变性剂和巯基修饰对黄精凝集素Ⅱ构象和活性的影响

采用圆二色谱、荧光光谱，研究了黄精凝集素Ⅱ（Polygonatum cyrtonema Hua.LectinⅡ,PCLⅡ）在4mol/L和6mol/L盐酸胍中，以及巯基修饰后，其活性和分子构象的变化关系，研究结果表明：PCL Ⅱ是一种稳定的蛋白质，巯基剂虽不影响其活性，但可使其分子构象发生变化，去除修饰剂后其结构部分能够恢复。在4mol/L盐酸胍中，PCL Ⅱ活性及构象可发生很大变化，去除盐酸胍后其活性恢复；6mol/L盐酸胍中，呈现典型的无规卷曲构象，活性完全丧失，去除盐酸胍后活性仍不能恢复，表明活性中心已遭到不可逆的破坏。     

变性剂和巯基修饰对黄精凝集素II构象和活性的影响

采用圆二色谱、荧光光谱,研究了黄精凝集素II(PolygonatumcyrtonemaHua.LectinII,PCLII)在4mol/L和6mol/L盐酸胍中,以及巯基修饰后,其活性和分子构象的变化关系.研究结果表明:PCLII是一种稳定的蛋白质,巯基修饰剂虽不影响其活性,但可使其分子构象发生变化,去除修饰剂后其结构部分能够恢复.在4mol/L盐酸胍中,PCLII活性及构象可发生很大变化,去除盐酸胍后其活性恢复;在6mol/L盐酸胍中,呈现典型的无规卷曲构象,活性完全丧失,去除盐酸胍后活性仍不能恢复,表明活性中心已遭到不可逆的破坏.     

温度和酸碱度对黄精凝集素Ⅱ生物学活性与构象的影响研究

采用圆二色谱和荧光光谱，研究了黄精凝集素Ⅱ(PCLⅡ)在不同温度及不同pH值时，其活性和分子构象变化的关系，结果表明：PCLⅡ具有较强的温度和酸碱度的耐受性，但在80℃，pH2，PH4和pH12时，其分子构象发生较大变化，活性也明显减弱．     

金属离子和变性条件对野花生豆凝集素活性和构象的影响

野花生豆凝集素在pH7．0和pH5．0缓冲体系中，用EDTA去除其金属离子，CML凝血活性下降．Ca^2 、Mg^2 、Mn^2 、Zn^2 可使去除金属离子CML活性基本恢复到天然水平，表明这些二价金属离子为CML活性所必需．研究不同温度和不同浓度盐酸胍条件下CML的圆二色谱、荧光光谱及其凝血活性的变化，结果表明CML含有较多β-折叠，具有较强的抗变性能力；脲变性的时间扫描荧光光谱证实了CML变性过程的阶段性。     

荧光淬灭作用研究黄精凝集素Ⅱ微环境与构象的关系

淬灭剂CsCl、KI、丙烯酰胺对黄精凝集素Ⅱ(Polygonatum cyrtonemaHua.LectinⅡ,PCLⅡ)内源荧光淬灭研究表明它们对凝集素分子的淬灭属动态淬灭机制.综合3种淬灭剂对黄精凝集素Ⅱ的淬灭效果,黄精凝集素Ⅱ中Tyr和Trp对中性淬灭剂丙烯酰胺的可接近程度分别达到88.5%和74.07%,而对阴离子淬灭剂KI为55.5%和66.7%,对阳离子淬灭剂CsCl均只有25%.表明黄精凝集素Ⅱ发射荧光的氨基酸残基大部分是位于分子表面疏水袋中,少部分埋藏于分子内部疏水环境中,且所有发荧光氨基酸所处微环境带正电荷的比例比带负电荷的比例大近一倍.     

温度、酸碱度和变性剂对黄花石蒜凝集素活性和构象的影响

采用荧光光谱研究了不同温度、pH和变性剂对黄花石蒜凝集素（Lycoris aurea agglutinin,简称LAA）凝血活性和分子构象的变化关系,结果表明：LAA具有较强的温度和酸碱度的耐受性,经过3种变性剂的处理都能使LAA分子构象发生不同程度的变化并导致活性的丧失,浓度为6 mol/L的盐酸胍和脲,20 mmol/L的SDS可以使LAA完全丧失凝血活性,荧光光谱的变化表明了这种变性过程具有阶段性.     

化学修饰对川泽泻凝集素生物学活性和构象的影响

用特异性化学修饰和荧光光谱的方法分析川泽泻凝集素(APL)活性位点氨基酸的分布情况.研究结果发现,色氨酸的化学修饰使活性降低80%,统计出每分子APL含有2个色氨酸残基,一个色氨酸位于凝集活性中心,另一个位于分子表面的疏水袋中,与凝集活性无关.精氨酸的化学修饰使活性降低50%,半胱氨酸的化学修饰使活性完全丧失.天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸/苏氨酸等化学修饰后凝集活性无明显变化.表明色氨酸、精氨酸和半胱氨酸对凝集素的凝集活性中心的构成起重要作用,天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸/苏氨酸等氨基酸位于凝集素的凝集活性中心附近,只是在维持凝集素分子的构象上具有一定的作用.     

变性剂对葡萄糖异构酶影响的光谱研究

利用圆二色性光谱和荧光光谱技术 ,对产自嗜热放线菌M 10 33菌株的葡萄糖异构酶受变性剂的影响进行了研究 .结果表明 ,受变性剂的影响 ,异构酶分子的构象发生了变化 ,其变化与异构酶活力的变化有明显的相关关系 .     

白芸豆凝集素的分子稳定性和光谱性质研究

经缓冲液抽提、CM-Sepharose、DEAE-Sepharose离子交换及Sephacryl S-200分子筛层析,从白芸豆种子纯化得到白芸豆凝集素(Phaseolus coccineus lectin,PCL)。SDS-PAGE和Sephacryl S-200凝胶过滤分析表明白芸豆凝集素是由两个30 kDa的单体组成的分子量约为56 kDa的同源二聚体蛋白。凝血活性结果表明白芸豆凝集素能凝集的兔血细胞和人ABO血型细胞,无血型专一性。其凝血活性在80 ℃以下和pH 3.0-10.0时保持稳定。脲、盐酸胍对PCL凝血活性的影响表明,随着变性剂浓度的升高,凝血活性逐渐丧失。不同温度、pH和不同浓度变性剂条件下PCL的荧光光谱分析表明PCL变性过程的阶段性。     

白芸豆凝集素的分子稳定性和光谱性质研究

经缓冲液抽提、CM-Sepharose、DEAE-Sepharose离子交换及Sephacryl S-200分子筛层析,从白芸豆种子纯化得到白芸豆凝集素(Phaseolus coccineus lectin,PCL).SDS-PAGE和Sephacryl S-200凝胶过滤分析表明白芸豆凝集素是由两个30 kD的单体组成的分子量约为56 kD的同源二聚体蛋白.凝血活性结果表明白芸豆凝集素能凝集的兔血细胞和人ABO血型细胞,无血型专一性.其凝血活性在80 ℃以下和pH 3.0~10.0时保持稳定.脲、盐     

黄精凝集素Ⅱ对大鼠主动脉Ca^2＋跨膜流动的影响

用４５Ｃａ跨膜流动技术测定黄精凝集素Ⅱ对大鼠主动脉Ｃａ２＋跨膜内流的影响．黄精凝集素Ⅱ在０．１～１０μｍｏｌＬ－１时,不影响静息状态下Ｃａ２＋的内流,但能抑制ＮＥ和ＫＣｌ引起的Ｃａ２＋内流,其抑制能力依赖于凝集素的浓度;在１０μｍｏｌＬ－１时,可完全阻滞ＮＥ引起的Ｃａ２＋增加,并能有效地阻滞ＫＣｌ引起的内流作用．表明黄精凝集素Ⅱ能阻滞细胞外的Ｃａ２＋通过受体操纵钙通道（ＲＯＣ）和电压依赖钙通道（ＰＤＣ）的内流     

黄牛肝菌凝集素的化学修饰与荧光光谱研究

对黄牛肝菌凝集素(Boletus fulvus lectin,BFL)进行氨基酸化学修饰,结果表明,Trp残基、Tyr残基及Ser/Thr残基的修饰都会对BFL的凝血活性产生影响,表明这些残基是BFL凝血活性所必需的,可能参与了其凝血活性中心的构成.而Arg残基修饰后,BFL的凝血活性未发生改变,表明Arg不是维持BFL凝血活性的必需基团.内源荧光光谱分析结果表明,BFL所发射的荧光是由Trp残基贡献的,且Trp残基在BFL分子中所处的微环境极性较弱,屏蔽于一定的构象当中.温度、pH值及变性剂对BFL内源荧光光谱的影响与基本理化性质的实验结果一致.氨基酸修饰对荧光光谱的影响表明,Trp残基修饰会引起BFL內源荧光光谱较大变动,而Tyr、Ser/Thr残基修饰对BFL內源荧光光谱影响不大.     

一支箭凝集素构象与生物学活性的关系研究

采用荧光光谱研究了一支箭凝集素(OPA)在不同温度,pH值以及不同淬灭剂作用时,其活性和分子构象变化的关系,结果表明:OPA具有较强的温度和酸碱度的耐受性,分子构象也无较大变化,但在pH 12时,其分子构象发生较大变化,活性也基本丧失.荧光淬灭剂丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对OPA中Trp淬灭程度达100%,KI淬灭约62.5%的Trp荧光.表明OPA发射荧光的氨基酸残基大部分位于分子表面,少部分位于分子内部疏水环境中,且发荧光氨基酸所处微环境带电荷.     

化学修饰对川木通凝集素活性及构象的影响

川木通干燥茎蛋白粗提液经DEAE-Sepharose离子交换柱和Sephacryl S-100分子筛分离后得到川木通凝集素(命名为CML）.Tricine SDS-PAGE分析表明CML的分子量为12.5 kDa, Sephacryl S-100分子筛分析CML的表观分子量为25.8 kDa,表明CML是由两个亚基组成的同源二聚体.过碘酸-希夫（periodic acid Schiff reacition,PAS）染色结果表明CML为糖蛋白,糖含量为12.2%.氨基酸残基修饰色氨酸（Trp）、精氨酸（Ar     

磁场对酶构象的影响

用荧光光谱法研究了在不同磁场强度、温度、介质和磁化时间下，磁场对乳酸脱氨酶、肌酸激酶、尿酶、超氧化物歧化酶构象的影响。发现磁场能影响酶的构象，但光谱变化与酶活力变化无一定规律，并对其可能的作用机制和原因作了初步探讨。     

磁场对纤维素酶的性及构象的影响

以羧甲基纤维素钠（CMC）为底物评价纤维素酶的活性,研究了不同条件下静磁场对酶的活性及构象的影响。9℃,pH4.0条件下磁化,其活性及荧光光谱均不同明显变化;但若改变反应时的pH,可使活性增加达16.4%;并发现磁处理后的酶有滞后效应及可逆性,较高温度下,磁化处理酶液,其活性及构橡均发生不同程度的变化,且对其抑制动力学 混合型抑制模式;其构象变化也基本上随失活的增加荧光强度增大。     

金属离子对三氯甲烷与DNA结合作用影响的研究

采用荧光光谱法,研究了金属离子与DNA,CHCl3与DNA间的结合作用,并在此基础上,进一步探讨了金属离子对三氯甲烷与DNA结合作用的影响.结果表明,三氯甲烷与DNA作用时,其紫外光谱的最大吸收峰均产生位移,且具有明显的减色效应,同时也能猝灭溴乙锭(EB)-DNA体系的荧光,表明三氯甲烷以插入方式与DNA产生结合.金属离子对CHCla与DNA结合的影响主要取决于金属离子与DNA结合的类型及强弱.与DNA碱基结合能力越强的金属离子,在竞争反应中能够降低CHCl3与DNA的结合;与磷酸基团结合能力强的金属离子,能够促使CHCl3与DNA的结合.     

双金属Hg2+和Cu2+对木瓜蛋白酶活性与构象的影响

研究双金属Hg2+和Cu2+对木瓜蛋白酶活性与构象的影响.利用FT-IR、荧光发射以及紫外吸收光谱探讨Hg2+和Cu2+处理与木瓜蛋白酶二级结构变化的关系.研究结果表明:金属离子与木瓜蛋白酶活性之间存在剂量-效应关系,表现出低剂量促进,高剂量抑制的Hormesis现象.低浓度下,双金属Hg2+和Cu2+表现出协同激活效应;高浓度下,Cu2+的添加屏蔽了Hg2+的抑制作用.双金属离子浓度为10-6 mol/L Hg2+和10-8 mol/L Cu2+时,对酶的激活效应最大,其处理的木瓜蛋白酶的有序结构(α-螺旋和β-折叠)含量最高,二级结构最稳定,酶与底物亲和力最强,活性最高.当双金属离子浓度为10-4 mol/L Hg2+和10-4 mol/L Cu2+时,其抑制力最强,处理的木瓜蛋白酶有序结构含量最低,二级结构破坏,活性最低.木瓜蛋白酶分子构象的有序度与其活性呈正相关.     

乙醇对大肠杆菌碱性磷酸酶活性与构象的影响

常用有机试剂乙醇作为效应物对大肠杆菌碱性磷酸酶（ＥＡＰ）活性影响状态作用机制进行了研究．结果表明,ＥＡＰ酶活性随着乙醇浓度增大而迅速下降,说明乙醇对 ＥＡＰ有明显的失活作用,ＩＣ５０为１３％．关于乙醇对 ＥＡＰ失活作用机制的研究表明,乙醇对 ＥＡＰ的失活作用是以非竞争性机制模式进行的．应用荧光光谱研究 ＥＡＰ经乙醇微扰后的分子构象变化,发现 ＥＡＰ的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强,说明酶蛋白分子中的荧光发色基团所处微环境已经发生变化,乙醇对 ＥＡＰ分子构象存在显著影响．