞壁,MIC下导致其干瘪皱缩,MBC下引起其涨裂、胞内物质外泄;亚抑制浓度的舍曲林能显著抑制副溶血弧菌的泳动和群集运动,抑制率分别为88.6%和71.5%;舍曲林呈浓度依赖性地抑制副溶血弧菌的生物被膜形成,当舍曲林质量浓度分别为8、16、32和64μg/mL时,对副溶血弧菌生物被膜形成的抑制率分别为66.9%、79.5%、88.3%和89.3%;亚抑制浓度的舍曲林能显著抑制副溶血弧菌的毒力基因fliA、ompW和a...     

冷刺激下副溶血弧菌基因转录表达变化分析

目的:应用全基因组DNA芯片技术分析从37℃转入10℃后冷刺激作用下副溶血弧菌基因转录表达变化。方法:10℃低温分别作用于副溶血弧菌20、40和60min后,收集以上3个时间点和正常对照组的菌体,提取RNA,进行一个连续的时相分析。在每一个时间点的细菌基因表达分别与对照组(冷处理前37℃生长状态)相比较,获取每个时间点和正常对照组的基因转录表达上下调的倍数或者其对数值,以荧光信号的变化倍数值为2作为一个临界点,结合SAM分析软件选取基因变化倍数较大的数值。结果:在冷刺激后20、40、60min3个时间点可以检测到大量的转录水平发生明显变化的基因,对于这些发生变化的基因,根据各个时间点的变化规律,进行了分簇归类分析,共分为9簇,每一个簇都存在一种独特的时间依赖的表达模式。在每个相关的时间点,代谢相关的基因以下调为主。面对突然而急剧的温度变化,细胞膜相关的代谢基因发生了明显的重塑。结论:通过对体外低温环境下副溶血弧菌的比较转录谱分析,得到了在低温条件下基因转录发生明显变化的细胞代谢和毒力因子等相关基因,为副溶血弧菌基因转录调控网络的研究提供了一定的理论依据。     

以小鼠为模型的副溶血弧菌致病性影响因素比较

为建立副溶血弧菌毒力评价的动物模型,研究通过混合正交试验,用不同浓度和致病性的副溶血弧菌采取腹腔注射和灌胃的方式感染4周龄的小鼠,观察小鼠的精神状态并计算一段时间内小鼠的死亡率,分析不同因素对副溶血弧菌致病性强弱的影响.结果表明,影响小鼠死亡率的因素顺序为:感染途径菌液浓度菌株毒力;采用副溶血弧菌ATCC 17802浓度为7.5×107cfu/m L的菌液对小鼠进行腹腔注射,小鼠精神状态最差,死亡率最高.     

金属铅和镉对副溶血弧菌生物被膜形成的影响

本研究探讨了Pb2+和Cd2+对副溶血弧菌生物被膜形成的影响.实验选用副溶血弧菌ATCC17802标准株为研究对象,采用结晶紫染色法和微孔板分光光度法,确定副溶血弧菌形成生物被膜的最佳培养温度和时间,然后分析不同浓度的Pb2+和Cd2+对该菌生物被膜形成的影响.结果表明:37℃培养条件下副溶血弧菌ATCC17802生长...     

网箱养殖大黄鱼弧菌病研究

1999年夏季,福建省宁德北斗都网箱养殖大黄鱼发生大面积死亡,从病鱼体内分离出两株细菌：ND-01和ND-02,人工感染试验证实这两株菌皆为大黄鱼的病原菌,经鉴定,菌株ND-01为溶藻弧菌,菌株ND-02为副溶血弧菌,51种药物的药敏试验表明;青霉素G、万古霉素等19种药物对ND-01没有抗菌作用,青霉素G、头孢拉定等10种药物对ND-02没有抗菌作用;ND-01对氯霉素、氟派酸等9种药物敏感,而ND-02则对氟派酸、氟嗪酸等10种药物敏感。     

副溶血弧菌VopS效应子基因的克隆与原核表达

副溶血弧菌可通过Ⅲ型分泌系统分泌效应毒力蛋白导致真核靶细胞的细胞溶解及细胞凋亡.VopS是Ⅲ型分泌系统中的一个效应毒力因子,能通过抑制NF-κB的活性介导巨噬细胞死亡.实验将效应因子VopS的编码基因克隆到pET28a(+)载体上,成功构建了pET28a(+)-vopS重组质粒,将该质粒转入大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达,经SDS-PAGE分析,发现在分子量约为43 kDa处有一明显蛋白表达条带.用Ni2+-NTA柱亲和层析获得纯化蛋白,浓度为175 mg/L.为进一步研究副溶血弧菌Ⅲ型分泌系统致病机制提供了材料.     

Quantitative Risk Assessment with Data Mining for Formaldehyde Content of Imported Textile

The assessment of potential risks posed by formaldehyde in clothing to consumers is of increasing concern worldwide,for free formaldehyde is harmful to human. Some papers focus on hazard and exposure assessment,using quantitative and semi-quantitative method, rather than assessment for the factors related to formaldehyde content. In order to perform early-warning research and risk management,the quantitative risk assessment is used to analyze the imported textile testing data and find the factors related to formaldehyde content. K-means algorithm is the core of the method. It can be concluded that the disqualified textiles have relations with main fiber components,fabric color,season month,and brand. Then the data in the same attribute are clustered by Kmeans algorithm. The different classes are defined as related danger level,respectively severe,moderate,and light.     

用SAFETI定量评价液氯泄漏事故的风险

基于液氯储运过程中的安全现状分析和事故统计,结合挪威船级社的定量风险分析软件SAFETI（Software for Assessment of Flammable,Explosive and Toxic Impacts）,分析了氯气的危险特性以及液氯储运过程中因泄漏而导致的毒害危险性,归纳出了液氯储运过程中可能发生的各种泄漏事故类型;并运用SAFETI软件对某液氯槽车发生泄漏后的毒性危害后果及风险进行定量评价,建立具针对性的评价模型,模拟预测事故后果及风险,取得了液氯泄漏毒害事故危害程度和范围及造成的个人风险和社会风险的计算机模拟图表及报告等,对预测、预防液氯泄漏毒害事故以及减少事故造成的人员伤亡和财产损失具有X-．程应用价值．     

含硫气井定量风险分析方法

随中国经济对石油天然气能源依赖程度的加深,大力开发含硫化氢气田成为重要任务,而定量评价含硫气井的风险显得更加必要和迫切。提出了含硫气井井喷事故硫化氢泄漏扩散过程中个人风险定量计算方法,根据相关统计资料,提出了井喷事故概率的参考值．将该方法应用于川渝地区某含硫气井。获取了该井周边区域个人风险等值线,并与可接受风险水平进行对比分析。结果表明,由于地形条件的影响。在气井周边不同方向的个人风险水平差异很大,可接受风险水平上限值等值线距井口的距离在不同方位上相差可达1000m。在对气井进行定量风险分析时必须充分加以考虑。该方法可为油气田开发企业、安全监管部门对含硫气井开发过程实施定量风险评价和管理提供有效技术手段,并为应急计划区的划分及边界确定提供参考。     

操作风险的定量分析及其在远洋运输中的应用

风险事故中,误操作导致的风险占风险事件总数的比例很大.对操作风险(OperationRisk,OR)进行了定量分析,并将其应用到船舶远洋运输中.利用风险辨识的方法找出潜在的风险因素,然后运用定量风险评估技术对操作风险事件进行定量计算,并对风险事件按照风险值大小进行排序,给出控制措施.船舶远洋运输进行操作风险定量分析可以降低风险发生概率,减小事故损失.     

一种定量的信息安全风险评估模型

目前人们采用的信息安全风险评估方法基本局限于定性或半定量的方法。采用概率风险分析的方法,通过故障树分析网络系统被攻击的根本原因,并对网络构成的实质进行了剖析,同时分析了系统漏洞的类型及对攻击结果进行了分类,在此基础上建立了定量风险计算模型。     

基于免疫的网络风险分布式定量评估模型

将人工免疫技术应用于网络系统风险评估中,提出并实现了一种基于免疫的网络风险分布式定量评估模型.模型依据生物免疫系统之抗体浓度的变化与病原体入侵强度的对应关系,对网络系统当前安全状况进行实时、定量的分析,从而有效地缓解网络攻击对系统造成的危害,提高网络系统的应急保障能力.仿真实验表明,模型能实时有效地对网络系统的风险进行...     

建筑策划中的风险识别与风险评价

通过对建筑策划过程中存在的风险因素进行分析,提出了建筑策划的风险评价指标体系,并运用模糊数学原理建立了建筑策划风险的模糊综合评价模型.从而提高建筑策划的科学性,使建筑作品更好地满足社会、环境、经济等方面的要求.     

生态风险评价研究述评

生态风险评价是20世纪90年代以后兴起的新的研究领域,是环境风险评价的重要分支,也是环境管理和决策的科学基础。简要评述了生态风险评价相关的基本概念、评价方法和框架体系,重点讨论了生态风险评价的若干关键问题,并据此对生态风险评价研究的发展趋势进行了讨论。     

浅析生态风险及其评价方法的要点

生态风险评价(Ecological Risk Assessmem)是风险论与生态学、环境科学、地学等多种学科相互交叉的边缘学科，它是环境风险评价的重要组成部分，关于生态风险的定量评价和综合研究是目前国际上的一个热点问题．本文探讨了生态风险评价的内涵及其相关的基本概念，并且着重论述了城镇化过程中引起的生态风险及其主要的评价方法要点和一些相关的理论．     

准军事化管理下的班级量化考核

介绍了浙江万里学院准军事管理下班级量化考核所取得的成果及经验,探讨了新的学生管理模式下,如何保证大学生的健康成长的问题。