环毛蚓纤维素酶C_X的初步研究

从环毛蚓（Ｐｈｅｖｅｔｉｍａａｓｉａｔｉｃａ）提取纤维素酶ＣＸ,用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０凝胶过滤和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５离子交换层析进行分离纯化,得ＣＸⅠ和ＣＸⅡ,分别测定了ＣＸ,ＣＸⅠ和ＣＸⅡ的最适ｐＨ和最适温度．     

黑曲霉胞外葡萄糖淀粉酶的纯化及特性

黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ７２８）的粗酶液，经硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤脱盐，ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换柱层析和ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－１００凝胶层析纯化，经ＰＡＧＥ鉴定为一条带ＳＤＳ凝胶电泳测定分子量为７００００．金属离子Ｆｅ３＋对该酶有一定的抑制作用，该酶的等电点为３．７，最适ｐＨ为４，最适温度为６０℃．Ｅ２８０１％为１５．７２，Ｋｍ值为０．１１２×１０－３ｍ．     

一种具有刺激红系细胞集落生成的螺旋藻（Spirulina…

从螺旋藻体中通过ＤＥＡＥ纤维素层析，硫酸铵分部沉淀和葡聚糖Ｇ７５凝胶过滤得到一种具有离体情况下刺激红系细胞集落生成的功能蛋白质。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测分子量为１５０００道尔顿，等电点为４．８，含有藻蓝胆素。该蛋白命名为螺旋藻１５０００蛋白（Ｓｐｉｒｕｌｉａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ１５０００，ＳＰ－１５０００）。     

绿色乳杆菌α－羟基戊二酸脱氢酶的纯化和特性研究

本文对绿色乳杆菌（Ｌ．Ｖｉｒｉｄｅｓｃｅｎｓ）Ｂ１７５产生的α－羟基戊二酸脱氢酶用硫酸铵盐析；ＤＥＡＥ—纤维素柱层折；超滤浓缩；苯基琼脂糖凝胶（ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ）疏水层析等方法纯化，使酶的纯度提高１１７倍。通过ＨＰＬＣ和等电聚焦测得该酶的分子量约为６６，０００，等电点为４．２。酶催化作用的最适ｐＨ５．５，最适温度为６０℃，对α—酮戊二酸和ＮＡＤＨ的Ｋｍ值分别为０．１４×１０（－３）Ｍ和０．０３×１０（－３）Ｍ。     

一种具有刺激红系细胞集落生成的螺旋藻（Spirulina platensis）蛋白

从螺旋藻体中通过ＤＥＡＥ纤维素层析、硫酸铵分部沉淀和葡聚糖Ｇ７５凝胶过滤得到一种具有离体情况下刺激红系细胞集落生成的功能蛋白质．ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测分子量为１５０００道尔顿，等电点为４．８，含有藻蓝胆素．该蛋白命名为螺旋藻１５０００蛋白（Ｓｐｉｒｕｌｉａｐｌａｔｅｎｓｉｓ１５０００，ＳＰ—１５０００）．     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达,…

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中。在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％。以醋酸锌显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ－ＰＡ表达条带，进行复性处理。复性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ－ＰＡ。     

从虫体提纯HBsAg基因表达产物的新方法

感染含乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因的粉纹夜蛾重组核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－Ｈｈｓ８５－ＯＣＣ￣＋的粉纹夜蛾幼虫先经匀浆澄清处理后，再用单克隆抗体亲和柱层析的方法提纯ＨＢｓＡｇ蛋白．提纯的蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，出现３条电泳带，分子量分别为２４ＫＤ，２７ＫＤ和４５ＫＤ．用此法从虫体提纯ＨａｓＡｇ基因表达产物，具有简单、快速、高效的特点．     

粉被虫草菌丝体多糖的分离纯化及其性质

粉被虫草菌丝体经沸水浸提，醇析，透析，Ｓｅｖａｇｅ法脱蛋白，再经ＤＥＡＥ－纤维素和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－１００柱层析纯化，得菌丝体纯多糖ｐｓ１和ｐｓ２．高效液相色谱（ＨＰＬＣ）检测ｐｓ１和ｐｓ２的为单一物质，凝胶过滤法测得ｐｓ１和ｐｓ２的分子量分别为２４０００和１３０００Ｄａｌ，气相色谱分析表明ｐｓ１的单糖组分有Ｄ－甘露糖，Ｄ－葡萄糖和Ｄ－半乳糖，ｐｓ２的单糖组分有Ｄ－甘露糖和Ｄ－葡萄糖，ＩＲ分析     

简易多用微型实验装置

简易多用微型实验装置邹荣贤（四川师范学院化学系，南充６３７００２）ＡＳＩＭＰＬＥＢＵＴＭＵＬＴＩ－ＰＵＲＰＯＳＥＭＩＮＩ－ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＤＥＶＩＣＥ￥ＺｈｏｕＲｏｎｇｘｉａｎ（Ｄｅｐｔ．ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＳｉｃｈｕａｎＴｅａｃｈｅｒｓＣｉ...     

Inner Eπ^n—groups

ＩｎｎｅｒＥ_π~ｎ－ｇｒｏｕｐｓ￥ＤｅｎｇＨｕｉｗｅｎ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｏｍｐｕｔｅｒＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＣｈｉｎａＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ６３０７１５）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＬｅｔＧｂｅａｆｉｎｉｔｅ...     

扩展青霉碱性脂肪酶的纯化及N-端氨基酸序列分析

扩展青霉PF898的发酵液经硫酸铵沉淀、DE52纤维素离子交换柱、Sephadex G100凝胶过滤等步骤，其碱性脂肪酶的活性被纯化了79．3倍，回收率约15％，此活为76．9U／mg。纯化蛋白经SDS－PAGE和HPLC TSK－GEL G3000SW凝胶过滤分析显示其分子量约为28kDa。纯化蛋白经氨基酸序列测定仪分析表明，其N－端12个氨基酸的序列为：A－T－A－D－A－A－A－F－P－D－L－H。     

重组产几丁质酶C工程菌包涵体的复性

将重组产几丁质酶C(Chi C)的菌体通过固定金属鳌合层析(IMAC),对目的蛋白进行初步纯化;然后采用透析法、凝胶过滤柱层析法和金属鳌合柱层析法对包涵体进行复性.结果表明,逐渐降低变性剂尿素浓度进行透析复性,酶液的酶活力为58.85 μkat·L-1,比活为0.425 mkat·g-1,蛋白回收率为95.3%.使用S...     

菠萝焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶的分离纯化及性质研究

应用硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素、Sephadex G-200、磷酸纤维素柱层析分离纯化了菠萝叶片焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶(PFP).凝胶过滤和非变性聚丙烯酰胺梯度电泳测定酶的分子量为132kD和140kD,SDS-聚丙烯酰胺电泳分析得到一条分子量为66kD的蛋白主带,表明该酶可能是由同种亚基组成的二聚体.此外,还对该酶的部分酶学性质进行了初步研究.     

蛇神经毒素在毕赤酵母中的分泌表达及其分离纯化

文中主要研究了毕赤酵母基因工程菌的构建及其发酵表达产物蛇神经毒素的分离纯化条件。蛇神经毒素编码基因由本实验室设计、合成，并重组构建成表达质粒pPIC9k-hPK。经电穿孔将该质粒转化毕赤酵母GS115 (His-Mut+)，筛选His+Muts型菌株，经诱导表达，产物进行SDS- PAGE电泳鉴定，相对分子质量与理论值一致，目标蛋白经小试发酵产量可达350mg/L。利用超滤、离子交换树脂及分子筛分离纯化，产物经高效液相色谱(HPLC)分析纯度达92%。     

黄鳝超氧化物歧化酶的纯化和部分性质研究

黄鳝超氧化物歧化酶粗酶液，经过正丁醇脱脂，丙酮分级沉淀，DEAE-琼脂糖离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤，从黄鳝中分离纯化获得铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)，并对其性质进行研究，最终该酶的比活力为1500U／mg，提纯倍数为368．5．回收率为24．7％．该酶对KCN不敏感．而对H2O2敏感，对热较稳定，对酸碱有较强的耐受性，抗胃蛋白酶的破坏，聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦电泳结果表明：纯化酶蛋白呈一条带，酶分子量约为85kD，亚基分子量约为16．5kD，等电点为7．15。     

色谱法在蛋白质分离纯化中的应用

本文阐述了凝胶过滤、离子交换和疏水相互作用色谱的基本原理和操作条件，说明了它们在蛋白质纯化中的应用策略。     

二叶葎多糖的研究——1.分离、纯化及其基本性质

二叶葎用沸水抽提,三氟乙酸—正丁醉除蛋白,乙醇沉淀得二叶葎多糖粗品.比粗品进一步通过 CTAB 和 DEAE -纤维素柱层析纯化.其主要成份用 Sephadex G—150分子筛、纸层析、醋酸纤维薄膜电泳和琼脂糖电泳均证明是均一的.用 Sephadex G—200凝胶过滤法测得分子量是79000.纯多糖糖含量以葡萄糖为标准是69%,以半乳糖为标准是156%,以糖原为标准是70.4%.糖醛酸含量是74%.体内试验表明二叶葎多糖对移植 S—130肉瘤细胞具有抑制作用.     

鹿茸中促肾上皮细胞增殖蛋白的分离纯化与表征

采用凝胶过滤层析以及离子交换色谱方法,从鹿茸中纯化出一种蛋白,其在SDS-PAGE电泳上显示为一条带,分子质量为53.3 kDa,同时初步考察了该纯化蛋白在6种不同浓度下对狗肾上皮细胞(MDCK)增殖的影响.结果发现,该蛋白在0.124 mg/mL浓度时,MDCK细胞的增殖效果最佳,达73.02%.     

一种高效纯化血清淀粉样物质A(SAA)的方法

通过密度梯度超速离心、脱脂从急性相胸水中分离得到含有血清淀粉样物质A（Serum AmyloidA,SAA）的高密度脂蛋白（HDL），再通过两次Sephacry1S-200层析纯化SAA蛋白。经SDS-PAGE电泳和Western Blotting检验证实得到的SAA蛋白纯度高，可作为抗原免疫动物制备抗体，方法可用于从胸水中大量制备SAA。     

Oligomerization study of NHR3 and NHR4 domains from ETO protein involved in t（8;21）-associated acute myeloid leukemia

Little had been known about ETO protein until t(8;21) was found in 12%-15% of acute myeloid leukemia which resulted in AML1-ETO fusion protein. ETO protein has four conserved nervy homology regions termed NHR1-4. A lot have already been known about NHR1, 2, 4:NHR1 is homologous with the Drosophila TATA-box-associated factor 110 (TAF110); NHR2 is a dimerization domain associated with mSin3A/HDAC; NHR4 is MYND class of zinc fingers associated with NCoR/SMRT/HDAC. Only the function of NHR3 remains unclear. In order to investigate whether NHR3 domain could participate in oligomerization, we cloned and purified this domain. Through gel filtration chromatography, dynamic light scattering and dissolved crystal electrophoresis, we found that NHR3 domain was a tight tetramer. Then we cloned NHR3 4 domain (i.e. NHR3 domain plus NHR4 domain), and discovered, by gel filtration chromatography and native PAGE, that NHR3 4 domaincould form dimer in solution. This was the first time to observe that NHR3 and NHR4 domains may have some contribution to the oligomerization of ETO protein, which might recruit corepressors in the form of dimer, and stabilize ETO dimerization through convergent strength of NHR2, NHR3 and NHR4 domains and then stabilize corepressors recruitment. These speculations are very worthy of further evaluation.