心血池显像剂99mTc-HYNIC-HSA的合成及小鼠生物分布研究

合成了双功能联结剂肼基烟酰胺（HYNIC），经过了^1HNMR的确认。用HYNIC与人血清白蛋白（HSA）偶联，经过透析纯化后得到HYNIC－HSA。用SnCl2作为还原剂，EDTA作为共配体所制得的^99mTc-HYNIC-HSA的放化纯度高于90％。其小鼠体内生物分布实验表明^99mTc-HYNIC-HSA在血液内的摄取和滞留情况明显优于其他方法标记的HSA，与已用于临床的^99mTc-DMP-HSA相似，是一种很有潜力的新型心血池显像剂。     

心血池显像剂^99mTc—DMP—HSA的研究（Ⅱ）——^99mTc—DMP—HSA与^99mTc—HSA的生物性能比较

分别制备了标记率高于90％的^99mTc－DMP－HSA,^99mTc标记的未修饰的HSA以及预还原的HSA,并对其进行了小鼠体内生物分布的测定,结果表明^99mTc－DMP－HSA在血液内的取和滞留情况显优于其他方法标记的HSA,是一种很有潜力的新型心血池显像剂。     

甲硝唑衍生物混配配合物明^99mTcN（PNP5）（MN—cys—OS）的制备及生物性能研究

合成了一种新的含甲硝唑药效团的双功能配体：2-[3-（2-甲基5硝基咪唑基）丙酰胺基]-3巯基丙酸（MN—cysOS），并与[^99mTcN]警中间体反应，制备得到一种^99mTcN核标记的混配配合物：^99mTcN（PNP5）（MN—cys-OS），其标记率大于95％．研究表明^99mTcN（PNP5）（MN—cys—OS）为电中性、脂溶性配合物（P=3．17±0．06），具有较好的体外稳定性．正常昆明小鼠体内生物分布研究结果显示该配合物具有很快的肝、血清除性能，进一步的荷MA891肿瘤小鼠研究显示其具有一定的乏氧选择性，但肿瘤摄取较低．     

心血池显像剂99mTc-DMP-HSA的研制(Ⅰ)--DMP-HSA的合成及99mTc标记

合成了双功能联结剂2，3－二巯基丙酸（DMP）的前体N－琥珀酰亚胺基－2，3－二－S－乙酰硫代丙酸酯（SATP），经过了NMR，IR，MS的验证确认，用SATP与人血清白蛋白（HSA）偶联，去除巯基的保护并经过SEC（分子筛析色谱）纯化后制得DMP－HSA，采用紫外分光光度计在280nm处监控收集蛋白，并用Ellman方法测定每个蛋白分子上偶联的巯基数目，用SnCl2作为还原剂，所制得的99mTc-DMP-HSA的标记率高于90％。     

用In－111通过1B4M－DTPA标记单克隆抗体的研究

研究了双功能联接剂１－（４－异硫氰基苄基）－４－甲基二乙三胺五乙酸（１Ｂ４Ｍ－ＤＴＰＡ）与抗体偶联反应以及用Ｉｎ－１１１标记偶联物的条件，得到了体内外稳定的Ｉｎ－１１１标记抗体；用高纯Ｉｎ－１１１通过１Ｂ４Ｍ－ＤＴＰＡ标记了抗胃癌单抗３Ｈ１１，标记抗体免疫活性保持完好，放射性比活度为２．０×１０￣（１１）Ｂｑ／ｇ；荷瘤裸鼠注射标记物２４ｈ后，即得到靶目标的清晰显像，１６８ｈ的瘤／肝放射性比值为２．０。     

不同中心核锝99m标记CPeI配合物的制备与生物分布

以环戊胺为原料，通过甲酰胺化和脱水2步反应制得配体环戊基异腈(CPeI)，对其进行了熔、沸点测定，红外和元素分析等表征，并通过不同方法进一步得到3种不同中心核的^99mTc标记配合物：^99mTc-CPeI，^99mTcN—CPeI和^99mTc(CO)3—CPeI.3种配合物均为脂溶性，在室温下放置6h以上放化纯无明显变化。在正常昆明小鼠体内进行的生物分布实验结果表明：3种配合物均有一定的心肌摄取，但肝本底均较高；^99mTc(CO)3—CPeI的肺摄取要明显低于^99mTc-CPeI和^99mTcN—CPel，且清除速度也相当快；^99mTc—CPeI的血本底相对较低且清除最快，^99mTc(CO)3—CPel次之，^99mTcN—CPeI的血本底最高且清除最慢，3种配合物生物分布的显著差异显示了不同中心核对配合物生物性能的影响，因此可以利用已知配体通过不同标记方法制得具有不同中心核的配合物，这也是一条寻找新的^99mTc标记放射性药物的有效途径。     

适于99mTc(CO)3标记的叶酸衍生物的合成

以叶酸为原料，采用蝶蛉叠氮化合物与谷氨酸甲酯反应生成单一的γ羰基偶联产物，在此基础上再合成一种适合于^99mTc?28CO)3标记的叶酸衍生物，并用^1HNMR,^13CNMR和MS对产物进行了分析研究．     

~(99m)Tc间接标记单克隆抗体的研究

以NHS MAG3为双功能连接剂 ,采用先标记后偶联的方法 ,研究了用99mTc标记单克隆抗体的各种实验条件 ,得到了最佳标记方法和偶联方法 .标记抗体99mTc NHS MAG3 IgG体外稳定性良好 .进行了99mTc NHS MAG3 CL3在小鼠体内的生物分布测定 .结果表明 ,该配合物在小鼠体内稳定性良好 ,在胃、肠、心中摄取最低 ,在肾 ,肝中摄取最高 .     

99mTc-MAMA-UA与99mTcN-MAMA-UA的制备及生物性能的比较

首次制备了2种脂肪酸标记物^99mTc-MAMA-UA与^99mTcN-MAMA-UA，放化纯均大于90％。对标记物进行了小鼠的生物分布实验，结果表明二者都有一定的心肌摄取；^99mTc-MAMA-UA的心肌初始摄取要大于^99mTc-MAMA-HA。这说明碳链的适当增长会改变^99mTc-MAMA-FA（fatty acid）的生物分布。     

99mTc-EHIDA肝胆显像对先天性胆道闭锁的诊断价值

目的：评价^99mTc－EHIDA肝胆显像诊断先天性胆道闭锁（BA）的临床价值。方法：对14例（其中5例最终诊断为BA，9例最终诊断为非BA）临床上有持续性黄疸的亲生儿及婴儿，进行^99mTc－EHIDA肝胆显像检查，并经手术病理和临床随访结果证实。结果：在5例最终诊断为BA的新生儿及婴儿中，^99mTc－EHIDA肝胆显像全部检出（100％），灵敏度、特异度和准确性分别为100％、88．9％、92．9％。结论：^99mTc－EHIDA肝胆显像是一种无创、安全、有效的检查方法，对于BA的诊断，有较高的临床价值。     

^99mTc直接标记单克隆抗体3H11及其在小鼠体内分布的研究

对二硫苏糖醇（ＤＴＴ）为抗体还原剂，亚锡ＭＤＰ药盒为弱交换配体，进行了＾９９ｍＴｃ直接标记ＭｃＡｂ３Ｈ１１的研究。用ＨＰＬＣ分析鉴定标记物，标记率大于９５％，标记后不需纯化。体外竞争实验和在小鼠体内分布的研究表明，由标记得到的＾９９ｍＴｃ－３Ｈ１１和＾９９ｍＴｃ－ＩｇＧ，在体内和体外均是稳定的。     

通过二（半胱氨酰）赖氨酸用￣（99m）Tc标记生物素

生物素（ｂｉｏｔｉｎ）和亲和素（ａｖｉｄｉｎ）具有很强的亲和力，这一特性可以被用于改进放免显像的预定位技术。本文阐述了利用一种新的含硫含氮配体Ｌ－Ｎ－Ｎ′－二（半胱氨酰）赖氨酸（ＢＣＬ）作为联接剂，用￣（９９ｍ）Ｔｃ标记生物素的方法。初步研究的结果表明，标记物具有较好的体内外稳定性，可以进一步用于抗肿瘤单抗预定位，再注射能与亲和素结合的放标生物素进行肿瘤显像。     

一种高效制备高特异性高亲和力单克隆抗体的工具--无抗原小鼠的培育

目的　为了寻找一种新的高效制备高特异性高亲和力单克隆抗体的工具 ,提高工作效率 ,增强诊断试剂科学性和准确性。方法　利用无菌隔离器技术 ,无抗原饲料 (由氨基酸、碳水化合物、维生素、必需矿物质、植物油等组成的分子量小于 80 0 0的化合物 )喂养无菌小鼠 ,将无菌小鼠培育成无抗原小鼠。结果　经ELISA方法检测该小鼠血清中IgG的含量 ,其含量是CV和GF小鼠的 5 % - 10 %。结论　无抗原技术已完全成熟 ,无抗原小鼠培育成功。由于该无抗原小鼠未接受过外源性抗原的刺激 ,可利用该动物制备高特异性、高亲和力的单克隆抗体     

人白血病抑制因子（hLIF）单克隆抗体的制备与鉴定

 为了获得抗人白血病抑制因子（hLIF）单克隆抗体,以重组hLIF蛋白为抗原,免疫Balb/c小鼠,采用传统的小细胞融合、无限稀释法制备了10株杂交瘤的腹水hLIF抗体,并对腹水进行了纯化.腹水粗品抗体经rProteinA一步亲和层析法纯化和鉴定后,抗体分子量都符合抗体的特性,抗体的纯度都达到了96.6%以上,抗体亲和常数在1.89×10-9~1.51×10-12mol/L,其中1B8a、5C1b、5G4a细胞株制备的抗体属于高亲和力抗体,可以对其的应用进行进一步的研究和探讨.     

褪黑素单克隆抗体的制备及鉴定

为了获得抗褪黑素(MT)高效价的单克隆抗体,用甲醛将MT连结到BSA上,然后用连结物背部皮下多点免疫Balb／c小鼠,用PEG诱导免疫鼠脾细胞与Sp2／0细胞融合,经ELISA法筛选阳性克隆株及测定效价,用抗体与同类物之间的交叉反应进行特异性鉴定．最后获得5株(4C9D7、3E12C7H11E7、3E12A9D7、6A6A3A2C3、1E1E2H2H6)能稳定分泌高效价抗MT的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞。     

抗人骨桥蛋白单克隆抗体制备及其特异性研究

利用RT-PCR技术克隆人骨桥蛋白(hOPN)基因,构建OPN原核表达质粒pET-32a(+)-hOPN,转化BL21菌株,经IPTG诱导表达重组人骨桥蛋白(rhOPN).以纯化的rhOPN为免疫原,免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合.通过有限稀释法进行克隆和间接ELISA筛选,获得抗人OPN蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,以ELISA、Western blot对抗体特异性进行鉴定.通过竞争抑制试验对单克隆抗体识别抗原位点进行分析.结果共获得2株抗人OPN单克隆抗体,分别命名为8F1和2B5,亚型测定皆为IgG1.通过细胞侵袭抑制试验检测,2株抗人OPN mAb皆能很好地抑制细胞迁移.本研究成功获得了抗人骨桥蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究OPN蛋白在自身免疫病和肿瘤中的功能提供了重要的工具.     

BALB／c小鼠选择与腹水产量和抗体效价间关系的研究

目的观察在鼠疫F1单克隆抗体制备过程中,BALB／c小鼠的选择和饲养与所获腹水量和抗体效价的关系,为大量制备该单克隆抗体提供实验室参考依据。方法根据小鼠周龄、性别和饲养条件对BALB／c小鼠进行分组,并采用动物体内诱生法制备腹水,间接ELISA用来检测腹水中F1单克隆抗体效价。结果12～16周龄组、雄性和加强营养组小鼠所获腹水产量和效价均高于其它周龄组和对照组。结论选择适当周龄的雄性小鼠、饲养过程中加强营养和管理可适当提高腹水产量和抗体的效价。     

心肌肌钙蛋白I-C复合物酶联免疫检测方法的建立

为了制备抗人心肌肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体、建立检测人cTnI链酶亲和素-生物素双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,用基因工程表达的人cTnI免疫雌性BALB/c小鼠,以杂交瘤技术制备得到三株特异性抗人cTnI的单克隆抗体记为6G3,6A6,3G9.三株杂交瘤细胞中6G3和6A6为IgG1,3G9为IgG2b,腹水效价分别为4×10-5,4×10-5和10-5.亲和常数为5.0×109,6.4×109和3.8×109mol-1.Westernblotting结果表明6G3和6A6能够识别cTnI-C复合物.把6G3抗体生物素化并制备抗cTnI、cTnC和cTnI-C的大鼠多克隆抗体.以多抗作为固相捕捉抗体,生物素化6G3抗体作为检测抗体,建立检测cTnI的双抗体夹心ELISA方法并初步应用于临床病人标本检测.以cTnI-C复合物多抗捕捉检测方法具有良好的灵敏度、特异性和准确性,灵敏度为0.9ng/mL,较包被其他抗体捕捉方法提高1~2倍.批内变异系数为5.03%,回收率为94.56%.测定17例AMI病人和18例血清样本临床诊断结果符合率为100%.     

Immunization to a syngeneic sarcoma by a monoclonal auto-anti-idiotypic antibody

Idiotypic networks regulate the immune response to a variety of antigens. Antibodies generated against other antibodies, called anti-idiotypic antibodies, can themselves mimic antigen and elicit a specific immune response. They have been shown to induce delayed-type hypersensitivity (DTH) to model antigens in the mouse. As anti-idiotypic antibodies are thought to be involved in the response to tumour-associated antigens we tested whether injection of monoclonal antibodies derived from mice hyperimmunized to a syngeneic, chemically induced sarcoma could mimic antigen and induce DTH to the sarcoma in naive mice. One of the monoclonal antibodies, 4.72, primed BALB/c mice for DTH to the sarcoma but not for DTH to another sarcoma or to sheep erythrocytes. Antibody 4.72 did not induce DTH in mice of immunoglobulin allotype congeneic strains nor did it bind to the sarcoma cells. As antibodies specific for this sarcoma have not been detected, we do not know whether idiotype on immunoglobulin molecules is recognized by antibody 4.72. However, as the response induced by antibody 4.72 was both antigen-specific and allotype-restricted, analogous to those induced by anti-idiotypic antibodies in other systems, we propose that antibody 4.72 is an anti-idiotypic antibody.