小麦与高冰草原生质体融合及再生能力的恢复

以普通小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ）济南１７７悬浮细胞来源的原生质体与高冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｅｌｏｎｇａｔｕｍ）愈伤组织来源的原生质体用ＰＥＧ法诱导融合．由于来源材料的长期继代，小麦原生质体的再生能力已很低；高冰草原生质体不能分裂；而融合产物却能高频率的分化出完整植株．融合再生植株的表型类似高冰草，染色体数目和同工酶谱亦然．但它们早期发育的模式与小麦相似．     

两种小麦的原生质体培养再生植株

报道两种基因型小麦昌乐5号和山农587胚性悬浮细胞系的建立和原生质体再生植株。小麦昌乐5号和山农587的胚性愈伤组织继代一年以后形成部分颗粒状和粉粒状结构,可用于悬浮培养。当分散好、生长快的胚性悬浮细胞系形成后,即可作为原生质体培养的材料。较长时间的悬浮培养容易使材料的胚性丧失,昌乐5号的胚性悬浮细胞系20天左右建成,其原生质体再生植株的频率为14/10~5(再生植株数/植板的原生质体数);而山农587的悬浮培养物需5个月以后才能用于原生质体培养,其原生质体再生植株的频率仅为4/10~6。     

埃斯基红豆草原生质体培养直接形成体细胞胚与再生植株

埃斯基红豆草花茎愈伤组织的原生质体在修改的ＫＭ８Ｐ和Ｖ－ＫＭ液体培养其中均能高频率地分裂和形成克隆，其分裂率为７１．４％－７６．１９％，在ＫＭ８Ｐ培养其中，原生质体经不等分裂可以直接形成体细胞胚，在Ｖ－ＫＭ培养其中形成的小愈伤组织培养也有体细胞胚的分化。     

BYDVCP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性愈伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病基因的质粒Ｐ＾ｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒Ｐ＾ＢｌＡｅｔＳＮ导入融合细胞中。经抗性筛选获得抗潮霉素的阳性克隆并再生植株。对再生植株作ＰＣＲ检测表明，     

小麦与高冰草体细胞杂种F2代：Ⅱ.同工酶和蛋白质分析

比较了小麦与高冰草杂种Ｆ２代不同穗行和株系的部分植株与亲本进行酯酶同工酶及可溶性蛋白质,分析高冰草遗传物质在杂种后代的遗传和表达,结果证明高冰草遗传物质在杂种中稳定存在并正常表达。粘粘白含量的测定表明,杂种Ｈ１及Ｆ２代蛋白质含量为１７．４９％～２０．１８％,介于亲本小麦（１５．１４％）与高冰草（２５．５８％）之间。氨基酸分析发现,杂种Ｆ２代种子的几种必需基酸,包括缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、     

小麦与高冰草不对称体细胞杂种F5代部分株系的花粉母细胞染色体观察分析

普通小麦（Triticum aestivum L.)济南177原生质体（受体）和经紫外线照射的高冰草（Agropyron elongatum)原生质体（供体）用PEG法诱导融合，形成外形偏向小麦的不对称体细胞杂种及后代，经过田间繁育，现已到F5代，在对F1至F4代杂种植株完成各项分析的基础上，对对F5代不同株系（Ⅱ-2，8-1，Ⅱ-Ⅰ-8）的花粉母细胞染色体进行观察和分析，结果表明，杂种花粉母细胞在减数分裂时基本正常，88％以上的细胞染色体数目在20－21对之间，并且绝大多数染色体可以正常配对形成二价体，少数细胞存在小染色体，数目多为1－2个，且大部分以配对形式存在，由此可见，杂种在遗传上基本是稳定的，且杂种的表型及遗传在较短的世代就基本稳定，但个别杂种花粉母细胞中也存在减数分裂异常现象，如不均等分离，落后染色体，染色体桥、多着丝粒体，易位环及多价体等。     

BYDV CP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性意伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病毒基因（ＢＹＤＶＣＹｇｅｎｅ）的质粒Ｐｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒严ＰＢｌＡｃｔＳＮ导入融合细胞中．经抗性筛选获得抗潮霉素（Ｈｍ）的阳性克隆并再生植株．对再生植株作ＰＣＲ检测表明，ＣＰ基因已整合到转化植株的基因组中并稳定表达．     

普通小麦与玉米的体细胞杂交再生完整植株

从小麦济南177制备得到两种原生质体，一种来源于具有一定分化能力的愈伤组织但其分裂能力较低；一种来源于生长迅速的悬浮细胞但不能分化，将二种原生质体混合，共同作为受体与经过紫外线（UV）照射的玉米（Zea mays L)原生质体在PEG诱导下融合，培养后获得再生克隆并进一步分化为植株，而它们单独与玉米原生质体融合均不能再生植株，通过染色体、同工酶及5SrDNA分析及生长习性分析证明再生植株均为体细胞杂种。     

雷蒙特红豆草下胚轴愈伤组织原生质体再生植株

雷蒙特红豆草１０ｄ龄无菌苗的焉胚轴切段在附加２，４－Ｄ和ＫＴ各１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织，取培养３周后形成的愈伤组织进行酶解可获得大量原生质体。原生质体在修改的ＫＭ８Ｐ液体培养基中培养，第１０ｄ开始分裂，２周后形成小细胞团，４周时发育成大细胞团。第７周将小愈伤组织转于含０．５％琼指糖的固体培养基上，它们可以旺盛生长，成为有根、芽分化的胚性愈伤组织，转于分化培养基上发育成苗的小植株。无根苗     

酵母原生质体融合的研究

本文报道了酵母原生质体的制备、再生及融合过程.培养亲株对数生长早期的细胞(浓度为2.5×10~7细胞/ml),在1.5-2%蜗牛酶及0.1%β-巯基乙醇的作用下,45-60分钟后,原生质体的形成率可达99-100%,在35%聚乙二醇(分子量为6000)和10mMCaCl_2溶液的作用下进行融合实验,可得融合率为2.6×10~(-6)-2.1×10~(-7),它是自发回复突变率的100-1000倍.     

林肯链霉菌原生质体形成、再生和融合的研究

林肯链霉菌生长在0.5%甘氨酸的S培养基中,能较好地被溶菌酶破壁形成原生质体。原生质体能在RB培养基上再生,但不能在R_2培养基上再生,这和已报道过的其他链霉菌不同。78-11菌株的再生频率约为25.7%,S-3菌株的再生频率约为20.5%。PEG(聚乙二醇)1000对诱导融合的效果较好,重组频率最高可达10~(-2)。重组子和亲本在培养特性、孢子形态方面无特殊差异,但经C_O~(60)诱变后重组子的正变率超过亲本。     

绣球菌原生质体制备及再生条件的初步研究

为进一步改善绣球菌栽培特性、提高栽培产量,对绣球菌原生质体制备与再生条件进行了初步探索.以绣球菌原生质体再生量为指标,对等渗剂、酶反应温度、pH和反应时间等影响因素进行了优化.结果表明,采用2%的溶壁酶溶解绣球菌菌丝细胞壁,制备原生质体的最佳条件是,以0.6 mol/L蔗糖为等渗剂,在30℃、pH值6.0环境下反应3 h.在此条件下,原生质体的再生量为11 850个/mL.     

酵母菌种的单倍体分离及其原生质体的再生、融合的研究

采用酶法和复合作用法对酵母菌株 13 0 0 (2N)和 2 0 10 (2N)的单倍体细胞 (1N)的获得率分别为3 0 %和 2 0 %左右 由实验确定脱子囊壁的最佳条件为采用生理盐水 ,pH5 .4 ,温度为 2 7℃ ,获得A型 ,B型两种单倍体细胞 (IN) 通过群体杂交法 ,从 75个平板上 ,挑选出 14 5个小菌落 ,得到 5个营养缺陷型菌株 ,该菌株的原生质体在 3 5 %PEG的作用下进行原生质体的融合 ,获得成功 但是仍需进一步对融合体进行生理、生态的研究     

啤酒酵母原生质体融合育种及性能检验

介绍啤酒酵母原生质体融合的杂交方法。通过对重组体的培养观察，检查其形态并测定其生理特性，以选择优良重组体。     

小克银汉霉原生质体的制备与再生

目的　为了利用微生物发酵生产γ 亚麻酸,研究了小克银汉霉原生质体制备与再生的条件。方法　利用液体振荡培养法,对酶解系统、渗透压稳定剂、菌丝培养时间、酶解温度等因素对小克银汉霉原生质体制备与再生的影响等进行了实验。结果　原生质体的产量可达到5.3×106个/mL,原生质体的再生率达到1.85%。结论　①用2%的蜗牛酶酶解28℃培养24h的菌丝,以0.7mol/L甘露醇作为渗透压稳定剂,酶解前以0 3%β 巯基乙醇处理30min,便可制备大量的小克银汉原生质体;②用含0.8mol/LKCl的高渗双层培养基包埋制备的原生质体,可得到较高的原生质体再生率。     

柠檬酸生产菌Aspergillusniger的原生质体制备与再生

本文对柠檬酸生产菌ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒＣｏ－８２７菌丝原生质体的制备和再生进行了研究。对影响原生质体游离与再生的诸因素，如酶配比、菌龄、渗透压稳定剂和酶解温度等进行了优化，并进行了原生质体的再生培养。     

草菇原生质体的制备与融合研究

项目对低温草菇和高温草菇菌株进行了酶解制备原生质体及原生质体的融合进行了研究.研究结果表明:以融壁酶Novozym234对低温草菇和高温草菇酶解效果较好,酶解浓度为2.5%,稳渗剂以0.5Mol/L蔗糖为佳,pH值保持在8.5左右,以30%的助溶剂(PEG4000-6000)作为融合诱导剂进行草菇原生质体融合,并获得融...