变性剂和巯基修饰对黄精凝集素Ⅱ构象和活性的影响

采用圆二色谱、荧光光谱，研究了黄精凝集素Ⅱ（Polygonatum cyrtonema Hua.LectinⅡ,PCLⅡ）在4mol/L和6mol/L盐酸胍中，以及巯基修饰后，其活性和分子构象的变化关系，研究结果表明：PCL Ⅱ是一种稳定的蛋白质，巯基剂虽不影响其活性，但可使其分子构象发生变化，去除修饰剂后其结构部分能够恢复。在4mol/L盐酸胍中，PCL Ⅱ活性及构象可发生很大变化，去除盐酸胍后其活性恢复；6mol/L盐酸胍中，呈现典型的无规卷曲构象，活性完全丧失，去除盐酸胍后活性仍不能恢复，表明活性中心已遭到不可逆的破坏。     

用蛋白内源荧光考察溶液pH对PSⅡ两种外周蛋白构象的影响

借助278nm和295nm激发的内源荧光光谱分析，考察不同pH值缓冲液中23kD、17kD蛋白构象变化．结果表明：295nm波长光激发时，23kD蛋白具有326nm荧光发射峰和360nm副峰；17kD蛋白具有328nm荧光发射峰和355nm副峰；278nm波长光激发时，23kD和17kD蛋白的最大荧光发射峰均在306nm处．与中性条件下相比，酸性(pH3．0～4．0)或碱性(pH8．0～9．0)缓冲液中，23kD蛋白和17kD蛋白的内源荧光光谱都发生显著变化：最大荧光峰位置和强度均不相同，340nm-360nm荧光发射副峰的强度增加．反映溶液中两种蛋白的构象易发生改变，离子键和氢键是维系23kD、17kD蛋白构象的重要因素之一。     

水稻巯基蛋白酶抑制剂的圆二色谱研究

水稻巯基蛋白酶抑制剂(CPI)圆二色性谱(CD)显示206nm和222nm处的双负峰,CPI分子以α 螺旋构象为主;当CPI与木瓜蛋白酶等摩尔结合后,CPI完全丧失抑制活性,复合物CD谱发生显著变化,α 螺旋含量降低.CPI具有较高的结构稳定性,但在100℃处理时间延长以及pH向酸碱两极变化时,其CD谱发生较大改变,α 螺旋含量减少;而抑制活性仅在pH>9时逐渐下降,在酸性条件下保持不变.用不同试剂修饰CPI分子中的巯基和二硫键,CPI的活性不受影响;DTT、PCMB修饰CPI,其CD谱发生显著变化,NEM修饰CPI,其CD谱变化甚微.4mol/L的脲中,CD谱仅显示206nm负峰、214nm和225～235nm处新的负肩,并在240～250nm之间出现新的负峰,分子中无规卷曲增加,CPI活性未受影响;经NBS修饰,CPI分子中α 螺旋减少,无规卷曲增加较多,CPI完全丧失抑制活性.     

变性剂和巯基修饰对黄精凝集素II构象和活性的影响

采用圆二色谱、荧光光谱,研究了黄精凝集素II(PolygonatumcyrtonemaHua.LectinII,PCLII)在4mol/L和6mol/L盐酸胍中,以及巯基修饰后,其活性和分子构象的变化关系.研究结果表明:PCLII是一种稳定的蛋白质,巯基修饰剂虽不影响其活性,但可使其分子构象发生变化,去除修饰剂后其结构部分能够恢复.在4mol/L盐酸胍中,PCLII活性及构象可发生很大变化,去除盐酸胍后其活性恢复;在6mol/L盐酸胍中,呈现典型的无规卷曲构象,活性完全丧失,去除盐酸胍后活性仍不能恢复,表明活性中心已遭到不可逆的破坏.     

荞麦花粉肽及其类似物的合成、结构和免疫活性研究

用Merrifield固相法合成了荞麦花粉肽BPP-1及其类似物BPP-1-3,BPP-1-4和BPP-2。通过FT-IR和CD谱初步讨论了BPP-1的二级结构,结果表明其水溶液构象属于无规卷曲和 β-折叠,但在三氟乙醇中,CD谱在206nm和222nm附近呈双负峰形,分子形成了α-螺旋构象。研究了BPP-1,BPP-1-3和BPP-2对动物和人淋巴细胞的增殖应答功能和抑制释放sIL-2R的作用,结果显示它们具有较强的促免疫活性。     

玉竹凝集素的氨基酸残基修饰与荧光光谱研究

玉竹凝集素（POL)的最大荧光发射峰位于328 nm处,比游离色氨酸(Trp)的最大荧光发射峰（348 nm）蓝移了近20 nm,说明Trp周围的极性较弱,处于疏水的微环境.化学修饰表明色氨酸和酪氨酸与其凝集活性无关.羧基的修饰导致活性降低60%,表明Asp/Glu是构成其凝血活性中心的必需氨基酸或是位于活性中心附近.二硫键的修饰使其活性丧失,表明二硫键是维持其活性中心的关键化学键.Lys残基的修饰凝血活性降低40%,表明该残基与其活性中心相关.组氨酸残基的专一性修饰导致凝血活性的完全丧失,表明组氨酸是构     

用蛋白内源荧光法考察盐溶液中两种外周蛋白构象的变化

作者借助由278nm和295nm光源激发的蛋白质内源荧光分析，考察了在几种盐溶液(甲醇和NaCl，NaCl，脲，三氯乙酸，CaCl2)中23kD，17kD蛋白构象的变化。结果表明，由295nm波长的光激发时，17kD蛋白荧光发射峰位于328nm处和360nm附近，这表明大部分17kD蛋白的Trp^71处于分子内部；23kD蛋白具有326nm荧光发射峰，表明23kD蛋白所含2个色氨酸残基(Trp^34和Trp^168)处于其分子内部的疏水部位。CaCl2、脲、NaCl、三氯乙酸、甲醇和NaCl对17kD和23kD外周蛋白的内源荧光都有影响，其中CaCl2、甲醇和NaCl的影响较大，脲、NaCl的影响相对较小，这反映了两种蛋白在溶液中的构象易发生改变。     

乙醇对鲍鱼碱性磷酸酶活力与构象的影响

以乙醇为效应物研究对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力影响的结果表明．酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降，乙醇浓度40％可使酶活力完全丧失．说明乙醇对鲍鱼ALP有明显的失活作用，JG50为13％．含较低浓度乙醇(30％)的失活过程是可逆的反应．测定乙醇对酶的失活作用机理．结果表明乙醇对鲍鱼ALP的失活作用是非竞争性机制，说明底物存在不影响乙醇对酶的失活作用．应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALP经乙醇微扰后的分子构象变化，发现乙醇对酶分子构象有显的影响，酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强．荧光发射峰逐渐发生红移．紫外吸收光谱在276nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强．这些结果表明．酶蛋白分子中的生色基团残基的微环境发生变化．     

钒化合物与胰岛素的结合扰动胰岛素的构象和聚集状态

运用荧光光谱、圆二色散(CD)及Fourier变换红外光谱(FT-IR)等谱学方法研究了不同钒化合物与去锌胰岛素的相互作用.结果表明,钒化合物NaVO 3 、VO(acac) 2(bis(acetylacetonato)oxovanadium)和VO(ma) 2 (bis(maltolato)oxovanadium)都能与胰岛素结合,在20℃下的表观结合常数依次为(0.17±0.01)×10 4 ,(2.8±0.2)×10 4 和(4.0±0.1)×10 4 L@mol -1 .钒化合物的作用使源于酪氨酸残基的蛋白质自身荧光发生静态淬灭;同时280nm处的散射峰强度减弱,提示钒化合物的作用使胰岛素趋向解聚,且CD谱273nm峰减弱也支持胰岛素的解聚.另外,钒化合物使胰岛素FT-IR谱中1650～1653cm -1 处出现新峰,此峰代表胰岛素B链中的B(9-19)肽段的α-helix结构,它的出现表明胰岛素从伸展的构象(T状态)向螺旋构象(R状态)的改变.总之,钒化合物与去锌胰岛素结合后,可导致去锌胰岛素的解聚,同时诱导胰岛素从T→R的构象转变,这些作用可能是钒化合物使胰岛素与其受体结合力增强的一个原因.     

猪胰蛋白酶及其自溶活性产物的圆二色性研究

用圆二色性谱(CD谱)研究了猪胰蛋白酶及其自溶活性产物在溶液中的构象,并观察了在十二烷基硫酸钠(SDS)溶液中酶分子构象的变化。 猪胰蛋白酶的CD谱显示有相当量的α-螺旋成份及少量β-折叠成份,它在190nm附近的[θ]值远大于牛胰蛋白酶。其自溶活性产物的CD谱显示α-螺旋的成份减少5—6％,β-折叠成份上升3—6％,而有序部分所占比例基本不变,提示自溶后α-螺旋转化为β-折叠。 在SDS溶液中,α-螺旋和β-折叠在胰蛋白酶分子中所占的比例提高,而α-螺旋成份增加更为明显,表明酶分子的有序度提高。 参照Chou与Fasman以及Chen,Yang与Martinez等人的方法,预测猪胰蛋白酶有36％的氨基酸残基可以形成α-螺旋,由实测CD谱计算,亦在37％左右,两者相符。     

化学修饰对川泽泻凝集素生物学活性和构象的影响

用特异性化学修饰和荧光光谱的方法分析川泽泻凝集素(APL)活性位点氨基酸的分布情况.研究结果发现,色氨酸的化学修饰使活性降低80%,统计出每分子APL含有2个色氨酸残基,一个色氨酸位于凝集活性中心,另一个位于分子表面的疏水袋中,与凝集活性无关.精氨酸的化学修饰使活性降低50%,半胱氨酸的化学修饰使活性完全丧失.天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸/苏氨酸等化学修饰后凝集活性无明显变化.表明色氨酸、精氨酸和半胱氨酸对凝集素的凝集活性中心的构成起重要作用,天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸/苏氨酸等氨基酸位于凝集素的凝集活性中心附近,只是在维持凝集素分子的构象上具有一定的作用.     

文昌鱼酸性磷酸酶在甲醇溶液中的构象与活力变化

文昌鱼酸性磷酸酶（ＡＣＰａｓｅ，Ｅ．Ｃ３．１．３．２）是一种含有铁离子的金属酶，其可见光谱中５００ｎｍ的吸收峰以及荧光５１５ｎｍ的发射峰为该酶分子含铁的特征峰，与酶活力关系密切．通过荧光发射光谱和紫外可见光谱对该酶在不同浓度甲醇溶液中的构象与活力变化进行研究．不同浓度（Ｖ／Ｖ）的甲醇对酶活力有明显的抑制作用，动力学分析表明甲醇对酶的抑制为非竞争性抑制，其抑制常数为２０％．还研究了在甲醇存在下ＡＣＰａｓｅ活力中心的构象与活力变化，结果表明其构象变化快于活力变化．     

十二烷基硫酸钠对猕猴桃蛋白酶的变性作用

应用光谱法观测酶的结构变化,紫外差光谱显示在233nm有一较明显的差吸收负峰,在286nm、300nm左右有不大的负峰和在265nm的正峰;荧光谱显示327nm的相对荧光强度随SDS浓度的增高而递减;发射峰位置红移,酶受SDS>4.1mmol/1作用1h,可引起310nm新荧光发射肩。动力学资料表明,SDS对酶的变性过程为一级反应;酶的失活分快慢相,呈现二个一级反应,同时测定在SDS作用下actinidin的变性与失活速度,表明酶的失活速度大于变性速度,似可认为低浓度SDS能使结构域相错开,从而敏感地改变活性部位的微区结构,导致酶快速失活,提高SDS浓度则使酶的结构域发生构象变化,引起光谱法所显示的特征。     

Se(Ⅳ)与藻蓝蛋白相互作用的谱学研究

用吸收、荧光、红外等谱学方法研究了藻蓝蛋白（PC）与Se（Ⅳ）的相互作用．结果表明,SeO3^2-加入后,藻蓝蛋白在620nm处的特征光吸收减弱,并随Se（Ⅳ）浓度和时间的增加而降低,而278和347nm处的光吸收增强;荧光发射和荧光激发也逐渐减弱,而599和629nm处的2个激发峰的相对强度与对照相反．PC在475和662nm处分别出现共振散射峰．Se（Ⅳ）与PC的作用后,在595nm处出现强的共振散射峰,被指认为液相纳米硒粒子与PC生成的缀合物的共振散射峰．红外光谱图中,PC的酰胺Ⅰ带为1653．2cm^-1,为α螺旋,而PC—Se（0）生物缀合物的酰胺Ⅰ带为1647．0cm^-1,属无规则卷曲。     

温度、酸碱度和变性剂对黄花石蒜凝集素活性和构象的影响

采用荧光光谱研究了不同温度、pH和变性剂对黄花石蒜凝集素（Lycoris aurea agglutinin,简称LAA）凝血活性和分子构象的变化关系,结果表明：LAA具有较强的温度和酸碱度的耐受性,经过3种变性剂的处理都能使LAA分子构象发生不同程度的变化并导致活性的丧失,浓度为6 mol/L的盐酸胍和脲,20 mmol/L的SDS可以使LAA完全丧失凝血活性,荧光光谱的变化表明了这种变性过程具有阶段性.     

几种盐类对光系统Ⅱ33kD锰稳定蛋白溶液构象的影响

借助内源荧光和圆二色谱分析，考察了几种不同的盐溶液（CaCl2,NaCl,脲，三氯乙酸、二硫苏糖醇）对水溶液中33kD蛋白构象的影响，以295nm波长的乐激发时，33kD蛋白具有330nm的荧光发射峰，表明33kD蛋白所含唯一的^241Trp位于分子内部的疏水部位，CaCl2、脲、三氯乙酸或二硫苏糖醇的存在，均会改变33kD蛋白的内源荧光的强度和位置，而NaCl几科无影响，脲、二硫苏糖醇对33kD蛋白的二级结构的影响较大，因此维系33kD蛋白构象的主要因素包括：二硫键、疏水作用、范得华力和氢键，而离子键的贡献较小。     

雪山豆(Phaseolus sp.)凝集素的纯化与其部分性质

本文报导从雪山豆种子中分离纯化凝集素与其部分性质.种子磨粉、浸取,经硫酸铵分级,再以Sephadex G—150疑胶过滤纯化而得.所得样品经聚丙烯酰胺盘状电泳鉴定,为单一蛋白带.以糖蛋白染色法鉴定,该凝集素为糖蛋白。它具有凝集动物红细胞和促淋巴细胞有丝分裂的活性.     

h—SOD在脲、胍变性剂中的光谱学特征

研究了人血超氧化物歧化酶（h-SOD)在脲、胍及不同温度下变性的分子构象与活力之间的关系。酶的吸收光谱与酶活力的变化表明：当用不同的变性剂处理后,酶蛋白的空间结构发生了改变,紫外吸收表现出明显的增色效应;酶的荧光强度随脲浓度的增加有所增加随胍浓度的增加明显下降,在4mol/L胍变性条件下,h-SOD的发射峰自337nm红移到353nm,且酶活力明显下降。据此结果推测：酶活力的下降与构象的改变是同步发生的。     

长毛对虾碱性磷酸酶功能基团的研究

用对－氯汞苯甲酸修饰该酶分子中的巯基，酶活力不受影响，说明该酶不是“巯基酶”．用Ｎ溴代琥珀酰亚胺修饰酶后，活力完全丧失，修饰后的酶在２７５ｎｍ处的紫外吸收峰完全消失，３４０ｎｍ处荧光发射峰也逐渐下降至完全淬灭，说明色氨酸残基是酶活性必需基因之一．用甲醛、醋酸酐修饰氨基，溴代乙酸修饰咪唑基也可以使酶活力完全丧失，说明赖氨酸残基及组氨酸残基也是酶活性功能基因．用乙酰丙酮修饰精氨酸残基，酶活力下降了５０％，精氨酸残基可能与维系酶分子构象有关．     

麦冬凝集素的氨基酸修饰和荧光光谱研究

通过对麦冬凝集素（OJL）进行特殊氨基酸的化学修饰，揭示了OJL所含的6个Trp残基只有1个位于蛋白表面，Trp、Tyr和Ser/Thr不是OJL凝集活性所必需的氨基酸，而Arg是维持其活性的必需基团.OJL在天然状态下荧光发射峰在328 nm处，Trp周围的极性较弱，处于疏水的微环境或Trp的吲哚环有特殊的构象.丙烯酰胺可以淬灭93.46%的色氨酸荧光，而CsCl和KI淬灭的程度较小，分别为41.25%和55.56%，证明Trp主要位于疏水环境.