拟南芥CBF基因的克隆

CBFs是拟南芥中能与低温响应元件CCGAC结合的转录因子，通过诱导冷调节基因(COR)的表达从而增强植物的耐冻性。CBFs由一个小的基因家族编码，包括3个成员：CBF1、CBF2和CBF3，在序列上高度相似。我们根据其编码基因的启动子和终止子中的一致序列，设计了一对PCR引物，用一次反应即同时获得了这3个基因的克隆。     

佛手GRAS基因的克隆及表达分析

利用抑制消减杂交法从芸香科柑橘属不耐寒植物佛手中分离得到了一个表达序列标签(EST)片段,结合RACE技术克隆获得该基因的1 669 bp序列,编码区长1 236 bp,编码413个氨基酸.通过Blastn同源序列比对分析,结果显示该基因与拟南芥已知的GRAS基因同源性较高;与GenBank数据库比对分析,表明该基因具有GRAS特有的保守结构域.因此,命名该基因为:CmsGRAS(GenBank登录号:JF440647).用荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)的方法研究了该基因在低温胁迫处理下的表达特性,结果显示该基因在低温胁迫后的表达量有明显的变化.     

独行菜eEF-1 a基因片段分离克隆及RT-P CR分析

文章根据已知植物eEF-1a（编码 Eukaryotic elongation factor1-alpha）基因的保守序列设计引物,采用 RT- PCR的方法扩增独行菜（Lepidium apetalum Willd．）eEF-1a基因片段。结果获得一大小为570bp 的基因片段,序列比对表明,该基因片段与拟南芥eEF-1a基因核苷酸序列的同源性达到95％,推测该其应该是独行菜eEF-1a基因片段。采用RT- PCR方法,对独行菜三个生长阶段材料及对应阶段冷诱导后地材料中的eEF-1a基因表达作了分析,表明eEF-1a在独行菜组织中表达稳定,可以作为实时荧光定量 PCR研究独行菜基因表达分析中的看家基因。     

小拟南芥几丁质酶基因cDNA的克隆与序列分析

通过合成1对特异引物，应用RT-PCR技术从小拟南芥总RNA中经反转录克隆出几丁质酶基因，该cDNA基因全长985bp，含有1个963bp的开放阅读框(ORF)，编码321个氨基酸，推测分子量为35．53kD，序列同源性分析表明，该基因与拟南芥几丁质酶基因有93％的同源性。     

水稻中ACOS5同源基因在小穗中的表达分析

ACOS5是控制拟南芥雄性育的关键基因之一,它也是编码花粉素合成必需的酶.利用氨基酸同源序列分析,在数据库中检索与拟南芥ACOS5同源性较高的植物同源蛋白.将检索出的水稻中同源氨基酸序列与ACOS5进行比对,两者一致性为64%.并且通过同源蛋白系统发生分析,两者在进化上关系也较为密切.根据水稻中同源蛋白基因组序列设计引物,进行低温处理下该基因在小花发育各时期的表达量分析.半定量RT-PCR显示,在水稻小孢子母细胞形成期其表达量较低,而当小孢子开始减数分裂时,表达量急剧增高.在这两个时期,低温(20℃)会诱导OsACOSmRNA积累增加;但当处于小孢子形成阶段时,低温下积累量却呈现相反的降低趋势.这说明环境温度显著影响水稻中ACOS5同源基因的转录表达,而这种影响与小花发育时期有关,提示水稻ACOS基因可能参与环境温度调控水稻雄性育性的过程.     

白菜型油菜RAV基因的克隆及表达分析

基于拟南芥RAV类转录因子的序列,通过RACE方法获得白菜型油菜RAV基因的cDNA序列,全长1 306bp,其中包括5′-UTR109bp,3′-UTR171bp,开放阅读框1 026bp,编码341个氨基酸,预测蛋白分子量为38.03u,理论等电点为9.2,含有相对保守的AP2和B3结构域.多序列比对和系统进化分析表明,油菜RAV与拟南芥RAV1具有很高的一致性,为88.0%.实时荧光定量PCR结果表明,油菜RAV基因受低温和盐胁迫的诱导,推测该基因在响应非生物胁迫中发挥重要作用.     

拟南芥DnaJ蛋白的过量表达对细菌耐盐性的影响

热激蛋白是植物在各种环境胁迫下产生的一种蛋白,其表达与多种胁迫的抗性有一定关系。从野生型拟南芥cDNA中克隆获得了编码442个氨基酸序列的DnaJ基因,其与大肠杆菌DnaJ基因含有相同的J区和半胱氨酸富集区。将DnaJ基因构建到pET32a的原核表达载体,过量表达DnaJ基因的细菌在含有0.5 mol/LNaCl的培养基中仍然可以生长,初步推断DnaJ的表达与耐盐性有关。     

番木瓜果胶裂解酶基因片段的克隆及序列分析

以4个不同成熟阶段的番木瓜果肉cDNA为模板,经RT-PCR扩增仅在第四成熟度的番木瓜果肉中得到596 bp的PL基因片段,所得核苷酸序列通过Blast分析,该序列与草莓、拟南芥、芒果、葡萄等果胶裂解酶基因的相似性都较高,均在79 %-82 % 之间.     

诸葛菜(Orychophragmus violaceus)Toc33基因编码区的克隆及序列分析

以诸葛菜（Orychophragmus violaceus）新鲜嫩叶为材料提取总DNA，并以其为模板，根据已报道的拟南芥（Arabidopsis thaliana）Toc33基因的编码序列，设计一对PCR引物，扩增诸葛菜叶 本外膜蛋白转运器构件蛋白基因Toc33，得到两条扩增带，将这两条带分别割胶回收，与T载体连接转化E.coli，筛选重组子并测序，结果表明克隆到的这两个片段分别长1475bp，1573bp，通过同源性比较发现，它们之间的同源性达到88％，这两个片段与拟南芥Toc33基因有较高的同源性，分别命名为OvToc33-1,OvToc33-2。参考拟介Toc33外显子和氨基酸序列，分别确定了所克隆的两信诸葛菜Toc33基因片段的7个外显子和6个内含子，得到了诸葛菜Toc33基因的全编码区序列，并推导了其氨基酸序列，这两个DNA序列与拟南芥Toc33基因编码区的同源性分别高达91.8%和92.4%，说明这一蛋白是高度保守的。     

甘蓝抗病基因同源序列分离的初步研究

根据已分离植物抗病基因N(烟草)、RPS2(拟南芥)和L6(亚麻)的保守区域设计简并引物,从抗TuMV甘蓝材料84075第1链cDNA中扩增出1个与植物抗病基因同源的序列,经克隆测序结果表明,该基因片段与许多NBS类抗病基因同源,Southem杂交分析表明甘蓝抗病基因同源序列在基因组中以多基因家族的形式存在.     

美国白蛾取食金叶榆及家榆对其生长发育的影响

以金叶榆、家榆为寄主植物,研究了不同寄主植物对美国白蛾生长发育和繁殖的影响。结果表明,美国白蛾比较喜欢取食家榆。美国白蛾1代幼虫取食金叶榆叶片的存活率为15.0%,取食家榆叶片的存活率为36.7%,第2代幼虫取食金叶榆叶片的存活率为82.7%,取食家榆叶片的存活率为84.3%;美国白蛾取食金叶榆叶片从初孵第2代幼虫到蛹...     

薜荔药材不同提取部位的抑菌作用研究

目的：研究薜荔药材乙醇提取液不同提取部位的抑菌效果。方法：采用悬液定量抑菌实验测定薜荔药材乙醇提取液不同提取部位对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌效果。结果：对各菌种的抑菌效果：1、金黄色葡萄球菌：薜荔醇提取液〉乙酸乙酯萃取液〉正丁醇萃取液〉萃后剩余水液;2、大肠杆菌：薜荔醇提取液〉乙酸乙酯萃取液;3、白假丝酵母菌：萃后剩余水液〉石油醚萃取液。结论：薜荔醇提取液的乙酸乙酯萃取物的抑菌作用最强,石油醚部位仅对白假丝酵母菌有微弱的抑菌作用,故可弃去。     

薜荔花粉的营养成分研究

分析测定了薜荔分的营养成分，研究结果表明，其蛋白质含量３９．８８％，氨基酸总量为３９．４１％，必需基酸含量为１４．５６％，游离氨基酸含量为３０．０７ｍｇ／ｇ，氨基酸佞为９７分，并含有丰富的维生素、矿质元素、脂肪酸和总黄酮等营养物质，薜荔花粉资源丰富，营养成分全面，具有很高的开发利用价值。     

薜荔叶化学成分及其活性研究

采用硅胶柱层析、ODS反相柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、半制备高效液相HPLC等色谱分离方法对薜荔（Ficus pumila）叶80%乙醇提取物进行分离纯化,得到7个化合物。根据化合物的理化性质和核磁共振波谱数据比对文献,分别鉴定为：3-hydroxy-damascone (1),月桂酸乙酯（2）,马桑酸（3）,13-hydroxy-(9Z,11E,15E)-octadecatrienoic acid (4),乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷（5）,苄醇-β-D-葡萄糖苷（6）和2-[4-(3-hydroxypropyl)-2-methoxyphenoxy]-propane-1,3-diol (7)。其中化合物7为首次从该属植物中分离得到,化合物1为首次从该植物中分离得到。抗肿瘤活性测试结果表明,化合物1对A549细胞显示出一定的抑制活性,IC50值为32.21μg/mL。抗菌活性测试结果表明,所有化合物对测试的4株人体致病菌和2株弧菌均无明显抗菌活性。     

不同预处理对薜荔种子发芽的影响(Ⅰ)

研究了薜荔种子的萌发特性,以及不同浸种时间、不同浓度的HNO3、KNO3以及GA溶液对薜荔种子发芽的影响.结果表明:不同地区不同植株薜荔种子的各项发芽指标差异显著;浸种时间与种子发芽势之间存在相关性,适宜浓度的HNO3、KNO3以及GA溶液对薜荔种子发芽有促进作用.     

薜荔果实乙醇提取液抗氧化活性的初步分析

以不同体积分数(20%～95%)乙醇为溶剂,室温下经超声波辅助浸提,获得薜荔果实乙醇提取液.分别采用还原力法、DPPH法、TEAC法和FRAP法评估了不同提取液的抗氧化活性,并用Folin-Ciocalteu法测定了提取液中总酚的质量分数.结果表明:不同体积分数乙醇溶液获得的薜荔果实提取液表现出不同的还原力,清除DPPH*、ABTS*+能力及总抗氧化能力,乙醇体积分数对提取液的抗氧化活性影响显著,不同乙醇提取液的抗氧化活性从高到低依次为:80%,95%,60%,40%,20%,其中体积分数为80%的乙醇提取液的还原力、清除自由基及总抗氧化能力最强,在700 nm处吸光值为1.04,清除DPPH*半清除率质量浓度为 2.20 mg*mL-1,TEAC值为2.36,FRAP值为157.1,此结果与其提取液中总酚的质量分数(2.50%)最高相一致.     

Ca2+和GA3对早白菜苔和薜荔种子萌发的影响

用适宜浓度的钙和赤霉素及其复合溶液浸种处理早白菜苔、薜荔的种子,研究处理对种子萌发的影响.结果表明:(1)低浓度的Ca2 和GA3都可以明显提高种子的活力; (2)Ca2 和GA3的复合溶液对种子的萌发具有更良好的促进作用,各处理间具显著性差异,差异性主要是由GA3引起的; (3)Ca2 和GA3复合溶液处理的淀粉酶活性高于由Ca2 或GA3单独处理的,而且以后酶活性回降的幅度也是复合处理的小于单独处理的.     

家榆、金叶榆抗旱生理生化指标的差异性比较

为了筛选用于评价家榆、金叶榆抗旱能力的生理生化指标,采用随机区组、成对比较复合设计思想,对7项抗旱生理生化指标进行了比较。发现：随土壤含水量降低和干旱胁迫持续时间的延长,家榆、金叶榆的可溶性糖含量、游离脯氨酸含量、丙二醛含量、叶绿素含量、细胞透性均呈增加趋势;可溶性蛋白含量、自由水/束缚水呈降低趋势。在同等干旱胁迫条件...     

半根和全根水分胁迫对苹果幼苗超氧阴离子产生量及其与光合作用关系的影响

以一年生“嘎拉”苹果幼苗为实验材料,采用Hoagland营养液进行分根培养,通过向一侧根或者两侧根培养液加入20%聚乙二醇6000（PEG-6000）实现半根水分胁迫和全根水分胁迫,与仅含营养液的对照进行比较,模拟研究了定位灌溉条件下苹果组培苗叶片和根系中超氧阴离子含量的变化及与净光合速率的关系。结果表明,胁迫后第2-7d,全根水分胁迫显著增加了根系和叶片中超氧阴离子的产生量并导致SOD活性加强;半根水分胁迫对胁迫根系和叶片中超氧阴离子的产生量及SOD活性的影响小于全根水分胁迫,但半根水分胁迫对非胁迫根中的超氧了阴离子的产生量及SOD活性不存在显著的影响;全根水分胁迫显著降低源叶的净光合效率,且这种影响随胁迫时间的延长而加重,但半根水分胁迫对源叶的净光合效率不存在显著的影响。通过对叶片中超氧自由基产生量和净光合作用的相关性分析表明,叶片中超氧自由基产生量与净光合速率呈显著负相关。     

薜荔果胶的胶凝特性

对薜荔果胶胶质的胶凝特性及其主要影响因子--pH值、温度和Ca2+等进行了研究，确定了该胶质胶凝的pＨ值范围，保持最适凝胶状态的最适温度以及Ca2+对不同pH条件下的胶质溶液的胶凝作用.