灵芝多糖羧甲基化修饰及抗氧化性研究

灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP)具有良好的生物学活性,在医药、食品、化妆品等领域有广泛应用.本文以碱溶性灵芝多糖为原料制备羧甲基灵芝多糖(Carboxylmethylated GLP,CM-GLP),并考察其溶解性、红外光谱和体外抗氧化能力.结果显示,当氯乙酸用量3....     

羟乙基淀粉对内毒素感染大鼠中性粒细胞功能的影响及分子机制

检测羟乙基淀粉(HES 200／0．5)对内毒素腹腔感染大鼠中性粒细胞(PMN)功能的影响及其分子机理．雄性Wistar大鼠注射内毒素(LPS，6mg／kg，ip)以造成感染模型．LPS注射后1min，4种不同剂量的HES：3．75，7．5，15，和30mL／kg，分别由右侧颈静脉持续输注．LPS注射后2h及4h分别检测：循环血PMN核转录因子kappaB(NF-κB)水平，PMN表面CD11b表达，和多种组织中PMN浸润情况．HES(3．75和7．5mL／kg)，能降低LPS引起的NF-κB激活和肺、肝、心诸脏器PMN浸润增高．4种不同浓度的HES剂量依赖性地减少CD11b表达．HES对感染时PMN的激活和浸润有抑制作用，这种作用的产生与它对NF-κB的抑制有关．     

当归多糖对麻黄素小鼠肝组织抗氧化酶活性和NF-κB、TNF-α表达的影响

探讨当归多糖对麻黄素小鼠肝组织抗氧化酶活性和核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响及其可能作用机制.小鼠连续腹腔注射4.0g·L-1麻黄素溶液,同时用当归多糖溶液(12.5,25.0g·L-1)进行灌胃,分别在5,10,15d时用分光光度法检测各组小鼠肝组织T-AOC、GSH-PX活性的变化,免疫组化法检测小鼠肝组织中NF-κB和TNF-α表达的变化.结果显示实验对照组小鼠肝组织T-AOC、GSH-PX活性明显降低(P0.01),肝组织NF-κB和TNF-α表达量显著增强(P0.05或P0.01),而当归多糖组T-AOC、GSH-PX活性与实验对照组相比显著升高,NF-κB和TNF-α表达量明显降低(P0.05或P0.01).结果表明,麻黄素影响小鼠肝组织抗氧化酶活性和NF-κB、TNF-α的表达,当归多糖能够提高小鼠肝组织抗氧化酶活性,抑制NF-κB和TNF-α的表达,对麻黄素致小鼠肝损伤有一定的保护作用.     

Protectin DX 对老年大鼠肺损伤相关炎性因子 和氧化损伤的保护作用

目的 初步探讨 Protectin DX (保护素 DX,PDX)对老年大鼠肺叶切除术后肺损伤相关炎性介质及氧化因子 的调控及保护作用。 方法 将 30 只 SPF 级健康的老年雄性 SD 大鼠(10 月龄)随机分为假手术组( n = 10) 、手术组 ( n = 10) 、PDX 处理组( n = 10) 。 假手术组和手术组在造模 1 h 后腹腔注射 300 μL 生理盐水,PDX 处理组于造模 1 h 后腹腔注射 300 μL PDX(500 ng) 。 将所有大鼠于造模 24 h 后采用过度麻醉的方法处死,收集标本。 采用 HE 染色观察各组肺标本病理形态变化,评价各组大鼠肺标本的干湿质量比( W / D) ;检测肺泡灌洗液中蛋白浓度及相 关炎症因子的含量;检测肺组织中 MDA、ROS、SOD 的含量以及 HO-1、核因子 NF-κB 的蛋白表达量。 结果 假手术 组肺组织结构清晰,未见炎症细胞浸润;手术组老年大鼠肺组织结构紊乱,伴有大量炎症细胞浸润;PDX 处理组大 鼠肺组织结构不清晰,存在少量的炎症细胞浸润。 与假手术组相比较,手术组老年大鼠肺损伤评分及肺组织 W / D 显著增高( P<0. 01) ,肺泡灌洗液中蛋白浓度及 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 含量明显增加( P< 0. 01) ,肺组织中 MDA、ROS 含量及 NF-κB 蛋白表达显著升高,SOD 活性及 HO-1 蛋白表达明显降低( P< 0. 05) 。 与手术组相比较,PDX 处理组 老年大鼠肺损伤评分及肺组织 W / D 显著降低( P<0. 01) ,肺泡灌洗液中蛋白浓度及 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 含量明显 下降( P<0. 01) ,肺组织中 MDA、ROS 含量及 NF-κB 蛋白表达显著降低,SOD 活性及 HO-1 蛋白表达明显升高( P < 0. 05) 。 结论 PDX 能够明显减低老年大鼠肺叶切除术后的肺损伤程度,这种作用可能与其调节肺组织中 HO-1、 NF-κB 蛋白的表达从而抑制肺部的氧化应激反应和炎症反应相关。     

初探L-同型半胱氨酸对小鼠内毒素急性肺损伤的影响

目的:探讨L-同型半胱氨酸(L-HCA)对脂多糖(LPS)所致急性肺损伤的影响及其作用机制。方法:昆明种小鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、模型组(LPS组)、L-同型半胱氨酸处理组(LPS+L-HCA组)和L-同型半胱氨酸对照组(L-HCA组)。腹腔注射LPS(15mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型。造模6h后测定肺组织湿重/干重(W/D)、肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量测定以及乳酸脱氢酶(LDH)活性的测定、肺组织匀浆中髓过氧化物酶(MPO)活性的测定。结果:LPS可显著提高小鼠肺W/D、BALF中蛋白含量和乳酸脱氢酶(LDH)的活性、肺匀浆MPO活性(P<0.05),L-HCA处理组可有效减轻LPS所引起的上述变化(P<0.05)。结论:L-HCA对脂多糖导致的小鼠急性肺损伤有保护作用,其保护机制可能与抑制胱氨酸/谷氨酸转运体的活性,进而减少谷氨酸对肺部的损伤有关。     

盲肠结扎穿刺致豚鼠急性肺损伤及NF-κB活化阻断剂治疗作用研究

研究和建立败血性急性肺损伤的动物模型，并观察联用NF-κB活性阻断剂对肺损伤动物的治疗作用。方法：用盲肠结扎穿刺(CLP)法建立豚鼠急性肺损伤模型。同时经口给予布活芬167mg／kg和肌肉注射VitE 174mg／kg，结合动脉血气分析、外周血白细胞计数、肺湿重／干重比值(W／D)及肺组织病理观察，免疫组化方法研究肺组织NF-κB的活化。结果：CLP组动物在6h后开始缓慢出现症状，呼吸急促100～110次／min(正常呼吸80～95次／min)，蜷缩。对外界刺激敏感；16h有少量泡沫状分泌物由鼻腔溢出，呼吸变得窘迫，倦怠，卧伏，不喜活动；24h呼吸窘迫十分显著，泡沫状分泌物(带血性)由鼻腔溢出明显增多，呼吸频率为100～140次／min；CLP24h内死亡率可达10％，24～40h死亡数可达30％，40～56h死亡数可达80％。动脉血PaO2在12h开始明显下降，24h以后有恶化趋势，PaO2持续低于10kPa，外周血白细胞计数从12h开始降低，24h明显降低。术后24h已经表现出急性肺损伤。肺组织NF-κB表达活跃，最后导致动物败血性休克，于2d左右出现大量死亡；给药组动物症状有所缓解，最终死亡率为60％，肺组织NF-κB表达程度较模型组低。结论：利用CLP法可以在豚鼠上建立急性肺损伤模型，在肺损伤早期联合应用NF-κB活化的阻断荆，有助于提高急性肺损伤(ALI)的存活率，减轻ALI症状。     

高内涵筛选NF-κB信号通路的技术体系建立

NF-κB是参与免疫调节、炎症反应、肿瘤发生等过程重要的转录因子,在TNFα、IL-1β、LPS等因子诱导下NF-κB发生核转位并激活其转录活性。尝试利用高内涵筛选(High Content Screening,HCS)和RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术建立NF-κB核转位高通量筛选体系,该体系的应用将有助于发现新的NF-κB信号通路调节因子,为免疫与肿瘤的机制研究提供线索。     

灵芝黄芪复配物提高环磷酰胺对荷瘤小鼠的疗效

研究灵芝(Ganoderma lucidum)黄芪(Astragalus)复配物对环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)治疗的荷瘤小鼠肿瘤和免疫功能的影响.建立小鼠S180肉瘤模型,每日灌胃低、中、高剂量的灵芝黄芪复配物,并配合腹腔注射CTX.连续处理小鼠2周后,分析抑瘤效应,测定小鼠脾指数、胸腺指数、外周血白细胞(white blood cell,WBC)数和红细胞(red blood cell,RBC)数等免疫指标.同单CTX治疗组相比,中、高剂量的灵芝黄芪复配物能显著加强CTX对小鼠S180肉瘤的抑制作用(P<0.01),明显改善CTX引起的小鼠胸腺萎缩(P<0.01)和白细胞减少症状(P<0.05,P<0.01).灵芝黄芪复配物对CTX的抑瘤治疗具有明显的增效减毒作用,其效果堪比于单味中药灵芝提取物辅助CTX的抑瘤疗效,可大大降低单味灵芝提取物的治疗成本,经济价值可观.     

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)基因调控不同地源灵芝孢子粉次生代谢产物的差异

目的 探讨不同地源灵芝孢子粉携带尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphorylase,UGPase)基因在转录水平上的差异表达,以及对灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP)含量的影响.方法 采集不同地源灵芝孢子粉共7批18份,通过水浸煮-醇沉法提取GLP,应用苯酚-硫酸法计算GLP含量.克隆、测序UGPase基因,荧光定量PCR检测UGPase-mRNA.结果 灵芝孢子粉GLP检测结果显示:吉林产含量为(3.3610±0.0046)％,云南产含量为(2.8870±0.0059)％,××堂孢子粉含量为(2.3990±0.0053)％,差异具有统计学意义(P<0.05);克隆UGPase基因测序结果显示:不同地域灵芝孢子粉携带UGPase基因序列相同,与Genbank中UGPase基因序列(Sequence:KM260167.1)核苷酸同源性达100％.UGPase-mRNA检测结果显示:吉林产灵芝孢子粉为表达量最高.结论 不同地源灵芝孢子粉GLP与UGPase-mRNA相对表达量存在差异.UGPase基因在高多糖灵芝菌株中存在明显的表达优势,与GLP的生物合成呈正相关,该机制为深入研究GLP的生物合成提供了理论依据.     

急性肺损伤模型中Sdr9c7基因的作用研究

检测了经鼻腔滴注脂多糖(LPS)溶液诱导的急性肺损伤模型小鼠肺组织Sdr9c7基因表达变化,并探讨其在急性肺损伤的作用.取9只雌性C57BL/6小鼠随机分为空白组、第3天组和第7天组,每组3只.第3天组和第7天组小鼠用LPS诱导急性肺损伤模型,第3天组于LPS诱导的第3天终止实验,第7天组于LPS诱导的第7天终止实验,...     

枸杞多糖通过抑制NF-κB信号通路保护脂多糖损伤的人脐静脉血管内皮细胞增殖活性与分泌功能

目的:观察枸杞多糖(LBP)对脂多糖(LPS)致人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,分为空白对照组、LBP组、LPS模型组、LBP+LPS实验组,采用CCK-8法检测细胞活力,Western-blot法检测诱导型一氧化氮活酶(iNOS)、Caspase-3及NF-κB p65蛋白水平,ELISA法检测上清液TNF-α、IL-1β水平,Gries法测上清一氧化氮(NO)含量,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA).结果:与对照组相比,LPS模型组HUVEC增殖活力显著下降,NF-κB p65蛋白、iNOS、NO、TNF-α、IL-1β、MDA及Caspase-3水平显著升高,LBP处理则可部分增加受损内皮细胞的增殖活性,NF-κB p65蛋白、iNOS、NO、TNF-α、IL-1β、MDA及Caspase-3水平显著下降.结论:枸杞多糖对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,与抑制NF-k B信号通路、抑制促炎因子TNF-α和IL-1β释放,抑制NO合成、减轻氧化应激,抑制凋亡蛋白Caspase-3表达有关.     

元宝枫叶黄酮抑制脂多糖诱导的小胶质细胞激活的作用

 探讨枫叶黄酮对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞株BV-2细胞炎性因子释放的抑制作用.用LPS刺激BV-2细胞构建炎症模型,采用免疫荧光双标和RT-PCR方法检测不同浓度枫叶黄酮(5,10,15μmol/L)对细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和环氧合酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)、细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-1β (interleukin-1β,IL-1β)、炎性信号蛋白核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白与mRNA的表达变化.结果发现:不同浓度的枫叶黄酮在翻译水平和转录水平上明显抑制了LPS诱导的细胞炎性蛋白酶iNOS和COX-2,细胞炎性因子TNF-α和IL-1β与炎性信号蛋白NF-κB的上调.上述结果表明枫叶黄酮可通过调控LPS诱导的小胶质细胞株BV-2细胞炎性因子释放从而抑制小胶质细胞激活,发挥抗神经炎症的作用.     

松杉灵芝化学成分及药理活性的研究进展

松杉灵芝(Ganoderma lucidum(Curtis)P.Karst)的化学成分包括三萜、多糖、甾体、脂类、氨基酸和微量元素等。松杉灵芝具有广泛的药理学活性,主要包括抗肿瘤、抗高血脂、抗氧化、消炎等作用。本文对松杉灵芝的化学成分、药理作用进行了综述。     

灵芝及灵芝孢子的研究初探

灵芝(Ganoderma Lucidum)为我国传统名贵药材，历来被国人称为草木精英。灵芝孢子(G．lucidum spores)是灵芝的生殖细胞，具有灵芝的全部遗传活性物质。对灵芝和灵芝孢子的有效成分及药理作用进行了研究。     

核转录因子κB与肿瘤坏死因子-α对子宫内膜异位的影响

目的:检测核转录因子(NF-κB)在子宫内膜异位症(EM)患者异位内膜及在位内膜组织中的表达,以及其血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化,探讨NF-κB与TNF-α在EM发病机制中的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定TNF-α的表达,免疫组化SP法检测NF-κB的表达情况。结果:子宫内膜异位症(EM)组血清TNF-α含量显著高于对照组(P<0.01),且表达量随病情加重有上升趋势(P<0.05)。EM患者中异位内膜组NF-κB表达强度显著高于在位组及对照组(P<0.01)。结论:NF-κB与TNF-α在EM患者异位内膜中的异常高表达与EM的发病有密切关系。     

马钱子苷对小胶质细胞活化的抑制作用

为探讨不同浓度的马钱子苷对小胶质细胞活化的抑制作用及其相关分子机制,分离培养了小鼠原代小胶质细胞,用不同浓度的马钱子苷（50、100、200 μmol/L）预处理后,利用脂多糖（lipopolysacharide,LPS）诱导其活化。观察马钱子苷对LPS诱导的小胶质细胞活化、炎症因子释放以及NF-κB信号通路的影响。结果显示:与对照组相比,LPS组小胶质细胞胞体膨大,分泌大量炎症细胞因子,且NF-κB核转移程度增加（P<0.05）,小胶质细胞呈明显的M1型活化状态;低、中、高浓度的马钱子苷干预后,小胶质细胞的细胞总面积和细胞核面积显著减少（P<0.05）;中、高浓度的马钱子苷能使TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平降低（P<0.05）;中浓度的马钱子苷下调TNF-α和IL-1β的蛋白质水平（P<0.05）;此外低、中、高浓度的马钱子苷可以抑制小胶质细胞内iNOS表达和NF-κB信号通路激活。上述结果表明,马钱子苷可明显抑制小胶质细胞活化,减少炎症因子释放,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。这为马钱子苷应用于神经炎症的预防和治疗奠定了理论基础。     

"两次打击"急性肺损伤大鼠肺组织NF-kB p65 mRNA的表达

目的观察用油酸(OA)和脂多糖(LPS)两次打击急性肺损伤大鼠肺组织核因子———kB(NF_kB)p65 mRNA表达量的变化,探讨转录调节因子NF_kB p65与急性肺损伤的关系。方法用OA(0.2mL/kg)和LPS(2mg/kg)两次打击,建立两次打击急性肺损伤(ALI)模型,进行ALI大鼠血液白细胞(WBC)分类计数和肺指数测定、肺组织病理学检查,采用原位杂交检测肺组织中NF_kB p65 mRNA的表达。结果两次打击后的ALI大鼠血液中WBC和肺指数显著升高,WBC分类呈现淋巴细胞比率降低而中性粒细胞比例增高的变化,呈典型的急性炎症表现,肺脏病理改变严重。原位杂交检测显示,ALI大鼠肺组织细胞中NF_kB p65 mRNA的表达明显增强。结论在ALI大鼠肺组织细胞中NF_kB p65 mRNA的表达量增强,参与了急性肺损伤的发病作用。     

红景天苷对LPS诱导大鼠心肌损伤的保护作用及机制研究

研究红景天苷(Salidroside)对脂多糖(LPS)致大鼠心肌损伤的保护作用及机制。雄性清洁级SD大鼠50只,随机分组,分为对照组(NS)10只、LPS模型组(10 mg/kg)10只、红景天苷小剂量(Sal 5 mg/kg)组10只,红景天苷中剂量(Sal 20 mg/kg)组10只,红景天苷大剂量(Sal 50 mg/kg)组10只。腹腔注药后6 h测定左心室收缩压(LVSP)、左心室内压上升及下降最大变化速率(±dp/dtmax)等心功能指标。采用ELISA法和Western blot法测定TNF-α、Toll样受体4和核因子κB蛋白表达。结果显示:与对照组比较,LPS可明显抑制大鼠左室功能,显著增加大鼠心肌TNF-α、TLR4和NF-κB的表达。而与模型组比较,红景天苷可剂量依赖性地下调心肌TLR4、NF-κB及TNF-α表达,改善大鼠左室功能。可见,红景天苷对LPS诱导的大鼠心肌损伤具有一定的保护作用,其机制与抑制TLR4-NFκB-TNFα炎症信号转导通路密切相关。     

内脂素对心肌细胞ICAM-1和VCAM-1及相关因子的影响

为阐明内脂素(Visfatin)在心肌细胞炎性反应中对黏附分子ICAM-1和VCAM-1表达的影响及分子机制,利用原代培养心肌细胞在脂多糖(LPS)刺激发生炎性反应的基础上,检测了Visfatin对ICAM-1和VCAM-1表达的影响,并进一步检测了Visfatin对NF-κB以及NF-κB抑制蛋白Ⅰ-κB及磷酸化的影响.结果表明:Visfatin对LPS诱导的原代心肌细胞炎性因子ICAM-1和VCAM-1的表达具有显著的促进作用,而这一过程是通过促进Ⅰ-κB的磷酸化,增加NF-κB p65的核转移,启动下游的黏附分子mRNA转录和蛋白的表达实现的.     

氨磷汀对急性放射性肠炎小鼠NF-κB 通路和VCAM-1、ICAM-1基因表达的影响

目的:研究氨磷汀对急性放射性肠炎小鼠小肠组织中核转录因子kappaB(NF-κB)通路和血管间粘附分子-1(VCAM-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因表达的影响和意义.方法:将小鼠分成对照组、实验组、氨磷汀腹腔注射干预组,采用6Gy 60Coγ-射线全身辐射,于第1、7、14天分批处死小鼠观察病理改变.实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测不同时间点对照组、实验组和氨磷汀干预组NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA表达水平的变化.结果:辐射后实验组、干预组均可见明显黏膜下层微血管损伤,干预组损伤较实验组轻.辐射后第1天实验组、干预组小鼠小肠组织中NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA表达水平均显著升高(P0.05),干预组升高水平显著低于实验组(P0.05);第7天实验组各基因mRNA水平均呈下降趋势但仍高于对照组(P0.05),干预组达到或接近对照组水平;第14天实验组、干预组各基因mRNA表达水平与对照组比较无统计学差异(P0.05).结论:急性放射性肠炎早期即发生NF-κB、VCAM-1、ICAM-1基因mRNA的表达上调,可能在辐射后微血管损伤中发挥作用,氨磷汀可能通过下调上述基因表达对微血管起到保护作用.