大白鼠实验性肝病变的组织化学和生物化学研究 Ⅰ.四氯化碳中毒后肝内脂肪、脂肪酶、核糖核酸和硷性磷酸酶的观察及血、肝内转氨酶活力的变化

大白鼠皮下注射一定剂量的CCl_4(2C.C./100克体重40%的CCl_4)后24及48小时出現显著的肝脂肪病变,此时血內轉氨酶活力由正常时的175.5单位上升至924与908单位,同时肝組織內轉氨酶活力則由正常时的159单位分別下降至79及59单位。因此我們认为,由CCl_4引起的这样肝病变时血內轉氨酶的上升可能系由中毒的肝組織而釆。在注射CCl_4后的动物肝組織中有某些数量的肝细胞由于肿胀而成气球细胞,此类细胞用一般組織学及組織化学方法观察,无脂肪的积聚,亦无脂肪酶、核糖核酸及硷性磷酸酶的存在;由于此类細胞的出現,致使肝血变狭窄,影响了肝細胞的血液供应,而使肝小叶中央細胞坏死。我們也观察到,在肝病变过程中,靠近中央靜脉周围单核浸澗細胞較多,此类細胞中的核糖核酸及硷性磷酸酶均呈阴性反应。在浸潤細胞间有小型肝細胞的存在,此种細胞形状較小,其細胞質的嗜伊紅性較强,其中硷性磷酸酶及核糖核酸則呈阴性反应;致使核糖核酸及硷性磷酸酶在病变后臂由正常分布形式而集中于肝門管附近的肝細胞及肝胆管周围。我們認为,硷性磷酸酶的集小于肝门管区是由于气球細胞的胀大阻塞了血,而胆毛細管的收縮又妨碍了磷酸酶由肝至胆道的去路。CCL_4注射48小时后大白鼠肝內的核糖核酸集中于肝門管区,被認为是肝細胞的再生現象。本实驗观察到,CCl_4中毒后肝脂肪的产生与肝細胞內脂肪酶的阴性反应,这可能与肝細胞內脂肪酶的减低有关,是由于CCl_4破坏了肝內脂肪酶的活性所致。     

桔梗皂苷-纳米硒复合物对CCl4 致小鼠肝损伤的保护作用①

目的:研究桔梗皂苷-纳米硒复合物(PLD-NSe~0)对CCl_4引起的小鼠急性肝损伤的预防保护作用。方法:采用CCl_4法制造小鼠急性肝损伤模型,检测正常组,模型组,联苯双酯阳性组和PLD-NSe~0高、中、低剂量组小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、球蛋白(GLB)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)水平以及肝组织匀浆中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力和丙二醛(MDA)含量。计算小鼠的肝重指数,观察肝脏组织病理学变化。结果:PLD-NSe~0的高、中剂量组与模型组相比,小鼠血清中TP、ALB的含量显著升高,肝组织中的GSH-Px活力(p0.01)显著增强,而小鼠血清中ALT、AST、ALP水平、GLB含量和肝组织中MDA含量显著降低,病理切片显示PLD-NSe~0组均不同程度改善肝组织病理的变化。结论:PLD-NSe~0对CCl_4所致急性肝损伤有保护作用。     

大鼠肝刺激因子对CCl_4致肝损伤小鼠保护作用的机制研究——Ⅰ.HSS的抗氧化作用

本工作观察了大鼠肝刺激因子(HSS)对CCl_4损伤小鼠后,肝组织和血清脂质过氧化物丙二醛(MDA)及自由基清除剂谷胱甘肽(GSH)含量的影响。结果发现,HSS(0.1mg/g体重,i p)可使CCl_4(10％,5ml/kg)中毒后48h,肝组织MDA值的升高幅度明显降低(6.23±0.98nmol/mg蛋白vs.4.17±1.67nmol/mg蛋白,P<0.005),但血清MDA值的下降幅度不明显。同时肝组织GSH含量明显高于CCl_4损伤组(3236±472μg/g vs.2007±589μg/g,P<0.001)。上述结果提示,HSS具有抗氧化作用,降低CCl_4自由基对肝细胞膜的损伤作用,保护受损肝脏。     

山丹黄参多糖对四氯化碳致急性损伤小鼠肝组织Caspase-3和TNF-α表达的影响

为研究山丹黄参多糖对四氯化碳(CCl_4)致小鼠急性损伤的影响,对50只小鼠分别灌胃山丹黄参多糖(12.5,25,37.5g·L~(-1))或等量的生理盐水7d,最后一次灌胃1h后腹腔注射1%的CCl_4橄榄油溶液,16h后处死小鼠,用免疫组织化学法检测Caspase-3,TNF-α在肝组织表达的变化,用比色法检测血浆碱性磷酸酶(ALP)和肝组织谷胱甘肽(GSH)活性的变化.结果显示实验对照组肝组织Caspase-3,TNF-α阳性表达均明显增强(P0.01),肝组织GSH活力明显降低(P0.01),血浆ALP含量显著升高(P0.01).而丹黄黄参粗多糖各组肝组织Caspase-3,TNF-α的阳性表达明显减少(P0.01),肝组织GSH活力显著或极显著升高(P0.05或P0.01),血浆ALP活性明显降低(P0.01).表明一定剂量的山丹黄参多糖可提高小鼠抗氧化能力,促进新陈代谢,降低Caspase-3,TNF-α的阳性表达,对四氯化碳造成的急性肝组织损伤有一定的保护作用.     

缺氧及某些条件下大白鼠大脑谷—丙转氨酶活力的变化

本实验测得正常大白鼠大脑谷一丙转氨酶活力为77.4±8μmole 丙酮酸/克鲜组织/小时.缺氧30′,酶活力为102.8μmole 丙酮酸/克鲜组织/小时,比正常状况升高为138.9%,缺氧60′与缺氧30′比较,酶活力无明显变化。频死期略有下降,但仍此正常值升高为114.4%。恢复供氧后30′,酶活力下降至正常水平。饥饿及胰岛素处理,在白鼠大脑谷一丙转氨酶活力此正常状况分别降低为51.8%和64.4%。     

银杏叶提取物对实验性肝纤维化大鼠COX-2、TNF-α等表达的影响

研究银杏叶提取物(EGb)对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化肝组织COX-2、TNF-α及TLR4mRNA表达的影响。采用皮下注射40%CCl_4植物油溶液制备大鼠肝纤维化模型。造模第4周后,开始给药。以高低两个剂量的EGb进行干预,同时设计正常组、秋水仙碱组。每天给药1次,给药期间大鼠仍皮下注射40%CCl_4植物油溶液。给药6周后处死大鼠,通过RT-PCR技术观察大鼠肝组织中COX-2、TNF-α及TLR4 mRNA的表达。RT-PCR结果显示,与正常组相比,模型组大鼠肝组织的COX-2、TNF-α及TLR4mRNA表达明显增加(P0.01);银杏叶提取物(EGb)干预组(100,50 mg/kg)较模型组大鼠肝组织的COX-2、TNF-α及TLR4 mRNA表达明显下降(P0.05)。结论银杏叶提取物(EGb)能够抑制大鼠肝纤维化肝组织COX-2、TNF-α及TLR4的表达。     

乳腺炎大鼠肝、肺组织肥大细胞的变化

通过制备SD大鼠临床型乳腺炎病理模型,应用组织化学的方法,对攻毒不同时相大鼠肝、肺组织肥大细胞的数量、活力、分布范型和组化性质的动态变化进行了研究.结果表明,攻毒后大量的炎性细胞浸染肝血窦、肝小叶间质、中央静脉、小叶间动脉和静脉周围以及肺泡隔、细支气管及肺小血管内壁和周围,炎性细胞急剧增多,均极显著高于攻毒前(P<0.01),且在攻毒后24 h均达到最高峰,此时造成肝、肺小血管的内皮细胞偶见脱落.同时,不同时相肝、肺组织肥大细胞及其脱颗粒的变化趋势与炎性细胞相吻合,其中,肝、肺组织肥大细胞数除攻毒后12 h显著高于攻毒前外(P<0.05),其余均极显著高于攻毒前(P<0.01).而肝组织肥大细胞脱颗粒数在攻毒后24 h和72 h极显著高于攻毒前(P<0.01),攻毒后6 h和48 h显著高于攻毒前(P<0.05);肺组织除攻毒后12 h为显著外(P<0.05),其余均极显著高于攻毒前(P<0.01).由此表明,肥大细胞参与了乳腺炎病理过程中所致肝、肺组织损伤的病理进程.     

小鼠四氯化碳急性肝损伤模型稳定性初探

目的:探讨CCL4小鼠肝损伤模型的稳定性.方法:采用一次性的腹腔注射不同剂量的CCL4花生油,在注射后所致肝损伤.不同时间检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肝组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量.结果:以10mL/kg的剂量按体重腹腔注射CCL4花生油(0.12%)13h后,检测的指标值离散度较小;血清中ALT、AST及肝组织的MDA含量有所升高,而肝组织的SOD降低.结论:以10mL/kg的剂量按体重腹腔注射CCL4(0.12%)在13h后检测的模型组较稳定.     

羊耳菊水提物对CCl4、D-GaLN致小鼠急性肝损伤的保护作用

为研究羊耳菊水提物对CCl_4、D-GalN致小鼠急性肝损伤的保护作用。通过腹腔注射0. 08%CCl_4花生油溶液建立小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清中天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量,肝匀浆中总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活力,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)的含量; HE染色肝切片,显微镜观察肝组织病理改变;腹腔注射D-GalN(500 mg/kg)花生油溶液建立小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清中AST、ALT含量。结果表明:羊耳菊水提液可降低CCl_4所致小鼠急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST含量(P 0. 01),升高肝匀浆中SOD、GSH-Px活力(P 0. 01或P 0. 05)及降低TNF-α、IL-1的含量(P 0. 05);病理切片显示,羊耳菊三个剂量组动物肝细胞坏死、变性,细胞浆聚集及炎症细胞的浸润程度均较模型组减轻。羊耳菊水提液也可降低D-GalN所致小鼠急性肝损伤小鼠血清ALT、AST含量(P 0. 01或P 0. 05)。可见羊耳菊水提物对CCl_4、D-GalN所诱导的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。     

人胃癌裸鼠肝转移模型的建立

利用已建成的人胃癌MGC80—3细胞裸鼠移植瘤为细胞来源,采用机械消化为辅、胶原酶等消化为主,经过改装的三级过滤系统分离活的单细胞,经外科手术,脾被膜下注入1.25×10~6个MGCS0-3细胞。研究表明,移植前施用含0.5％CCl_4橄榄油,使MGC80-3细胞在肝脏形成转移灶数目增多。光镜下,CCl_4中毒后第2天、第10天裸鼠肝脏显示不同程度肝细胞脂肪变性、坏死、纤维化、肝细胞再生和小胆管增生现象。电镜下,CCl_4中毒后肝细胞显示SER,RER不同程度的扩张,并伴有RER脱颗粒,胞质内脂滴和脂褐素增多,肝窦内皮受损收缩,有纤维素样物质沉着,提示CCl_4中毒后肝细胞坏死、内皮损伤、纤粘蛋白沉着是造成MGC80-3细胞肝脏转移灶增多的原因之一。总之利用自系移植成功的裸鼠人胃癌细胞移植瘤为细胞来源,三级细胞过滤系统分离实体瘤组织而获得增殖能力强的单个瘤细胞,借用CCl_4对肝脏损伤,脾下移植亲宿主性胃癌单个细胞,容易获得人胃癌细胞在肝脏多个转移灶。这个方法能为预防和研究肿瘤细胞转移提供可靠而有价值的实验研究模型。     

草鱼实验性镉中毒的肝、肾病理学研究

用200尾(10.8±1.2)g的草鱼作实验性镉中毒实验.实验分为4组,每组50条.实验各组水中镉含量分别为1/10 LC50组80 μg.L-1,1/50LC50组16μg·L-1,1/100LC50组8μg·L-1,对照组为＜1μg·L-1,实验期120d.研究内容为草鱼镉中毒时肝、肾生化指标与病理变化.结果表明①草鱼镉中毒的24h-LC50为800μg·kg-1;②各组草鱼的死亡率分别是64%,24%,20%,4%;③实验各组草鱼肝胰脏、肾脏镉含量(湿质量)较对照组极显著升高(P＜0.01);④实验各组草鱼血浆中谷草转氨酶、碱性磷酸酶、胆固醇、甘油三酯、葡萄糖均较对照组明显地升高,而总蛋白则下降明显(P＜0.05);⑤实验各组草鱼血清中钙、磷、镁含量显著减少(P＜0.05);⑥病理学变化主要为肝胰脏和肾脏严重受损,发生颗粒变性、水泡变性和脂肪变性与溶解坏死.透射电镜下,肝细胞、肾小管上皮细胞内线粒体肿胀、嵴断裂、溶解;肾小球基底膜节段性增厚.     

砷中毒对大鼠纹状体神经细胞与肝组织的毒性和氧化应激作用

为研究NaAsO_2(亚砷酸钠)中毒对成年SD大鼠纹状体的神经细胞及肝脏形态学的影响,以及NaAsO_2中毒对SD大鼠神经毒性和肝毒性的作用,我们对染毒后的组织进行HE染色并观察。采用12周龄SD大鼠48只,体重200±20 g,随机分组:正常对照组(自由饮水),实验组按剂量递增方式分为低、中、高剂量NaAsO_2染毒组(按照5、10、20 mg/kg的比例配制蒸馏水,自由饮用),各组12只,均采用普通饲料喂养,建造染砷模型12周后取大鼠脑组织纹状体部分,常规石蜡切片后,HE染色,光镜观察大鼠纹状体神经细胞与肝结构的形态学是否发生改变,同时使用试剂盒检测纹状体与肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力(WST-1法)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)(微板法)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)(TBA法)的含量。结果显示,利用苏木素-伊红(HE)染色可见:NaAsO_2染毒组的纹状体神经细胞与对照组相比较,神经细胞胞体形态欠规则,数量稀疏且减少,胞浆内可见明显空泡样变,镜下可见坏死水肿的神经细胞。NaAsO_2染毒组的肝组织较正常组出现病理性改变:例如变性、坏死、组织出现水肿及炎性细胞浸润等,与对照组相比,各剂量NaAsO_2染毒组大鼠的纹状体组织及肝脏的SOD活力,GSH含量均降低,差异具有统计学意义(P0.05);与对照组比较,各剂量NaAsO_2染毒组大鼠的纹状体组织及肝脏的MDA含量均升高,差异具有统计学意义(P0.05)。由此可知,大鼠纹状体神经细胞形态结构及肝组织结构产生损伤可能由NaAsO_2导致其中毒,同时提示NaAsO_2致大鼠纹状体及肝组织的毒性作用可能与氧化应激相关。     

大鼠再生肝中糖元及双核细胞变化的研究

正常大鼠肝细胞中存有大量糖元.肝大部分切除12小时后,肝糖元下降至零或仅少量。手术后24小时,肝糖元开始上升,至2l天呈现正常水平. 再生肝的双核肝细胞减少,由正常的10.6％降至5.6％.大部分肝切除21天后,双核肝细胞的百分率回升到正常水平,同时再生作用也完成.     

幼龄和老龄SD大鼠肝、肾组织中生化指标变化的研究

目的研究过氧化脂质(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)在幼龄和老龄SD大鼠肝、肾组织中的变化,探讨此三种酶在机体衰老过程中的意义。方法21日龄和18月龄SD大鼠各10只,4℃取鼠肝、肾组织,用硫代巴比妥酸法测定LPO的含量;化学发光法测定SOD活力;DTNB直接法测定GSH-Px活力。结果幼龄SD大鼠肝、肾组织中LPO含量明显低于老龄鼠(P<0.01);SOD活力显著高于老龄鼠(P<0.01);GSH-Px的活力明显低于老龄鼠(P<0.01)。结论LPO、SOD、GSH-Px在幼龄和老龄鼠中有显著的变化,对机体衰老过程的研究具有指标意义。     

铜、锌、镉对锯缘青蟹仔蟹代谢酶活力影响的实验研究

测定锯缘青蟹仔蟹（背甲宽 ３１.０±３．５ ｍｍ;背甲长 ２３．０±２．８ ｍｍ）暴露在次致死浓度的铜、锌、镉离子溶液下 ２４ ｈ后肝胰腺、鳃、肌肉碱性磷酸酶（ＡＫＰ）、谷雨转氨酶（ＧＰＴ）、谷草转氨酶（ＧＯＴ）的酶活性．结果表明：低浓度重金属使仔蟹酶活力提高,高浓度时又对酶活力有明显的抑制作用．三种金属中,铜、镉对酶活力影响作用较锌显著．三种受试组织中,肝胰腺酶活力最易受重金属影响．     

家兔球虫种类和肝艾美尔球虫内生殖各期虫体特征和组织病变

本文报告厦门地区家兔球虫计有11种,全系我省新记录,其中无余体艾美尔球虫(Eimeria irresidua)为我国首次记录。穿孔艾美尔球虫(Eimeria perforans)感染率最高达77.5％,肝艾美尔球虫(Eimeria stie-dae)致病性最强,可使病兔大批死亡。实验证明肝艾美尔球虫不能感染豚鼠,说明本虫有严格的宿主特异性。本虫的致病性不仅与感染卵囊强度有关,且与兔龄亦密切相关。感染7万卵囊组的发病率与死亡率均高。血检证明谷草转氯酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)活力在第13天最高,50天后又较近于对照组,而血清总蛋白低于对照组。切片中显示,感染3天后小胆管上皮细胞中有滋养体。第6天开始有裂体生殖,第13天达高峰。配子生殖见于感染后的第10天,第15天数量最多。感染后第21天开始排囊,高峰在第29-40天,组织的病变以第13至第15天最为显著,肝汇管区胆管和纤维广泛增生,形成大小不等的假小叶。25天后胆管上皮增生呈乳头瘤样。40天后肝脏产生胆汁性硬变。血清中酶活力的增高和组织中虫体大量的无性繁殖导致胆管上皮和肝细胞严重损害这是实验动物死亡的主要原因。     

肝抑素的研究Ⅰ——兔肝抑素对小鼠再生肝细胞DNA合成抑制的研究

一、本实验用昆明小鼠,按Higgins和Anderson方法进行肝大部切除后,以~3H-TdR同位素自显影为指标观察正常鼠肝及术后12、24、30、36、42、48、54、60、66、72小时再生肝中DNA的合成。结果证明:昆明小鼠~3H-TdR DNA合成有两个峰。第一峰的高峰在术后36～42小时,第二峰的高峰在术后66小时。二、本室采用兔肝为材料,按Sekas方法,略加改变的肝提取液是一种易溶于水的、分子量为1000～10000之间的多肽和核酸降解产物的混合物,其水溶液为PH6的黄色透明液体。三、用本室所提的肝提取液对小鼠再生肝~3H-TdR DNA合成抑制作用进行了观察,再生肝细胞在术后30、36小时前注入提取液,分别有42％,43％抑制作用。四、提取液对舌上皮有24.4％的抑制作用,对十二指肠无明显抑制作用。五、本室的肝提取液对肝细胞有特异性抑制,说明有组织特异性,而无种族特异性(兔肝对鼠肝),但也有非特异性抑制作用,可认为是具有一定纯度的肝抑素。     

小花清风藤不同药用部位及溶剂提取物对四氯化碳致小鼠急性损伤的保护作用

观察小花清风藤不同药用部位及溶剂提取物对四氯化碳致小鼠急性损伤的保护作用.取昆明雄性小鼠共168只,随机分为21组,每组8只,即正常组、CCl_4模型组、水飞蓟素组、水提取组低、高剂量组、50%乙醇提取组低、高剂量组、95%乙醇提取组低、高剂量组.正常组灌胃给予等体积的0.5%羧甲基纤维素钠,其余组均按20mL/kg灌胃给予相应的药物,每日1次,连续7d,每天观察实验动物行为及体征,末次给药的次日,取材进行实验.取肝,计算肝脏的称量和质量指数,取肝组织匀浆检测肝组织中ALT、AST和SOD、GSH-Px活性及MDA含量,另取肝组织进行组织形态学分析.结果表明小花清风藤可减轻CCl_4对肝脏的脂质过氧化损伤,降低肝组织中ALT和AST活性,升高肝组织中SOD和GSH-Px水平,降低肝组织中MDA含量,从而减轻CCl_4对肝组织氧化损伤,改善肝脏的组织病理学形态,保护肝细胞并恢复肝功能.在小花清风藤水提取组低、高剂量组,50%乙醇提取组低、高剂量组,95%乙醇提取组中,以SJY作用效果比较好,依次是50%AJY、95%AJY、SJ、50%AJ、95%AJ、SY、50%AY、95%AY,且呈现明显的量效关系.小花清风藤对CCl_4致小鼠急性肝损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用有关.     

低氧对新生大白鼠肝和心肌组织LDH活性的影响

本文研究了在模拟低氧下，从出生至第28天的新生大白鼠的肝和心肌组织的LDH活性的变化。结果表明新生大白鼠肝组织LDH活性随模拟低氧时间的增长明显升高，而心肌组织LDH活性无明显变化。认为发育大白鼠LDH活性变化与组织缺氧程度有关。     

海洛因对仔鼠肝组织结构和抗氧化物酶活性的影响

为了探讨海洛因对仔鼠肝组织结构和抗氧化物酶活性的影响,选取60只昆明小鼠随机分为海洛因组和对照组组,用递增剂量(2,3,4 g·L-1)给海洛因组连续(1～5,6～10和11～15 d)腹腔注射海洛因溶液15 d(每次0.2 m L,每天2次),给对照组注射等量生理盐水,用比色法检测仔鼠血浆谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)活性和肝组织硫氧还蛋白还原酶(Trx R)、髓过氧化物酶(MPO)活性及丙二醛(MDA)含量的变化,用生物显微技术观察仔鼠肝组织结构的变化.结果显示,与对照组比较,海洛因组仔鼠血浆GOT,GPT活性均显著升高(P0.01),而肝组织Trx R活性显著降低(P0.01),肝组织MPO活性则显著升高(P0.05),肝组织MDA含量明显升高(P0.01),肝组织细胞出现不同程度的损伤.表明海洛因影响细胞抗氧化酶活性,对肝组织结构有明显的损伤作用.