致羔羊脑炎型粪肠球菌的分离及鉴定

北疆地区几个不同羊场的羔羊连续几年发生了以各种神经症状和死亡为主要特征的疾病。对病、死羊进行了病原菌的分离、培养、生化鉴定、血清学鉴定和动物回归实验等,确定其致病菌为粪肠球菌。     

致羔羊脑炎粪肠球菌的分布规律

为了确定致羔羊脑炎粪肠球菌在人工感染小鼠体内的分布规律,本研究采用粪肠球菌人工培养物腹腔注射小鼠,无菌采集死亡或濒临死亡小鼠脏器,利用已建立的PCR技术对人工感染肠球菌小鼠主要脏器进行检测,结果显示在受检的6种组织中,即肝、脾、心、脑、肾均能扩增出与预计大小112bp一致的粪肠球菌的DNA阳性条带。与细菌分离结果一致。     

大蒜素纳滤提取及对粪肠球菌的体外抑菌研究

以白皮大蒜为原料,研究大蒜素的纳滤提取条件和大蒜素对粪肠球菌Enterococcus faecalis的体外抑菌特性．研究结果表明：0.45 μm膜过滤后的大蒜液在压力0.6 MPa、温度36℃操作条件下经孔径300 Da的纳滤膜纳滤后,大蒜原料中大蒜素的有效提取率为81.9%,纳滤液中大蒜素含量为2.07 mg/mL．大蒜素对E. faecalis的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度在好氧和厌氧培养条件下无明显差异,分别为15 mg/mL和23 mg/mL．20 mg/mL的大蒜素对E. faecalis     

致羔羊脑炎粪肠球菌人工感染羔羊的试验研究

将从发生羔羊脑炎病例中分离纯化的粪肠球菌经静脉注射接种于健康的2只美利奴羔羊和1只土种羔羊.结果显示,被感染羊均表现出与自然感染绵羊相似的临床症状和病理变化,并从脑、心血、肝等组织中回收到了接种菌,从而证明了该粪肠球菌分离株具有较强的致病性.     

中药复方对口腔致病粪肠球菌超微结构的影响

目的:观察黄芩、大黄、五倍子、蛇床子4种药物及其配伍组合的中药复方对口腔致病粪肠球菌超微结构的影响.方法:采用透射电镜进行观察中药处理后的粪肠球菌形态结构的改变.结果:经黄芩处理后的粪肠球菌细胞壁较完整,胞浆轻度变性;大黄组大部分胞壁不完整,破裂呈不连续状态,质壁分离严重,胞浆内可见大量颗粒样黑色沉淀;五倍子组的胞壁无明显变化,胞浆基本完整;蛇床子组胞壁变薄,胞浆变性严重;中药复方组的细胞壁失去原有结构而明显变薄或消失,细胞变形,出现裂解或自溶状态,核浆消失,大量细胞内容物外排.结论:中药复方对口腔致病粪肠球菌抗菌效果良好.     

粪肠球菌EF-ZA1107-06的体外益生特性研究

已有研究表明,益生菌具有良好的抗糖尿病和抗氧化活性,并对人类癌细胞系有很强的抑制作用。本研究以α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制率、超氧阴离子自由基清除率、亚铁离子螯合率和还原活性为指标,比较了粪肠球菌（Enterococcus faecalis）EFZA1107-06和鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus. rhamnosus GG,LGG）的体外抗糖尿病和抗氧化能力;通过测量Caco-2细胞系中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物歧化酶（TSOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性,研究了EF-ZA1107-06对细胞氧化应激的影响,并用HepG2和MDA-MB-231细胞系初步探讨了其抗癌活性和机制。结果表明,EF-ZA1107-06的上清液对超氧阴离子自由基的清除率最高（40.78%～59.61%）,对亚铁离子的螯合能力最强（39.28%～56.59%）,而EF-ZA1107-06裂解液的还原活性最高,相当于1.072 mmol/L当量半胱氨酸,明显高于LGG裂解液（P<0.05）。对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的抑制证实了EF-ZA1107-06具有抗糖尿病活性;...     

大理地区鸽粪中新型隐球菌的分离与鉴定

目的:对大理地区鸽粪中新型隐球菌的带菌率进行调查,为有效避免由鸽粪中隐球菌的感染提供参考依据。方法:采用黑米培养基对140份鸽粪中新型隐球菌进行了分离培养和鉴定。结果:共分离获得46株新型隐球菌,尿素试验均为阳性。结论:大理地区鸽粪中新型隐球菌阳性率较高,为32.9%。     

介质粒径、形状和生物膜对粪肠球菌在饱和活性炭柱中迁移的影响

通过室内柱实验,研究了介质粒径、介质形状和生物膜对粪肠球菌在饱和活性炭柱内的迁移的影响。结果表明:介质粒径、形状和和生物膜对粪肠球菌在饱和活性炭介质中的沉积与迁移有着重要影响。活性炭介质粒径越小,粪肠球菌在活性炭滤柱中的沉积量越多,流失率越小,在介质粒径为0.8 mm时,出现表面封阻现象;颗粒活性炭比同粒径的柱状活性炭更利于粪肠球菌的沉积;颗粒活性炭表面附着生物膜时,有利于提高粪肠球菌在饱和活性炭内的沉积量,减小其流失率。     

含色氨酸系列抗菌肽对多药耐药粪肠球菌的抗菌作用

粪肠球菌是院内感染中最常见的一种革兰氏阳性致病菌,与多种疾病密切相关.近年来,由于抗生素的滥用,粪肠球菌对市场上的多种抗生素都有不同程度的抗性,死于粪肠球菌感染的患者人数逐年增加,因此,迫切需要寻找和开发新的抗菌药物.抗菌肽是广泛存在于生物体内的一种小分子肽,具有广谱性、高效性、稳定性等特点,其独特的杀菌机理使细菌不易...     

环状芽孢杆菌中具有强启动活性DNA片段的结构与功能分析

作者曾用启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ１从环状芽孢杆菌Ｃ－２菌株（ＢａｃｉｌｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓＣ－２）中克隆到一个具有强启动功能的２．４ｋｂ片段ＢＣ６．对该片段作作的进一步缺夫分析表明,其３’端约０．７ｋｂ片段具有单独的基因启动子功能,序列分析表明ＢＣ６片段３′端有典型的原核生物的基因启动子结构,现有ＢＣ６的５’端的１．２ｋｂＸｈｉＩ片段的重组于ｐＢＲ３２２的ＥｃｏＲＩ位点,观察其对两侧具有不同     

一株乳酸菌产类细菌素Enteriocin LK-S1的初步研究

从鸡肠道分离的 5 9株乳酸菌中 ,筛选出一株产类细菌素的乳酸菌 ,编号为SE - 81.初步鉴定为肠球菌属 (Enterococcus) .在排除有机酸和过氧化氢的干扰作用后 ,SE - 81菌株对溶壁微球菌(Micrococcuslysodeikticus)、金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)和枯草杆菌 (Bacillussubtilis)等革兰氏阳性菌和大肠杆菌 (Escherichiacoli)及鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonellatyphimurium)等革兰氏阴性菌有强烈的抑制作用 .用胰蛋白酶处理发酵上清液后 ,抑菌活性丧失 .因此初步认为该菌株产生一类具有广谱抑菌活性的类细菌素物质 ,命名为EnteriocinLK -S1.它具有较广的抗菌谱 ,作用pH在 4 .0～ 6 .0 ,有很好的热稳定性 .     

乳酸菌表达质粒的构建

粪肠球菌是乳酸菌的一个属．采用生物信息学方法,预测了粪肠球菌AS1．2984基因组中乳酸脱氢酶和三磷酸甘油醛脱氢酶的组成型启动子序列．设计引物通过PCR扩增得到这2段启动子序列,并克隆到乳酸菌一大肠杆菌穿梭质粒pNZ8037上,在启动子下游接上绿色荧光蛋白基因作为标记,构建乳酸菌的组成型蛋白表达质粒．通过电转化将上述改造过的pNZ8037质粒导入粪肠球菌中,在共聚焦显微镜中可以观察到绿色荧光蛋白的表达．在乳酸菌MRS培养基中加入乳酸、盐酸、氢氧化钠等试剂,发现可以调节绿色荧光蛋白的表达量．     

水稻精细胞基因RSSG58启动子的克隆分析及表达载体构建

根据分布的水稻基因组测序的比较和水稻精细胞优势表达的RSSG58基因cDNA序列，以水稻品种“桂朝2号”黄化苗组DNA为模板，用PCR方法克隆出RSSG58在起始密码子以前的上游调控序列Pr58，经过Pr58启动子进行的鉴定和分析表明，具备大多数高等植物启动子的保守元件，预计它的RSSG58基因在特异表达方面具有一定的作用。为了鉴定RSSG58基因的基本启动子元件，将RSSG58基因5′侧翼序列做缺失片段分析，由PCR从Pr58中得以3个不同大小两端带有HindⅢ，BamHⅠ酶切位点的片段Pr58Ⅰ，Pr58Ⅱ和Pr58Ⅲ，定向插入载体pMGFP4(pBI221改建，报告基因为GFP）中，取代原有的CaMV35S启动子，构建了由驱动报造基因GFP的植物表达载体pRGFPⅠ，pRGFPⅡ和pRGFPⅢ，用于农杆菌介导法水稻遗传转化。其目的是为进一步在模式植物中研究其表达功能奠定基础。     

波氏假丝酵母启动子的克隆及新霉素基因的表达

报道了波氏假丝酵母（Candida boidinii)启动子的克隆,将克隆的启动子与Neo^ 基因重组构建了含Neo^r基因的表达载体YepNP181,转化波氏假丝酵母,实现了Neo^r基因在波氏假丝酵母中的表达,使波氏假丝酵母转化子能在含G418的抗性培养基上生长从而建立了Neo^r基因－G418选择系统,为外源基因在波氏假丝酵母中表达创造了条件。     

Cloning and Characterization of Gene Promoters from Bacillus pumilus

DNA fragments obtained from Sau3AI partially digested total DNA of Bacillus pumilus UN31-C-42 are first inserted into BamHI site of pSUPV4, a promoter-probe vector. The recombinant DNA molecules are transformed into Escherichia coli cells and eight-three Kanr clones (named pSUBp1-pSUBp83) are obtained. The inserted fragments in pSUBp53, pSUBp57, pSUBp21, which showed high level of kanamycin- resistance, are sequenced and analyzed, respectively. These fragments contain some con-served sequences of prokaryotic gene promoters, such as TATAAT and TIGACA box. The promoter frag-ment Bp53 could efficiently promote the alkaline protease gene of B. pumilus expression not only in E.coli but also in B. subtilis cells.     

一个烟草PR-1a启动子的克隆及序列分析

通过PCR扩增，从烟草Nicotiana tabacum cv Samsun中克隆了水杨酸诱导表达的病程相关蛋白PR-la基因的启动子TP12，以期用于构建诱导表达基因敲除系统，并用于无性繁殖植物的无标记基因转化。启动子的克隆产物经正反两向测序后，拼接分析结果表明，扩增得到的PR-1α基因启动子长1313个碱基，序列富含AT，其中A T占71．67％，与已报道的序列比较，核苷酸的相似性为98．6％。     

放线菌酮诱导SV40增强子的启动子活性的研究

在蛋白质合成抑制放线菌酮（CHX）诱导下,pCAT－E质粒中SV40增强子能启动CAT基因的表达,在很短的时间（5min)和很低的CHX质量浓度（30ng/mL）条件下,CHX即能诱导pCAT－E中SV40增强子的启动子活性,为了研究CHX诱导的pCAT-E质粒中SV40增强子的启动子活性是否与位置有关,构建了两个组体：pCAT-Bas-Enh(-)和pCAT-Bas-Enh( ),改变了SV40增强了序列与载体中CAT报告基因的相对位置,用重组质粒转染CHO细胞并用CHX处理,检测不到CAT活性,说明pCAT－E质粒中CHX所诱导的SV40增强子启动子活性受SV40增强子位置的影响。     

枯草杆菌启动基因在大肠杆菌中的克隆和表达

以大肠杆菌启动基因选择载体pHE5为载体,枯草杆菌染色体DNA为供体,克隆了一批启动基因功能片段,带克隆片段的重组质粒在大肠杆菌中表现不同的四环素抗性水平,其中50%在100μg/ml以上,12%达到200μg/ml。对其中一个转化子进行质粒检测和分析,获得一个重组质粒pHE273,经酶切分析证明,克隆的强启动基因位于2.2kb的EcoRI-HindⅢ片段上。     

具全期启动子盒的杆状病毒高效表达载体的组建与应用

通过ＰＣＲ扩增，得到苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）具早晚期启动子元件的ｐ３５基因启动子，将其插入到杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３多克隆位点上游，使之与ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３质粒中的人工合成后期启动子（ＰＳｙｎ）、多角体ＸＩＶ启动子（ＰＸＩＶ）串联构成早期、晚期、极晚期能持续启动外源基因表达的转移载体质粒ｐＳＸ３５．将ｐＳＸ３５用于组建含ＨＢｓＡｇ基因并形成多角体的重组ＴｎＮＰＶ，ＨＢ－ｓＡｇ基因的表达量显著提高，表达时间亦明显提前，从而实现了外源基因在杆状病毒表达系统的全期、高效表达．ｍＲＮＡ引物延伸试验结果显示，Ｐｐ３５在重组病毒中可产生２套转录本，分别于病毒感染的早期和晚期起始ＨＢｓＡｇ基因的表达．     

西宁地区市售酸奶乳酸菌含量的测定及卫生评价

为了解西宁地区市售酸奶乳酸菌含量及其卫生情况,按国标规定的方法对45份西宁地区市售保质期内的酸奶进行了乳酸菌数和卫生指标菌的测定。结果显示：45份检样乳酸菌数的合格率为88.22%;卫生指标菌中大肠菌群的合格率为97.78%,金黄色葡萄球菌的合格率为100%,酵母菌的合格率为17.78%;检样各指标总合格率为13.33%。