云南省Seo型汉坦病毒基因差异研究档

为揭示云南省啮齿类动物携带的汉坦病毒的基因型及亚型,从来自云南的7个免疫荧光检测阳性的鼠肺标本中提取出病毒RNA,通过逆转录和巢式PCR获得了M片段G2区.序列分析表明,云南省内啮齿类动物携带病毒多为SEO型,且SEO型病毒间较为保守,相似性为93.7%～99.7%,且多在97%以上,系统发生树分析表明,云南省内SEO型病毒在构建的种系发生树上处于两个分支,分属于S1及S3亚型.     

呼伦贝尔市啮齿动物携带汉坦病毒的基因分型研究

为了研究内蒙古自治区呼伦贝尔市啮齿动物中汉坦病毒(HV)的型别及携带病毒情况,采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原,用RT-PCR法扩增阳性标本中HV的S(620~999nt)片段,使用clustalX(1.83)以及Phylip3.63构建系统发生树进行分型研究。结果表明,在呼伦贝尔市HFRS疫点共捕获啮齿动物185只,在7份鼠肺样品中检测到HV抗原,其中6只为黑线姬鼠,1只为大林姬鼠,病毒携带率为3.78%。扩增到其中6份HV抗原阳性样品中S片段(620~999nt),分析获得的序列表明与现有的HTNV有最高的同源性,均为HTNV。其中NAa90、NAa118、NAa121和NAp137这4株病毒与分离自黑龙江黑线姬鼠的Bao14株分在同一分支,与病毒的亲缘关系最近,而NAa78、NAa100这2株病毒构成另一分支,与A9株的同源性为94.5%~95.5%,用部分M(2001~2301nt)片断的核苷酸序列构建的系统进化树与S片段的结果一致。结论:呼伦贝尔市的黑线姬鼠与大林姬鼠携带不同亚型的HT-NV,表现出HTNV在同一地区的遗传多样性。     

巴彦淖尔地区汉坦病毒的分子流行病学调查

目的：对巴彦淖尔地区进行汉坦病毒的分子流行病学调查．方法：采用间接免疫荧光法（IFA）对在野外捕获的鼠肺样品进行初筛,用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）扩增IFA阳性标本中汉坦病毒的S基因片段,以S基因片段（620—999nt）的核苷酸序列构建系统发生树并进行分子进化分析．结果：捕获的200只中有褐家鼠141只（70．5％）,黑线仓鼠40只（20．0％）,小家鼠19只（9．5％）;IFA检出6份阳性标本,均来自褐家鼠,其S基因均为S1亚型．结论：巴彦淖尔地区褐家鼠携带S1亚型汉坦病毒．     

抗汉坦病毒单链抗体双元载体的构建

利用PCR方法,从含有1A8 scFv基因的重组质粒中扩增出抗体基因,并使基因两端携带合适的限制性酶切位点。经多步连接将其克隆入植物表达载体pBI121或pCAMBIA1305．2。酶切结果证明1A8 scFv基因被成功克隆入植物表达载体pBI121及pCAMBIA1305．2,构建获得1A8 scFv-p BI121及1A8 scFv pCAMBI A1305．2重组质粒,并将其转入农杆菌GV3101。抗汉坦病毒mAb 1A 8scFv植物双元表达载体的获得,为进一步在植物中表达该抗体片段奠定了基础。     

人和鸡溶菌酶结构保守性的对比研究

人体内的溶菌酶在第56位、第67位残基发生自发突变的情况下可以通过分子间的聚集形成淀粉样病变,产生一系列的临床症状甚至导致死亡.本研究基于STAMP结构比对算法,使用VMD软件主要从结构角度比较了人、鸡、狗、鼠四种脊椎动物溶菌酶的相似程度及亲缘关系,结果发现鸡的溶菌酶与人的溶菌酶结构最相似,亲缘关系最接近,并且人和鸡的溶菌酶的第56位和第67位两个残基位点在结构上高度保守.该发现为现在流行的以鸡溶菌酶为模型研究人溶菌酶引起的淀粉样病变的致病机制及治愈方法的可行性提供了必要的理论依据.     

苜蓿花叶病毒复制酶基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建

以侵染苜蓿的苜蓿花叶病毒中国分离株(Alfalfa mosaic virus Chinese isolate，A1MV—Ch)RNA2为模板，利用人工合成的特异性引物，进行反转录及PCR扩增，分两段分别扩增了复制酶基因的5′端1．32kb和3′端及其非编码区的1．23kb cDNA序列．用限制性内切酶切割PCR产物后，与pUCl9重组，转化大肠杆菌DH5α，筛选重组质粒，用限制性内切酶分析及PCR鉴定，得到分别含有5′端序列和3′端序列的重组质粒。已由上述两种重组质粒构建了含有完整复制酶基因的重组质粒．进行了全序列测定，并与国外报道的A1MV-425株系的相应序列相比较，其复制酶基因编码区核苷酸序列同源性达97．8％，推测的氨基酸序列的同源性达97．6％，3′端非编码区核苷酸序列同源性为98．2％．并将全长复制酶基因与植物表达载体pROKⅡ重组，得植物转化载体pAlMV—FL．     

甜瓜多聚半乳糖醛酸酶基因cDNA的克隆和序列分析

以甜瓜品种河套蜜瓜成熟果实mRNA为模板，经反转录合成和PCR扩增得到编码多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase，PG)基因全长cDNA，将其克隆于pUC19质粒中获得重组质粒pCMPG．此cDNA长1183bp，包括一个393个氨基酸残基组成的开放阅读框架，与已报道的甜瓜PG基因cDNA核苷酸序列比较同源性为99．3％，相应的氨基酸的同源性为98．5％．     

2株甲型肝炎病毒蛋白酶2A核苷酸序列的测定与比较

从甲型肝炎病毒２个不同株感染的ＫＭＢ１７细胞中提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ特异性扩增出此２毒株病毒蛋白２Ａ基因,将２个２Ａ基因克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经ＤＮＡ序列测定,得到２个２Ａ基因的核心苷酸序列,序列比较发现它们及与ＨＡＶ野毒株相对应序列有突变存在,Ｈ２株与ＨＭ１７５相比有一个点突变,同源性为９９．７２％;与ＨＭ１７５比较,Ｈ２株和Ｌ８株第３１９７位核苷酸均由Ａ突变为Ｇ,相应的氨基酸由丝氨酸     

委内瑞拉产地龙须菜藻红蛋白基因的克隆及其系统学研究

本文报道了红藻Gracilaria lemanei formis委内瑞拉株的藻红蛋白基因的部分序列，将序列与其它红藻-Rhodella violacea，Polysiphonia boldii，Griffithsia monolis，Porphyra tenera，phyra yezoensis及青岛产龙须菜的相应序列对齐后，进行了系统学研究。结果显示，同一属的藻白α和β亚基之间的间隔序列，从长度到核苷酸序列均非常相似，而同一科不同属或同一目的科该序列有很大的不同；两不同产地龙须菜的PE基因在β亚基上的转换多于颠换，说明β亚基比α基保守；委内瑞拉来源龙须菜与青岛产地龙须菜可能不属于同一物种，应为同属不同种关系；由蛋白基因所得的系统树包括3个与建立在形态标准上的遗传位置一致的分支；藻红蛋白基因序用于种间及更高地位的分子系统研究。     

苏铁在种子植物进化中的位置：分子生物学的证据

用大分子rRNA快速测序法测定了苏铁(Cycas revoluta Thunb.)、水松[Glyptos-trobus pensilis(Staunt.)Koch]和南方红豆杉[Taxus mairei(Lemee et Levl)S.Y.Hu]三种裸子植物Ls-rRNA5′端区108个核苷酸的序列。用这些数据构建的rRNA系统树揭示了苏铁与水松和南方红豆杉构成一个关系密切的姐妹群,而所分析的被子植物都为另一自然类群。另以绿藻作为种子植物群外参照物种,表明苏铁这一位置并不是由于一个特异的进化速度所造成的。这一结果支持了苏铁与松杉类为一自然群类,它们的分歧发生在裸子植物与被子植物分歧之后的假说。     

葱蝇谷胱甘肽S - 转移酶基因的克隆与序列分析(动物科学)

谷胱苷肽S-转移酶(GST)是昆虫体内广泛存在的一类解毒酶,可以保护机体免受内源性或氧化物的损害。昆虫对一些杀虫剂的抗性与GST表达水平增高有关。GST的研究主要集中在杀虫剂抗性上,可将其作为昆虫的药物靶标,设计和开发新型的杀虫剂。采用RACE的方法,克隆了葱蝇(Delia antiqua)GST基因cDNA的全长序列(GenBank登录号:JQ625502),获得的cDNA全长874bp,其中阅读框ORF 627bp,编码208个氨基酸,推测其相对分子质量为23.9kD,等电点为5.83。通过该基因推导的氨基酸序列与其它物种的GST蛋白进行相似性比较和系统发育分析,发现葱蝇与丝光绿蝇(Lucilia cuprina)的谷胱甘肽转移酶氨基酸序列同源性最高。该结果进一步丰富了GST基因的基础数据,有助于葱蝇的杀虫剂抗性机理和发育机理的相关研究。     

系统发育分析在古DNA研究中的应用

介绍了系统发育分析的基本原理及各种构树方法的统计学基础,阐述了各种分析方法在古DNA数据分析中的具体应用,并对各种方法的优缺点进行了评价.分析了系统发育分析的局限性和发展趋势,以及古DNA研究的不断发展对其所提出的问题.     

Cloning,Sequencing and Phylogenetic Study of rbcL Gene from Cyanobacteria Arthrospira and Spirulina

Large subunit gene of rubisco (rbcL) of cyanobacteria Arthrospiraplatensis FACHB341, A. platensis FACHB439, A. maxima OUQDSM and Spirulina sp. FACHB440 is cloned, sequenced and characterized. Results show that GC content of the gene in strain Spirulina sp. FACHB440 is higher than that in the others. The alignments based on deduced amino acid sequences indicate that Spirulina sp. FACHB440 is different from that in other three samples of Arthrospira, though they have the same conserved functional sites (95, 98, 121, 124, 221, 257). The nucleotide sequence similarity among the three strains of the genus of Arthrospira (96.5 - 99.6% ) is higher than that between Arthrospira and Spindina (78.1 - 78.5 % ). By comparison of the corresponding sequence of other cyanobacteria, a phylogenetic tree with two clusters is constructed. A. platensis FACHB341, A. maxima OUQDSM and A.platensis FACHB439 form the monophyletic linage, which is fully supported by bootstrap values (1000), while Spirulina sp. FACHB440 and Anabaena sp. PCC7120 cluster in another linage with the bootstrapvalue of 909.     

用SnaP Shot的方法对线粒体7146位点进行基因分型

利用SNaP SHot的方法对线粒体7146位点在7300人的样品中进行基因分型，这个位点在非洲人群中存在2种等位基因，但是在非洲人群中仅存在突变型，这个研究对利用线粒体研究人类进化，特别是对东亚人群的起源有较大的应用价值，同时还建立了一套大规模，高通量的SNP分型技术平台。     

内生真菌JSM 10的分离及鉴定

以蛇足石杉为材料,经过严格的表面消毒,分离纯化得到1株内生真菌JSM 10.对JSM 10进行培养特征、显微形态观察和基于ITS序列的系统发育分析.结果表明：菌株JSM 10和Fusarium属的 Fusarium oxysporum菌株系统发育关系最为密切,聚在同一个小枝上,相似程度为99%.因此,从系统发育分析来看,JSM 10应为Fusarium oxysporum菌株.     

马铃薯卷叶病毒中国株(PLRV-Ch)ORF2a基因3′端的克隆和序列分析

用设计合成的一对特异性引物，以马铃薯卷叶病毒中国株PLRV-Ch的RNA为模板，经反转录PCR扩增，将获得的ORF2a的3′端1kb cDNA克隆于pUCl9中，构建成重组质粒pLR7，经PCR检测、酶切检测，表明获得了ORF2a的3′端1kb cDNA克隆．从两端进行了两次序列分析，将获得的核苷酸序列与国外报道的四个PLRV分离株的相应区域的同源性进行了比较．结果表明它们具有高度同源性．文中对核苷酸中存在的可能移码序列及其下游的茎环结构(或假节结构)，以及上游特征性三次重复序列进行了分析和讨论，发现上游特征性三次重复序列连续排列可形成几个连续的互补双链区和发夹结构，这一结构可能与移码有关．