P转位子诱变的果蝇心脏发育基因的突变(Ⅰ)——第2染色体基因突变

果蝇和脊椎动物的心脏早期发育具有平行的基因控制机理，果蝇是替代人体心脏进行基因功能研究的理想模式．利用Ｐ转位子作为诱变工具，诱发果蝇第二染色体基因突变，筛选与心脏发育有关的基因．初步结果表明，有３个第二染色体隐性致死突变基因在心脏组织有ｌａｃＺ表达，并且观察到有心脏前体细胞的突变表型．这预示在这３个致死系中，Ｐ转位子可能插入到与心脏发育有关的基因中或这些基因的附近．这３个致死系是值得进一步研究的候选者     

P转位子诱变的果蝇心脏发育基因的突变（Ⅰ）

果蝇和脊椎动物的心脏早期发育具有平行的基因控制机理，果蝇是替代人体心脏进行基因功能研究的理想模式，利用Ｐ转位子作为诱变工具，诱发果蝇第二染色体基因突变，筛选与心脏发育有关的基因，初步结果表明，有３个第二染色体隐性致死突变基因在心脏组织有ｌａｃＺ表达，并且观察到有心脏前体细胞的突变表型，这预示在这３个致死系中，Ｐ转位子可能插入到与心脏发育有关的基因中或这些基因的附近，这３个致死系是值得进一步研究的候     

建立果蝇心脏发育候选基因CG3295的基因敲除系

果蝇CG3295基因是哺乳动物基因RMND5在果蝇中的同源物,其功能未知.利用P转座子敲除技术进行果蝇CG3295基因的敲除研究,将果蝇14234系的P转座子与△2-3系中的转座酶基因组合到同一个体,使P转座子在体内敲掉目的基因.从后代挑选不含P转座子和转座酶基因的500头雄蝇分别与缺失了CG3295基因的测交系交配,从后代筛选获得20个CG3295基因敲除候选系.进一步利用Hand-GFP系使候选系的心脏表达绿色荧光蛋白,在荧光显微镜下根据候选系是否表现心脏突变表型鉴定敲除系,最后获得了12个表现心脏突变表型的CG3295基因敲除系.     

基因枪法导入cyclAt和GUS基因获得转基因水稻

以cyclAt基因为目的基因,HPT和GUS为选择和报告基因,应用PDS-1 000/He型基因枪协同转导,通过轰击来源于水稻成熟种子诱导产生的胚性愈伤组织,获得了转基因水稻植株.结果表明:通过X-Gluc染色分析,GUS基因在愈伤组织和再生植株叶片中的表达效率高.以转基因植株的基因组DNA为模板,用cyclAt基因的特异性引物对其进行PCR扩增,只检测到1 000 bp左右的片段,比其1 604 bp的完整序列小,因此推测cyc1At基因在转导入水稻后被剪接.此外,在协同转导过程中,cyc1At和GUS可能与受体基因组DNA随机整合,因此视GUS基因为报告基因有一定局限性;但两者同时被整合的频率远高于单一基因的整合.     

日本白鲫生长激素-I基因编码区cDNA的克隆

从日本白鲫(carassius cuvieri)脑下垂体中提取总RNA，采用逆转录PCR法扩增出日本白鲫生长激素—Ⅰ cDNA编码区，克隆到Pucm-T载体上，序列测定表明日本白鲫生长激素—Ⅰ基因的开放阅读框含有630bp，其中包括22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟肽，日本白鲫生长激素—Ⅰ基因的克隆成功为该基因的功能及应用研究奠定了基础。     

拟南芥同源转换盒基因A21反义RNA基因重组体的构建及转化

A21是拟南芥的一同源转换盒基因,以发育旺盛的组织中高度表达。采用反义RNA技术,将该基因cDNA 5′端自然410bp反向克隆到pTA7002后,构建了可在植物中调控表达A21反义RNA基因片段的重组体。以根癌农杆菌浸渍法将重组体转入拟南芥Landsberg erecta生态型植株中,筛选到转A21反义RNA基因的拟南芥植株。反义基因可在甾类激素诱导下表达出A21的反义RNA。经初步诱导表达,变异性状表现为顶端生长抑制型。     

拟南芥FIE基因特异片段的克隆及序列测定

根据拟南芥FIE基因的序列设计PCR引物,以拟南芥基因组DNA为模板,通过PCR反应扩增FIE基因特异性片段,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析,长为1633bp,与预期结果相符。将该基因片段定向克隆到pGEM-T载体上,得到重组质粒p1633,酶切鉴定及测序分析结果表明该克隆为拟南芥FIE基因特异片段,与拟南芥FIE基因比较同源性达99.8％,可以作为探针使用。     

花粉管通道法转柱头外露棉DNA及转化体RAPD分析

提取“异9-3”柱头外露棉总基因组DNA，通过花粉管通道法经微量注射导入抗虫棉707．1的胚囊内，D1代田间筛选到柱头外露的转化植株，遗传分析结果表明转化株柱头外露性状由一对隐性基因控制，50个随机引物进行PCR扩增，33个引物扩增出的DNA在供体、受体和转化体之间呈现出多态性，其中引物S462(TCG GCA CGC A)在供体和转化体之间出现相同产物而受体没有出现扩增产物，该引物有可能作为柱头外露系的分子标记．RAPD分析结果表明转化体与受体有较多相同基因位点，而与供体相同基因位点较少，转化体还有供体和受体都不具有的基因位点，这可能是外源DNA导入时引起碱基突变所致。     

虎纹蛙Sox基因的PCR扩增及SSCP分析

本文采用PCR技术,以特异扩增人SRY基因HMG－box保守区的一对引物,扩增了虎纹蛙Sox基因（SRY－box gene）,并对扩增产物进行了SSCP分析。结果雌雄虎纹蛙个体均扩增出一条带,大小为221bp,表明虎纹蛙Sox基因在雌雄个性间无性别特异性。SSCP分析结果显示虎纹蛙Sx基因雌雄个体片段的单链迁移率无差异,而与人的有较大差异,本文为探讨虎纹蛙的性别决定机制及Sox基因的进行提供了分子资料。     

信阳水牛促生长激素释放激素基因第4外显子的PCR扩增及变异检测

本研究以52头中国信阳水牛血样为材料,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应-单链构象多态性技术(PCR-SSCP),对信阳水牛的生长素释放激素(GHRH)基因中第4外显子的突变情况进行检测。经SSCP检测发现,不同个体的PCR反应产物银染后有两种不同的带型,分别命名为AA型和AB型。针对不同带型所对应的个体PCR产物进行测序,结果表明,在该基因(GI:194719389)的第4外显子70bp处发现A→G突变,A→G导致Thr转化为Ala,在该基因的第4内含子6bp处发现A→C突变。     

nodD基因的克隆及其导入大豆根瘤菌工程菌株的构建

以快生型大豆根瘤菌(Sinorhizobium fredii)15067的基因组DNA作为模板,采用PCR技术,克隆结瘤基因nodD编码区序列;利用DNA重组技术,将nodD基因连到lac启动子的下游,通过luxAB基因标记的质粒载体pTR102构建表达载体pTR102-Plac-nodD,采用三亲本杂交的方式,将构建的表达载体转化土著大豆根瘤菌,构建转基因工程菌株,为研究转基因工程菌株对大豆结瘤能力的影响提供依据。     

导入额外拷贝dctA基因的根瘤菌工程菌株的构建

为进一步提高大豆根瘤菌的固氮能力,以费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)15067基因组的DNA作为模板,采用PCR扩增技术,克隆四碳二羧酸转移酶结构基因dctA的全长序列;将其连入lac启动子下游,构建带有LuxAB基因标记的pTR-Plac-dctA重组表达载体。利用三亲本杂交技术将表达载体转入费氏中华根瘤菌中,构建大豆根瘤菌工程菌株。研究表明,转基因工程菌株侵染大豆幼苗后与出发菌相比,固氮酶活性有了显著提高,为提高大豆产量的研究提供一定参考。     

PAC克隆DNA制备方法的改进

为了解决PAC克隆DNA制备中存在的若干问题，我们探索了几种改进方法，使提取的PAC克隆DNA质量明显改进，能较好地满足我们对儿童急性淋巴细胞白血病6q21缺失区抑癌基因克隆的研究目的。     

中国常染色体显性遗传骨胳石化症(II型)家系突变基因筛查研究初报

为寻找骨胳石化症II的致病基因,从一患该病的家系成员收集血液,制备基因组DNA.应用PCR(聚合链式反应)技术和直接测序分析ClCN7的24个外显子,寻找基因变异.结果表明,除一些内含子中存在个别多态性外,所有成员均未检测到ClCN7基因突变,提示该基因不是本病常见的致病基因,在这个家系中ADOII可能归因于其他基因的突变.     

植物原位杂交研究的进展

原位杂交是上世纪60年代建立起来的一种将特定基因或DNA序列直接定位到染色体上的技术.几十年来发展的非常迅速.已有基因组原位杂交(GISH)、多彩荧光原位杂交(FISH)、原位PCR(in situ PCR)、DNA纤维原位杂交(Fi-bre-FISH),应用于遗传学的各个领域,特别是用于外源DNA的鉴定.     

基于新三维图形表示及相似度量的DNA序列比较分析(英文)

基于DNA序列的混沌游戏表示,得到了一种新的能够避免信息损失的DNA序列的3维图形表示.同时,利用特征曲线的几何中心和波动幅度构造4维向量来刻画DNA序列.基于两种新的相似度量,对11种物种的β球蛋白基因序列进行相似性分析,所得结果与生物学中的进化关系基本一致.而且通过比较分析,提出的方法对较长生物序列的相似分析更有效.     

东北红豆杉紫杉二烯合成酶cDNA克隆及其与紫杉醇产生菌基因组DNA的Southern杂交(英文)

为进一步研究紫杉二烯合成酶的作用机理和紫杉醇生物合成代谢调控机制,采用RT-PCR技术从东北红豆杉(Taxus cuspidata)树叶中获得了紫杉二烯合成酶基因片段,将该片段克隆在载体pGEMT-easy vector上,并转化到E.coliJM109中,经EcoRI酶切鉴定后,对阳性克隆进行序列测定,获得紫杉二烯合成酶基因片段长度为909 bp,编码303个氨基酸,与GenBank中收录的紫杉二烯合成酶的同源性达到98%;对获得的紫杉二烯合成酶基因和紫杉醇产生菌HQD33基因组DNA进行了Southern杂交。结果初步证实了紫杉二烯合成酶存在于通过内生真菌发酵生产紫杉醇的生物合成途径中。为利用分子生物学手段研究通过内生真菌发酵生产紫杉醇生物合成的代谢调控和构建高产紫杉醇基因工程菌株提供了强有力的理论指导。     

黑麦草漆酶编码基因片段的克隆与序列分析

黑麦草中木质素的结构、含量是决定其饲用品质的主要因素。漆酶是木质素生物合成中的关键酶之一,属于多铜氧化酶基因家族。根据报道的植物漆酶编码基因的氨基酸序列中铜离子结合域及N-端糖基化位点两个保守区设计4对引物,以黑麦草总DNA为模板,经PCR扩增、克隆、测序后得到3个有效序列,分别命名为Lac10-1、Lac8-1和Lac11-1。序列分析表明,3个基因片段的编码蛋白不仅含有保守的蓝铜氧化酶结合区域HAH和N-末端糖基化位点,而且分别与黄杨、黑麦草中分离的漆酶编码蛋白的氨基酸序列具有较高的同源性。因而,推断克隆到的3个基因片段是黑麦草漆酶基因家族的成员。